高效液相色谱法测定疱疹康喷剂中盐酸小檗碱的含量

【摘要】  目的 建立疱疹康喷剂中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，Betasil C18柱作色谱柱，流动相为乙腈水冰醋酸三乙胺（体积比28∶70∶1∶1），检测波长为265 nm，柱温：30 ℃。结果 盐酸小檗碱在0.1026～1.0260 μg范围内呈良好线性关系，r=0.9998，最低定量限为0.1026 μg，平均回收率为103.81％，RSD为0.78％，中间精密度RSD为0．97%。结论 所建立的方法可准确，快速地测定疱疹康喷剂中盐酸小檗碱的含量，可用于该制剂的质量控制。

【关键词】  疱疹康喷剂　盐酸小檗碱　高效液相色谱法　含量测定

　　Abstract:Objective  To establish a method for determining the content of berberine hydrochloride in Paozhenkang spray.  Methods  Berberine hydrochloride  in the spray was analyzed by HPLC (Betasil C18 column, acetonitrilewaterglacial acetic acid triethylamine (28∶70∶1∶1) as mobile phase , detection wavelength 265 nm, column temperature 30 ℃). Results The linear range of berberine hydrochloride was 0.1026～1.0260 μg (r=0.9998) and the detection limit 0.1026 μg with the average recovery 103.81％ (RSD 0.78%). Conclusion  An analytical method is established to measure the concentration of berberine hydrochloride, which could be used for the quality control of Paozhenkang spray.

　　Key words: Pozhenkang spray; berberine hydrochloride; HPLC

　　疱疹康喷剂由黄连、大黄、升麻、山慈姑等药物组成，是临床经验方。具有抗带状疱疹病毒作用，促进带状疱疹、褥疮和湿疹康复,缓解由此引起的神经痛。黄连为本方中主要药物，盐酸小檗碱是其主要有效成分［1-5］，为了更好地控制疱疹康喷剂的内在质量，本文采用HPLC法测定该制剂中盐酸小檗碱的含量，获得了满意的结果，报道如下。

　　1  仪器与试药
   
　　LC2010A高效液相色谱仪（日本岛津），乙腈（HPLC级），冰醋酸，三乙胺，水（超纯水）。盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110713-200208），疱疹康喷剂（自制，批号20060809、20060910、20061010）。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件
   
　　采用Betasil C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相为乙腈水冰醋酸三乙胺（体积比28∶70∶1∶1）［6］；流速为1.0 mL·min-1；检测波长为265 nm；柱温为30 ℃；进样量为10 μL。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4 000。

　　2.2  溶液的制备

　　2.2.1  对照品溶液
   
　　精密称取经五氧化二磷减压干燥的盐酸小檗碱对照品适量，置25 mL量瓶中，用甲醇使溶解并稀释定容至刻度，混匀，精密量取1 mL，用甲醇稀释定容至5 mL量瓶中，作为对照品溶液（每1 mL含盐酸小檗碱53.1 μg）。

　　2.2.2  供试品溶液
   
　　精密吸取本品1 mL，用盐酸甲醇（体积比1∶100）混合溶液稀释定容至50 mL容量瓶中，作为供试品溶液。

　　2.2.3  阴性对照品溶液
   
　　按处方比例依法配制除黄连以外的阴性制剂，精密吸取1 mL，用盐酸甲醇（1∶100）混合溶液稀释定容至50 mL容量瓶中，作为阴性对照品溶液。

　　2.3  专属性考察
   
　　依上述色谱条件，分别注入对照品溶液，供试品溶液，阴性对照品溶液，结果见图1。测定结果显示阴性对照色谱中，盐酸小檗碱峰附近无其他峰影响。

　　A.盐酸小檗碱对照品; B.样品; C.阴性对照

　　图1  疱疹康喷剂的HPLC图（略）

　　Fig.1  HPLC chromatogram of Paozhenkang spary

　　2.4  线性关系的考察
   
　　分别精密吸取盐酸小檗碱对照品（0.0531 mg·mL-1）2、4、8、12、16、20 μL，以峰面积(A)对进样量(m)进行线性回归，得回归方程：A=125.2138m-9.2696，r=0.9998。盐酸小檗碱在0.1026～1.0260 μg范围内呈良好线性关系。最低定量限为0.1026 μg。

2.5  重复性试验
   
　　取本品5份，依次定容，进样，记录色谱图，5份样品的盐酸小檗碱含量的RSD为1.6%。结果表明重复性良好。

　　2.6  精密度试验
   
　　取同一对照品溶液，分别重复进样5次，测定。结果盐酸小檗碱峰面积积分值RSD为0.80%（n=5）。结果表明精密度良好。

　　2.7  中间精密度
   
　　以重复性试验所得含量的平均值作为第一检验员所测定的数据，另选两名检验员于不同日期进行含量测定，每个样品测定2次，结果算得中间精密度为（98．00±0．86)%，RSD为0．97%。研究结果表明，中间精密度符合规定。

　　2.8  稳定性试验
   
　　精密吸取同一供试品适量，在室温下于2，8，16，24，48 h，分别进样，并测定峰面积。结果RSD为1.20%，表明样品溶液在48 h内稳定性良好。

　　2.9  加样回收率试验
   
　　精密吸取本品0.5 mL，加盐酸小檗碱（0.0531 mg·mL-1）5 mL，按照“供试品溶液” 项下方法进行处理样品及测定，计算回收率，结果见表1。

　　2.10  样品含量测定
   
　　取3个批号样品（批号20060809、20060910、20061010），按“2.2.2”项方法制备供试品溶液，进样测定，结果3个批号样品的盐酸小檗碱含量分别为0.50、0.48、0.49 mg·mL-1。

　　表1  加样回收率试验(recovery test)（略）

　　Tab.1  Recovery test of berberine hydrochloride

　　3  讨论

　　3.1  将色谱柱更换为Hypesil BDS C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)及Agilent  TC  C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，再将柱温变成25 ℃及35 ℃，结果理论塔板数和峰形均良好。

　　3.2  本品为液体制剂，所以选择了直接用盐酸甲醇（体积比1∶100）混合溶液稀释定容，操作简便，回收率高。

　　3.3  2000年版中国药典采用薄层扫描法测定盐酸小檗碱含量，我们也曾用薄层扫描法进行测定，但精密度较差。作者参考2005年版中国药典的条件：乙腈水冰醋酸三乙胺（体积比34∶64∶1∶1），进行测定，但分离度不佳，峰形不好，改用本试验条件。

　　3.4  本实验中所用黄连药材盐酸小檗碱含量为3.9%，转移率为56%。

【参考文献】
 ［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005版一部［S］.北京：化学工业出版社，2005: 214，410.
［2］ 杨熊志.RPHPLC法测定胃泰胶囊中盐酸小檗碱的含量［J］.广东药学院学报，2006,22(2):155-156.
［3］ 张春辉，杨钊，单秀明，等.高效液相色谱法测定消幽胶囊中盐酸小檗碱的含量［J］.中药新药与临床药理，2007，18(1):62-63.
［4］ 李生有.HPLC测定利舒康胶囊中盐酸小檗碱的含量［J］.中国药师，2007,10(4):320-321.
［5］ 吴杏卿，何瑞卿，李海燕，等.RPHPLC法测定固经丸中盐酸小檗碱的含量 ［J］.广东药学院学报，2005,21(5):530-531.
［6］ 李艳荣，蒋晔，郝福，等.RPHPLC同时测定功劳去火片中栀子苷、黄芩苷及盐酸小檗碱的含量［J］.中成药，2006，28(8)：1126-1129.