气相色谱法测定注射用辛芍冻干粉针有机溶剂残留量

　　【摘要】目的建立以气相色谱法测定注射用辛芍冻干粉针中的有机溶剂乙醇、正丁醇残留量的方法。方法采用内标法顶空进样，以FFAP毛细管柱（30 m×0.53 mm，1 μm）为色谱柱，柱温为60℃，载气为氮气，柱前压20 kPa，进样口温度为220℃，FID检测器，检测器温度为250℃，空气流速500 ml·min-1，氢气流速50 ml·min-1。结果乙醇、正丁醇分别在2.5～240 μg·ml-1（r =0.999 6），0.5～48 μg·ml-1（r =0.999 9）的浓度范围内呈良好的线性关系。平均回收率分别为乙醇100.6% (RSD=2.7%),正丁醇102.2%(RSD=3.3%)。结论该方法重复性好，定量准确，便于操作。

　　【关键词】  气相色谱； 注射用辛芍冻干粉针； 残留溶剂； 乙醇； 正丁醇

　　Determination of Residue Organic Solvents in Xinshao Freeze-dried Powder Injection by Gas Chromatography

　　YANG Xianjiong, WANG Yonglin,WANG Aimin,LAN Yanyu,LI Yongjun, HE Xun

　　(Guiyang Medical College, Guiyang 550004,China）

　　Abstract：ObjectiveTo determine the contents of the residual solvents including ethanol and n-butanol in Xinshao Freeze-dried Powder Injection by GC. MethodsWith Head-space injection,  FFAP capillary column（30 m×0.53 mm，1μm）was used at 60℃. Nitrogen was used as carrier gas , the column inlet pressure was 20 kPa. The temperature at the injection port and the FID detector were 220℃ and 250℃, respectively. The flow rate of air and hydrogen was 500 ml·min-1 and 50 ml·min-1.ResultsEthanol, n-butanol showed a good linear relationship over the range of 2.5～240 μg·ml-1（r =0.999 6）and 0.5～48μg·ml-1（r =0.999 9,with a mean recovery of ethanol 100.6%(RSD=2.7%), n-butanol 102.2%(RSD=3.3%) respectively. ConclusionThe method is reproducible,precise and simple.

　　Key words：GC；  Xinshao Freeze-dried Powder Injection；  Residual solvents；  Ethanol ；  N-butanol

　　注射用辛芍冻干粉针是由灯盏细辛和赤芍经提取纯化制成的中药冻干粉针剂，属于中药新药，具有活血化淤、通经活络的功效。近年来，药品中残存的有机溶剂的毒性和致癌作用日益引起重视。由于该中药新药为血管内给药的注射用冻干粉针，且在生产工艺中使用了乙醇和正丁醇这两种有机溶剂，为保障药物的质量和用药安全，根据目前新药审批对有机溶剂残留量的要求，必须对其残留量进行研究和控制。为进一步评价注射用辛芍冻干粉针用药的安全性，本文根据《中国药典》［1］的规定，在参考有关文献［2～4］的基础上建立了顶空气相色谱法同时测定注射用辛芍冻干粉针残留有机溶剂的方法，以期有效地控制残留溶剂含量。

　　1  仪器与试药

　　日本岛津-14B气相色谱仪，氢火焰离子化检测器；WML色谱工作站(南宁威玛龙色谱科技公司)；精密恒温循环水浴（控温精度±0.2℃，重庆银河试验仪器有限公司）；超声波清洗机(250  W，29～34 kHz；北京医疗设备二厂)。高纯氮气(99.99%)，氢气(99.99%)。注射用辛芍冻干粉针（批号：20051010，20051017，20051019）由贵阳医学院药物研究所提供。正丙醇、无水乙醇、正丁醇等均为分析纯，水为重蒸水。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件以FFAP毛细管柱（30 m×0.53   mm，1 μm）为色谱柱分析制剂中残留乙醇、正丁醇，采用顶空进样法测定，顶空平衡温度70℃，平衡时间40 min，柱温60℃，载气为氮气，柱前压20 kPa，进样口温度为220℃，检测器温度250℃，空气流速500 ml·min-1，氢气流速50 ml·min-1，进样体积0.5 ml。

　　2.2  内标物溶液的制备  精密称取正丙醇适量，用0.5%氢氧化钠溶液制成每毫升含50 μg的溶液，即得。

　　2.3  对照品溶液的制备  分别精密称取无水乙醇和正丁醇适量，加内标溶液制成每毫升含乙醇50 μg和正丁醇1 μg的对照品溶液。

　　2.4  供试品溶液制备  取本品1.0 g，置顶空瓶中，精密称定，精密加内标液10 ml，摇匀，即得。

　　2.5  系统适用性实验  分别取对照品溶液、供试品溶液5 ml，置10 ml顶空瓶中，在70℃循环水浴中，恒温40 min，抽取顶空瓶中气体0.5 ml注入气相色谱仪，在上述色谱条件下测定，记录色谱(图1) ，在本条件下乙醇、正丙醇（内标物）和正丁醇峰分离良好，无杂质峰干扰。

