高效液相色谱法测定咪康唑酊的含量

　　【摘要】目的建立高效液相色谱法测定咪康唑酊含量的方法。方法采用Shim-packCLC-ODS十八烷基硅烷键合硅胶柱(6.0mm×150mm，5μm),柱温30℃，以乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵溶液（42.55∶42.55∶15）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为230nm。结果在40~800μg/ml浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数为0.9997。平均回收率为99.87%，RSD为0.46%。硝酸咪康唑与其他杂质峰的分离度均符合要求。结论本方法简便专属，准确可靠，适用于咪康唑酊的质量控制。

　　【关键词】高效液相色谱法；咪康唑酊；含量测定

　　【Abstract】ObjectiveToestablishapracticalreversed-phasehighperformanceliquidchromatographymethodtodeterminemiconazoletincture.MethodsAShim-packCLC-ODSC18column(6.0mm×150mm，5μm)wasadoptedandthecolumntemperaturewasmaintainedat30℃.Themobilephasewasamixtureofacetonitrile-methanol-0.5%ammoniumacetate(42.5:42.5:15)andtheflowratewas1.0ml/min.Thedetectionwavelengthwasat230nm.ResultsThecalibrationcurveswerelinearwithintherangeof40~800μg/ml(r=0.9997)respectively.Theaveragerecoveriesofmiconazolenitratewere99.87%respectively,relaredstandarddeviation(RSD)were0.46%.TheresolutionbetweentherespectivepeaksofMiconazoleNitrateandtheotherpeaksconformedtotherequirements.ConclusionThismethodissimple,sensitive,accurate,andsuitableforthequalitycontrolofmiconazoletincture.

　　【Keywords】HPLC；Miconazoletincture；Determination

　　咪康唑酊是医院临床常用的外用制剂,其主要成分为硝酸咪康唑。硝酸咪康唑具有广谱抗真菌作用，具有抗皮肤真菌、酵母菌活性，对某些革兰氏阳性球菌和杆菌也有效。咪康唑对皮肤真菌和酵母菌感染中常出现的瘙痒症状具有非常迅速的作用,其作用机制为此药与真菌细胞膜结合，能抑制真菌麦角甾醇的生物合成，从而改变细胞膜脂质成分的组成，改变了真菌细胞的通透性从而发挥其抗真菌的作用。咪康唑的局部用药可用于治疗皮肤念珠菌病、念珠菌外阴阴道炎、体癣、股癣、足癣、花斑癣等[1]。外用可治疗皮肤癣菌引起的浅部真菌感染,经过20余年的使用，其临床疗效已得到广大患者的认可。本制剂中的主要辅料二甲基亚砜（DMSO）作为硝酸咪康唑的溶媒，能充分溶解硝酸咪康唑，同时也是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性，有助于药物向人体渗透，可见使用咪康唑酊比搽咪康唑霜或硝酸咪康唑乳膏(达克宁)疗效要快，效果要好。原标准仅有性状和鉴别等质量控制项目，没有含量测定项[2]，国内外文献也未见报道。为了控制咪康唑酊的质量，确保该制剂的疗效，本研究以处方中的主要有效成分硝酸咪康唑为定量控制指标，参照中国药典2005年版采用反相高效液相色谱法测定咪康唑酊的含量，方法简便专属，准确可靠，精密度和稳定性均良好[3]。

　　1 仪器与试药

　　Waters2695型高效液相色谱仪(美国Waters公司)，Waters2996型PDA检测器，Empower数据处理系统；乙腈、甲醇为色谱纯，醋酸铵为分析纯；水为超纯水（南京易普易达科技发展有限公司纯水机生产）；硝酸咪康唑对照品(中国药品生物制品检定所，批号100213-200705，105℃干燥2h后使用，含量为99.7％)；咪康唑酊(某疾病预防控制中心，批号为070312，070313，070314，070927，071028)。

　　2 方法与结果

　　2．1色谱条件色谱柱Shim-packCLC-ODS十八烷基硅烷键合硅胶柱(6.0mm×150mm，5μm)；流动相为乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵溶液（42.55∶42.55∶15），流速为1.0ml/min；检测波长为230nm；进样量为20μl；柱温为30℃。理论塔板数按硝酸咪康唑峰计算不低于2000。

