高效液相色谱法测定柴胡颗粒中黄芩苷含量

　　【摘要】目的建立高效液相色谱法测定柴胡颗粒中黄芩苷含量的方法。方法采用超声法提取柴胡颗粒中黄芩苷,用高效液相色谱法测定其含量。结果本方法线性方程为:A=-53503.25+2417844.56C（r=0.999）,线性范围10.32～103.2mg/ml,精密度试验:RSD=0.87%（n=5）;平均加样回收率为98.72%。结论HPLC法可作为柴胡颗粒中黄芩苷含量测定方法,本实验为该产品的质量控制提供了实验依据。

　　【关键词】高效液相色谱;柴胡颗粒;黄芩苷

　　柴胡颗粒制剂是由柴胡、姜半夏、黄芩、党参、干草、生姜、大枣等组成的复方制剂,具有解表散热、疏肝和胃功能,用于寒热往来、胸胁苦满、心烦喜吐、口苦咽干等症状。本方中黄芩为君药,其主要成分为黄芩苷,为了更好地控制该药的生产质量,本文建立了高效液相色谱法测定柴胡颗粒中黄芩苷含量的方法［1］,结果表明,该方法简便,灵敏度高,重现性好。现报告如下。

　　1 仪器与试剂

　　1.1仪器大连依利特高效液相色谱仪,LIV230+紫外-可见检测器,EC2000色谱数据处理系统;AB204-N电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）;CQ-250超声波清洗器（上海必能信超声仪器有限公司）;0.45μm过滤膜。

　　1.2试剂黄芩苷标准品（中国药品生物制品检定所）;柴胡颗粒（昆明云健制药有限公司提供）;甲醇为色谱纯,水为双蒸水,其他试药均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1色谱条件色谱柱:HypersilODS2柱（5μm,250mm×4.6mm）;流动相:甲醇:水:磷酸=47:53:0.2,柱温:25℃;流速:1.0ml/min;进样量10μl;理论踏板数按黄芩苷计不低于3000。在此条件下,黄芩苷能与其他组分达到基线分离。

　　2.2标准品溶液制备精密称取黄芩苷对照品适量,加70%的甲醇溶解制成每毫升含50μg的溶液。

　　2.3供试品溶液的制备精密量取柴胡颗粒制剂2.3g（含黄芩苷5mg）,置100ml容量瓶中,加入70%甲醇约50ml,超声30min,静置放冷。用70%甲醇定容至100ml,摇匀,经滤器过滤,取续滤液作为供试品液;另按处方工艺制备不含黄芩的阴性样品,按样品液制备方法制成阴性样品溶液［2］。

　　2.4干扰性试验分别取黄芩苷对照品溶液、样品溶液和阴性对照溶液，各进样10μl测定。结果表明阴性对照品未呈现与对照品保留时间相同的色谱峰,对测定无干扰。

　　2.5样品含量测定

　　2.5.1线性关系考察精密称取黄芩苷对照品10.32mg,置100ml容量瓶中,加70%甲醇溶液溶解至刻度,摇匀,分别精密量取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml置10ml量瓶中加70%甲醇至刻度，摇匀。分别精密量取以上5种浓度溶液10μl注入高效液相色谱仪进行测定。得回归方程：A=-53503.25+2417844.56C（r=0.999）,表明黄芩苷进样量在10.32～103.2mg/ml范围内，峰面积和进样量具有良好的线性关系。

　　2.5.2精密度试验精密吸取50μg/ml溶液10μl，重复进样5次，测定黄芩苷峰面积，RSD为0.87%,表明仪器的精密度良好。

　　2.5.3稳定性试验取同一样品溶液10μl，分别于0、1、2、4、6、8、12、24h进样测定，各峰面RSD为1.81%（n=8）。结果表明黄芩苷在24h内稳定。

　　2.5.4重现性试验取同一样品，按“2.3”项方法操作，重复测定6次，计算黄芩苷的含量为2.17mg/g，RSD为1.62%。表明方法重现性良好。

　　2.5.5加样回收率试验称取已知含量的柴胡颗粒制剂（含量为2.17mg/g）2.3g,按“2.3”项方法配制样品溶液。分成12分，每4分一组，分别加入黄芩苷标准品适量，计算回收率为98.72%。

　　2.5.6样品含量测定精密称取6批次柴胡颗粒样品，按“2.3”项方法制备样品溶液，分别进样10μl，按上述色谱条件设定，以峰面积计算黄芩苷含量，其结果依次为：2.23mg/g、2.19mg/g、2.26mg/g、2.13mg/g、2.15mg/g、2.17mg/g。

　　3讨论

　　3.1供试品溶液的制备有研究曾采用以碱水提取,酸化后以乙酸乙酯萃取,挥干溶剂,加定量甲醇溶解后进样的方法进行测定,但处理过程繁琐。柴胡颗粒的主辅料为蔗糖,以甲醇为溶剂,经超声法提取,提取液颜色较浅,经滤过后可直接进样。

　　3.2测量方法的选择中成药中黄芩苷的测定方法很多,如分光光度法、薄层扫描法、二阶导数光谱法等。高效液相色谱法以其速度快、方法简便、准确性高、重现性好、分离效果好等优点,更适合制剂中黄芩苷含量测定。

　　3.3流动相的选择不同文献对多种类型和不同比例的流动相进行了反复的实验比较，结果表明：以甲醇:水:磷酸=45:55:0.2为流动相，保留时间长，柱效较高，分离效果佳。

　　【参考文献】
　　1王凯祥,陈圆晰.高效液相色谱法测定小柴胡冲剂中黄芩昔含量.中国现代应用药学,1999,16（2）:47.

　　2王薇,覃贝.高效液相色谱法测定芩连颗粒中黄芩苷的含量.中国药物与临床,2008,8:662-663.