风湿安泰片质量标准的研究

　　【摘要】  目的提高完善风湿安泰片的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别处方中的人参、桂枝、黄柏；采用高效液相色谱法同时测定风湿安泰片中士的宁和马钱子碱的含量。结果定性定量方法简便，准确，专属性强，重现性好。结论 提高后的质量标准可有效控制该制剂的内在质量。

　　【关键词】  风湿安泰片； 薄层色谱法； 高效液相色谱法； 士的宁； 马钱子碱

　　Study  on  Quality  Standard for Fengshi Antai  Tablets

　　MA Chenguang, ZHU Lei, TONG Lihua

　　Jiamusi University for Chemical and Pharmaceutical Sciences,Heilongjiang Jiamusi 154007,China

　　Abstract：ObjectiveTo improve the quality standard for Fengshi Antai tablets.MethodsRadix Ginseng， Ramulus Cinnamoml， Cortex Phellodendri Chinensis atractylodes were identified by TLC.The contents of strychnine and brucine were determined simutanously by HPLC.ResultsThe identification and content determination methods were simple, accurate,exclusive,and had good reproducibility. ConclusionThe improving quality standards can control the quality of this product effectively.

　　Key words：Fengshi Antai Tablets；  TLC；  HPLC；  Strychnine;  Brucine

　　风湿安泰片是由黄柏、骨碎补、马钱子、牛膝、桂枝、五加皮、红参、淫羊藿、麻黄、桑寄生等中药经加工制成的复方制剂，具有舒筋活血，祛风镇痛之功效。用于筋骨麻木，手足拘挛，腰腿疼痛，风湿性关节炎等症的治疗。为控制其内在质量，对人参、桂枝、黄柏进行了定性鉴别，并采用高效液相色谱法对士的宁和马钱子碱进行了含量测定及相应的方法学考察。

　　1  仪器与试药

　　岛津-高效液相色谱仪(LC10ATVP)。士的宁（C21H22N2O2）、马钱子碱（C23H26N2O4）、人参皂苷Re（C48H82O18）、桂皮醛（C9H8O）、盐酸小檗碱（C20H18ClNO4）对照品均购于中国药品生物制品检定所；层析用硅胶G(青岛海洋化工厂)，甲醇、乙腈为色谱纯（天津市四友生物医学技术有限公司）；水为二蒸水；其它试剂均为分析纯。

　　2  定性鉴别

　　2.1  人参的薄层鉴别［1］

　　取本品25片，除去薄膜衣，研细，加乙醚25 ml，超声处理15 min，滤过，药渣挥干溶剂，加水0.5 ml搅拌润湿，加水饱和正丁醇50 ml，超声处理30 min，吸取上清液，用氨试液30 ml提取2次，弃去下层液，取上层液用水20 ml洗涤2次，弃去下层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取红参对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯甲醇水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，105℃加热数分钟。供试品色谱中，在与对照药材及对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

　　2.2  桂枝的薄层鉴别［1］

　　取本品25片，除去薄膜衣，研细，加乙醇50 ml，密塞，浸泡20 min，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液。另取桂皮醛对照品，加乙醇制成每毫升含1 μl的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取对照品溶液2 μl及供试品溶液10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）醋酸乙酯（17∶3）为展开剂，展开取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。

　　2.3 黄柏的薄层鉴别

　　取本品10片，除去薄膜衣，研细，加乙醚10 ml，密塞，浸泡20 min，时时振摇，滤过，弃去滤液，残渣加酸性乙醇10 ml，置水浴上温热（50℃）10 min，滤过，滤液蒸干，残渣加适量稀盐酸溶解，用氨试液调至碱性，用氯仿提取2次，20 ml/次，取氯仿层，蒸干，残渣加无水乙醇1    ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加无水乙醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各3～5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇冰醋酸水（3∶1∶1.5）为展开剂，展开取出，晾干，置紫外灯光（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

　　3  含量测定［1］

　　3.1  溶液的制备和测定

　　3.1.1  对照品溶液的制备

　　分别精密称取士的宁对照品3.50  mg，马钱子碱对照品2.55 mg置10 ml量瓶中，加三氯甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密吸取2 ml，置同一10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升中含士的宁0.070 mg，马钱子碱0.051 mg）。