　　2．2对照品溶液与供试品溶液的制备

　　2．2．1对照品溶液取硝酸咪康唑对照品105℃干燥2h，精密称定适量，置50ml量瓶中，加甲醇适量振摇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取适量置量瓶中，加甲醇制成1ml含0.4mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。

　　2．2．2供试品溶液精密量取本品2ml（相当于硝酸咪康唑40mg），置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

　　2．2．3空白对照溶液以相同的处方比例，制得不含硝酸咪康唑的空白样品。按“2．2．2”项下方法制成空白对照溶液。

　　2．2．4测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl按“2．1”色谱条件注入液相色谱仪进行分析，根据色谱峰面积，以外标法计算样品含量。结果表明供试品色谱图中呈现与硝酸咪康唑对照品保留时间相应的色谱峰，而空白对照无干扰。见图1。

　　2．3线性关系考察精密称取硝酸咪康唑对照品40mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密量取对照品贮备液1，1，2，5，8，10ml分别置20，10，10，10，10，10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，进样，记录峰面积。以对照品浓度（C）为横坐标，以峰面积(A)为纵坐标进行线性回归，得回归方程为A=4.304×104C+1.171×105，r=0．9997。结果表明硝酸咪康唑在40~800μg/ml范围内线性关系良好。

　　2．4精密度试验精密量取线性关系考察项下的对照品贮备液4，5，6ml，分别置于10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下，分别连续进样5次，记录色谱图。结果峰面积的RSD(n=5)分别为0．62％，0．35％，0．71％。表明该方法精密度良好。

　　2．5稳定性试验将对照品溶液及供试品溶液室温放置，分别在0，1，2，4，6，8h进样20μl测定1次，结果表明对照品溶液及供试品溶液在8h内峰面积无明显变化，RSD均小于1．5％。溶液在8h内基本稳定。

　　2．6重复性试验精密量取同批号样品6份，按“2．2．2”项下方法操作,制得6份同批样品的供试品溶液，各吸取20μl进样，计算含量，RSD为0．83％，结果表明重现性较好。2．7回收率试验精密量取同一已知含量样品(批号为070312)适量加甲醇制成每毫升含4mg的溶液，精密量取1ml共6份分别加入10ml的量瓶中，再分别精密加入上述对照品贮备液(803μg/ml)1．0,2．0，3．0，4．0，5．0，6．0ml，照“2．2．2”项下操作，并按“2．1”色谱条件测定。结果见表1，平均回收率为99．87％，RSD为0．46％(n=6)。

　　3 样品测定

　　按“2．2”项下方法制备供试品溶液，进样测定咪康唑酊(批号为070312，070313，070314，070927，071028)中硝酸咪康唑含量，色谱图见图1，含量测定结果见表2。五批样品中硝酸咪康唑的标示百分含量均在95.0％~105.0％范围内，RSD均小于1．5％。见表2。

　　4 讨论

　　本文所述反相高效液相色谱法简便专属，不受辅料及其他成分影响。

　　咪康唑酊的乙醇含量对硝酸咪康唑的溶解、成品的性质稳定以及治疗效果等有重要影响。为保证该制剂的质量，制备过程中应注意乙醇浓度，而且要严格操作，一定要先把硝酸咪康唑溶解在处方量的二甲基亚砜中，如果不能完全溶解，那就采用长时间振荡溶解的办法，只有当硝酸咪康唑完全溶解于二甲基亚砜后，才能加入甘油、乙醇等。

　　咪康唑酊应是澄明液体,久置后易发生变化,如成品颜色和含量的变化、溶剂浓度的变化、臭和味的变化、产生沉淀等，所以，一般将其分装在棕色玻璃容器中，密封贮藏于阴凉处[4]。

　　参考文献

　　［1］国家药典委员会.临床用药须知（化学药与生化药卷）.人民卫生出版社,2005：12.

　　［2］南京市医院制剂规范,1989：9.

　　［3］国家药典委员会.中国药典.化学工业出版社,2005.

　　［4］中国医院制剂规范.中国医药科技出版社,1994.

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