高效液相色谱法测定舒冠片中淫羊藿甙含量

【摘要】  ［目的］ 建立舒冠片中淫羊藿甙的含量测定方法. ［方法］ 采用高效液相色谱法，使用依利特SinoChrom ODS-BP色谱柱，以75mmol/L磷酸盐缓冲液-乙腈（72∶28）为流动相，流动量为1.0mL/min，检测波长为270nm. ［结果］ 淫羊藿甙在0.49～1.96μg之间与峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0.9990），平均加样回收率为99.23%，RSD为2.87%. ［结论］ 应用高效液相色谱法测定舒冠片中淫羊藿甙含量具有灵敏度高，数据准确，专属性强，重现性好等特点，可作为舒冠片的质量控制方法.

【关键词】  淫羊藿甙 色谱法 高压液相 植物 药用

    舒冠片是由川芎、制何首乌、黄精（制）及淫羊藿等7味中药制成的纯中药制剂，具有养阴活血及益气温阳作用，用于预防与治疗冠心病、心绞痛、动脉粥样硬化及高脂血症等疾病.淫羊藿为舒冠片中的主药，具有温肾壮阳、益精气及强筋骨等功效，主要活性成分为黄酮类成分淫羊藿甙.舒冠片原标准（卫生部颁布标准WS 3 -B-1653）中仅对舒冠片进行了化学鉴别和薄层色谱鉴别，为提高产品的定量控制水平，本研究采用高效液相色谱法对舒冠片中淫羊藿甙的含量进行了测定，旨在建立舒冠片中淫羊藿甙的含量测定方法.

    1 材料

    仪器:LC-10AT高效液相色谱仪及CLASS-LC10色谱工作站均为日本岛津公司产品.试药:淫羊藿甙对照品供含量测定用，批号为0773-9910，由中国药品生物制品检定所提供;舒冠片按卫生部颁布标准WS 3 -B-1653收载的制备方法自制，批号分别为040911，040912，040913，040914，040915;甲醇和乙腈为高效液相色谱纯;其他试剂均为分析纯.

    2 方法与结果

    2.1 色谱条件  采用依利特SinoChrom ODS-BP（5μm，4.6mm×250.0mm）柱，柱温度为25℃，流 动相为75mmol/L磷酸盐缓冲液（用三乙胺调整pH值为4.5）-乙腈（72∶28），流动量为1.0mL/min，检测波长为270nm.

    2.2 对照品溶液的制备  精密称取淫羊藿甙对照品9.8mg置于100mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，质量浓度为98mg/L.

    2.3 供试品溶液的制备  取供试品内容物2.0g，精密称定，置50mL容量瓶中，加入甲醇40mL，放置12h，超声处理20min，加入甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取滤过液作为供试品溶液.

　　2.4 系统适用性试验  分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各20μL，注入液相色谱仪中，结果如图1A，B.理论塔板数按淫羊藿甙峰计算，均不低于3000.

    2.5 阴性对照品溶液的制备及测定  为进一步考察实验设计及测定方法的可行性，取不含淫羊藿的处方，按制备工艺制成缺淫羊藿的阴性对照品，再按照2.3项下方法制备阴性对照品溶液.精密吸取20μL注入到液相色谱仪中，进行测定，结果表明阴性对照品的色谱图在淫羊藿甙相应的保留时间附近几乎无干扰峰（图1C），提示本法专属性较强.

    2.6 线性关系考察  分别取20.0，17.5，15.0，12.5，10.0，7.5，5.0μL淫羊藿甙对照品溶液（98mg/L），注入到高效液相色谱柱内，按2.1项下的色谱条件进行测定，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为

Y=2×10 6 X-48384，r=0.9990，表明进样量在0.49～1.96μg范围内时与峰面积积分值呈良好的 线性关系.

    A:对照品溶液;B:供试品溶液;C:阴性对照品溶液 图1 对照品、供试品及阴性对照品溶液色谱图

　　 2.7 精密度试验  分别精密吸取淫羊藿甙对照品溶液20μL，重复进样5次，测定峰面积积分值，结果见淫羊藿甙峰面积积分值分别为2806654，1689130，2785092，2706679，2751351，RSD为1.82%，表明本实验所使用仪器精密度良好.

    2.8 稳定性试验  取同一供试品溶液，分别放置0，1，2，3，12h后精密吸取20μL进行测定，淫羊藿甙峰面积积分值分别为1572596，1576898，1591451，1612602，1662919，RSD为2.30%，表明本方法处理得到的样品溶液在12h内稳定.

    2.9 重现性试验  取同一批样品，制备5份供试品溶液，进行测定，计算淫羊藿甙的含量，结果表明淫羊藿甙含量的平均值为1.017mg/g，RSD为2.36%，表明本方法重现性良好.

    2.10 加样回收率试验  精密称取已知含量的样品（040912，1.02mg/g）共5份，分别精密加入淫羊藿甙对照品适量，制备5份供试品溶液，依法测定含量，计算回收率，见表1.结果可见，本方法准确度较高，方法可行.

    2.11 样品含量测定  对5批样品，分别按2.3项下方法制备供试品溶液，每批2份，分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各20μL，依法测定并计算含量，结果批号分别为040911，040912，040913， 040914，040915样品中的淫羊藿甙含量分别为1.07，1.04，0.95，0.94，1.01mg/g.表1 回收率试验结果

    3 讨论

    取淫羊藿甙对照品甲醇溶液，采用紫外分光光度法在波长为200～500nm范围内进行扫描，见在270nm处有最大吸收，因此选择270nm为检测波长.考察提取方法时，用甲醇和700mL/L乙醇为提取溶剂，见用甲醇提取时杂峰较少，且提取率较高.曾选择甲醇-0.5mL/L冰醋酸水溶液（30∶70） ［1］ 、75mmol/L磷酸盐缓冲液（用三乙胺调整pH值为4.5）-乙腈（72∶28） ［2］ 及水-乙腈（70∶30） ［3］ 作为流动相进行过实验，结果示75mmol/L磷酸盐缓冲液-乙腈（72∶28）分离效果较好.

【参考文献】
  ［1］ 刘霞，杨远明，蔡敏芝，等.HPLC测定舒宁片中淫羊藿甙含量［J］. 中成药， 2003，25（11）:936.

［2］ 屠颖，赵陆华，相秉仁，等.抗敏胶囊主要成分的HPLC 法分析［J］. 中国药科大学学报， 2002，33（5）:404.

［3］ 孙明玉，李明炬.高效液相色谱法测定骨力胶囊中淫羊 藿甙含量的研究［J］. 贵州医药， 2004，28（6）:558.