　　图1  两种有机溶剂残留测定气相色谱图（略）

　　2.6  最低检出限　将对照品溶液逐步稀释，测得溶液中乙醇和正丁醇的最低检出限分别为0.5 μg·ml-1和0.1 μg·ml-1（S/N=3），换算到样品中乙醇和正丁醇的最低检出限分别为5μg·g-1和1μg·g-1。

　　2.7  线性关系考察  准确称取正丁醇25.1 mg，无水乙醇125.3 mg，置250 ml量瓶中，加内标液溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液；精密量取对照品储备液0.25，0.5，1，2，6，12，24 ml分别置50 ml量瓶中，加内标液溶解并稀释至刻度，摇匀，分别取上述对照品工作液5 ml，置10 ml顶空瓶中，在70℃水浴中，恒温40 min，抽取顶空瓶中气体0.5 ml注入气相色谱仪，以对照品峰面积与内标峰面积比为纵坐标(Y)，以对照品浓度为横坐标(X)，进行线性回归，乙醇回归方程：Y=0.021 7X-2.39×10-3,r =0.999 6，线性范围：2.5～240 μg·ml-1；正丁醇回归方程：Y＝0.071 2 X＋7.55×10-3,r =0.999 9，线性范围：0.5～48 μg·ml-1。

　　2.8  重复性实验  取同一批号样品9份，分别按供试品溶液制备方法制备供试液，照上述色谱条件分别进样，结果乙醇和正丁醇峰面积与内标峰面积比值的RSD分别为0.77%和4.1%。

　　2.9  中间精密度实验  相隔两天对同一供试品中乙醇和正丁醇进行测定,结果乙醇和正丁醇峰面积与内标峰面积比值的RSD分别为0.85%和4.5%。不同日期、不同分析人员分析结果的相对标准偏差小于5%。

　　2.10  回收率的测定  取已测定乙醇、正丁醇含量的制剂供试品（乙醇：882.4 μg·g-1，正丁醇：7.787 μg·g-1）0.25 g，精密称定，加乙醇和正丁醇适量，照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，进行测定。结果见表1～2。

　　表1  乙醇回收率实验结果（略）

　　2.11  样品测定  取批号为20051010，20051017，20051019的样品，按上述相同方法和条件进行有机溶剂残留量检测。结果见表3。从样品检测结果可见，乙醇残留量小于0.12%，正丁醇小于15 μg·g-1。本品中乙醇和正丁醇远远低于ICH和《中国药典》（2005年版）规定限度（乙醇和正丁醇限度均为0.5%）。

　　3  讨论

　　由于辛芍冻干粉针是固体粉末，采用顶空进样既避免了难挥发物质对进样口衬管和色谱柱的污染，又增加了灵敏度，非常适合于挥发性有机溶剂残留的分析。

　　表2  正丁醇回收率实验结果（略）

　　表3  样品测定结果（略）

　　实验中考查了不同样品溶液平衡温度和平衡时间对测定结果的影响，结果乙醇和正丁醇的峰面积随着平衡温度和平衡时间的增加而增大，但随平衡温度和平衡时间的增加，测定误差增大，综合检测灵敏度、测定误差和分析时间等因素，实验选择平衡温度为70℃，平衡40 min。

　　药品中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中以及在制剂制备过程中使用或产生而又未能完全去除的有机溶剂。ICH将药品生产及纯化过程中常用的69种有机溶剂按照对人体和环境的危害程度分为3类。第1类溶剂是指已知可以致癌并被强烈怀疑对人和环境有害的溶剂，应避免使用；第2类溶剂是指无基因毒性但有动物致癌性的溶剂，应限制使用；第3类溶剂是指对人体低毒的溶剂，残留溶剂的量不高于0.5%是可接受的；目前2005年版《中国药典》已采用ICH的指导原则［5］。乙醇和正丁醇属于第3类溶剂范畴，根据实验检测结果辛芍冻干粉针所含有机溶剂残留量均符合要求。

　　【参考文献】

　　［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅱ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：附录56.

　　［2］ 雷建林，李 芳.气相色谱法测定阿奇霉素原料中的溶媒残留量［J］.中国药业，2006，17(22)：1734.

　　［3］ 曹艳玲，刘学良.顶空气相色谱法测定注射用青霉素钠中残留溶媒［J］.黑龙江医药， 2007，20(4)：302.

　　［4］ 王 腾，杨义芳.顶空气相色谱法测定注射用银杏叶（冻干）有机溶剂残留量［J］.中成药， 2002，24(5)：344.

　　［5］ 陈立亚，于宝珠，赵慧芳.ICH指导原则与各国现行药典药品的残留溶剂分析方法概述［J］.中国药事,2005，19(9)：542.