　　3.1.2  供试液的制备

　　取本品10片，除去包衣，研细，取约0.6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氢氧化钠试液3 ml，混匀，放置30 min，精密加入三氯甲烷20 ml，密塞，称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷提取液，用少量铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液3 ml，挥干三氯甲烷，用甲醇定容至1 ml量瓶中，摇匀，即得。

　　3.1.3  阴性对照品溶液制备

　　按处方比例，取缺马钱子的样品约0.6 g，精密称定，按“3.1.2”项下的方法操作，制备阴性对照品溶液。

　　3.1.4  测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，测定即得。

　　3.1.5  色谱条件及系统适应性实验

　　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸钠与0.02 mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值至2.8）（25∶75）为流动相；检测波长为260 nm，理论塔板数按士的宁（C21H22 N2O2）峰计算应不低于5 000。

　　3.2  方法学考察及结果

　　3.2.1  标准曲线的绘制

　　精密称取士的宁和马钱子碱对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.08 mg的溶液，精密吸取此溶液各5，7.5，10，12.5，15 μl分别注入液相色谱仪测定。以进样量为横坐标，以峰面积值为纵坐标作图，得两条近似通过原点的直线。士的宁的回归方程为Y=2 929 908.86X-516 673.32，r=0.999 6；马钱子碱的回归方程为Y=1 714 994.35X-45 601.96，r=0.999 1，结果表明士的宁和马钱子碱进样量分别在0.35～1.05 μg，0.26～0.76 μg之间，进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

　　3.2.2  稳定性考察

　　分别取放置4 ，8 ，12，16 ，20 ，24 h的供试品溶液，测定风湿安泰片中士的宁和马钱子碱的含量，以考察其稳定性。RSD值分别为0.50%，1.33%，表明供试品溶液至少在24 h内稳定。

　　3.2.3  精密度考察

　　吸取同一供试品溶液，重复进样6次，计算相对标准偏差，则士的宁和马钱子碱的RSD值分别为0.61%，0.45%，结果表明，仪器精密度良好。

　　3.2.4  重现性实验

　　取样品内容物粉末6份，每份3.0  g，精密称定，按3.1.2项下“供试液的制备”方法操作，平行6份作样品供试液，吸取供试液和对照液各10 μl，注入高效液相色谱仪，测定样品中士的宁和马钱子碱的含量，结果样品中士的宁和马钱子碱的平均含量分别为0.88 ，0.64 mg·g-1，RSD值分别为0.14%，0.33%。

　　3.2.5  回收率的测定

　　精密称取士的宁和马钱子碱对照品适量，加入到已知士的宁和马钱子碱含量的风湿安泰片（士的宁和马钱子碱含量分别为0.88，0.64 mg·g-1，详见重现性实验）中。

　　3.2.6  含量测定项下方法操作，制备供试品溶液，测定风湿安泰片中士的宁和马钱子碱的含量，计算回收率。结果见表1～2。表1  士的宁回收率实验结果（略）表2  马钱子碱回收率实验结果（略）

　　3.2.7  样品含量测定

　　精密吸取“3.1.1” 项下对照品溶液和“3.1.2” 项下供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，进行测定，计算样品中士的宁和马钱子碱的含量。结果见表3。表3  样品含量测定结果（略）

　　3.2.8  阴性干扰实验

　　取“3.1.3”项下的阴性对照品溶液，按样品测定项下的方法进行测定，结果供试品色谱图中，在与士的宁和马钱子碱对照品色谱峰相应的位置上，没有色谱峰出现。表明处方中其它药味对其测定无干扰。结果见图1。

　　4  小结

　　采用TLC法对样品中人参、桂枝及黄柏进行定性检查，方法简便，重现性好。用HPLC法测定士的宁和马钱子碱的含量，方法稳定，结果准确，可作为本制剂的质量控制方法。

　　【参考文献】

　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：7，34，195.

　　［2］庄 越.实用药物制剂技术［M］.北京：人民卫生出版社，2000：248.