血脂灵胶囊质量标准研究

　　【摘要】  目的建立血脂灵胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱（TLC）对制何首乌、山楂、决明子进行定性鉴别，用高效液相色谱（HPLC）测定制何首乌中2，3，5，4’四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷的含量。结果薄层色谱中，供试品溶液色谱在与对照药材或对照品色谱相应位置上出现相同颜色的斑点，阴性无干扰；HPLC中，2，3，5，4’四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷在0～0.82 μg范围内线性关系良好（r=0.999 9），平均回收率为97.4%。结论薄层色谱法呈现斑点清晰、特异性强，可用于血脂灵胶囊的鉴别；高效液相色谱法简便快速、精密度高、准确度好，可用于该药的质量控制。
　　【关键词】  血脂灵胶囊； 薄层色谱； 高效液相色谱； 2，3，5，4’四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷
　　Quality Standard for Xuezhiling Capsules
　　JIANG Weixin，AN Jianzhong
　　（Nanjing Tongrentang Pharmaceutical Co.,Ltd ,Nanjing 210012,China）
　　Abstract：ObjectiveTo establish the quality standard for Xuezhiling Capsules．MethodsRadix polygoni, Multiflori preparata，Fructus crataegi，Semen cassiae were  identified by TLC．The contents of  2,3,5,4'Tetrahydroxystilbene2OβDglucoside in Radix polygoni Multiflori preparata was determined by HPLC．ResultsSpots obtained from the test solutions had the same color in reference solution and medical material in the same location，and the blank solution had no interference．The linear range of albiflorin was from 0 to 0.82μg（r=0.9999），the averge recovery was 97.4%．ConclusionIn TLC，the spots are very clear and specific to identify the herbal medicine in Xuezhiling Capsules．It is simple ，quick，highly precise and accurate for HPLC to control the quality of Xuezhiling Capsules．
　　Key words：Xuezhiling Capsules；  TLC；  HPLC；  2,3,5,4'Tetrahydroxystilbene2OβDglucoside
　　血脂灵胶囊的处方来源于国家名医吴士元验方血脂灵片，由制何首乌、山楂、决明子、泽泻组成。该方具有活血降浊、润肠通便的功效，用于淤浊内盛而致的高脂血症。原剂型标准中只有何首乌、山楂的定性鉴别。为了更好地控制药品质量，本研究改进了山楂的薄层色谱鉴别，增加了决明子的薄层色谱鉴别，并采用反相高效液相色谱法测定本品中2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷的含量。
　　1  仪器与试药
　　日本岛津高效液相色谱仪，LC－10AD泵，SPD－10A型检测器，电子分析天平（北京多利斯天平有限公司）。乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷对照品购自中国生物制品检定所，批号为110844-200505。
　　血脂灵胶囊（自制）。缺味阴性样品：按处方分别配成相应的缺味处方药，模拟制剂工艺，加相应辅料制备。药材均购自南京医药同乐药业有限公司。
　　2  方法与结果
　　2.1  定性鉴别
　　2.1.1  何首乌的TLC鉴别取胶囊5粒，取内容物，加甲醇300 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加稀盐酸10 ml使溶解，置水浴上加热30 min，再用乙醚提取2次，15 ml/次，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醚1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。再取缺制何首乌的阴性样品，同供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。吸取上述3种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)甲酸乙酯甲酸(15∶5∶1)的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在110℃烘约5 min。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照色谱无干扰。见图1。
　　2.1.2  山楂的TLC鉴别取胶囊内容物5 g，加甲醇50 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水25 ml使溶解，用10%盐酸调节pH值至2，用醋酸乙酯振摇提取2次，25 ml/次，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液。再取缺制山楂的阴性样品，同供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。吸取上述供试品溶液10 μl，对照品溶液5 μl，阴性对照溶液10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯醋酸乙酯甲酸（15∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照色谱无干扰。见图2。
　　2.1.3  决明子的TLC鉴别取胶囊内容物5 g，加氯仿50 ml，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取决明子对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取缺制决明子的阴性样品，同供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。吸取供试品溶液10 μl，对照品溶液5 μl，阴性对照溶液10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）醋酸乙酯甲酸（15∶2∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照色谱无干扰。见图3。
　　2.2  定量分析
　　2.2.1  色谱条件kromasil 100-5C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）；流动相为乙腈∶水(22∶78)；流速：1 ml/min；检测波长：320 nm柱温：35℃；理论塔板数按2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷峰计算应不低于2 000。
　　2.2.2  溶液的制备
　　对照品溶液的制备:精密称取2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷对照品适量，加稀乙醇制成每毫升含40μg的溶液，即得。
　　供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，研细，取粉末约0.2 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
　　图1  何首乌的TLC 色谱图（略）
　　图2  山楂的TLC 色谱图（略）
　　图3  决明子的TLC色谱图（略）
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　　阴性对照品溶液的制备：取不含制何首乌的阴性制剂，同供试品溶液方法制备阴性对照溶液并测定。结果阴性无干扰，见图4～6。
　　图4  对照品HPLC色谱图（略）
　　2.2.3  线性关系考察精密称取2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷对照品11.382 mg，置25 ml量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密吸取该对照品溶液（浓度为455.3 μg/ml）2.0，4.0，5.0，7.0，6.0，9.0 ml，置50 ml量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积Y对进样量X（μg）进行线性回归，2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷在0～0.82μg范围内线性关系良好，回归方程为：Y=5 266 501.911 1X+1 345.508 6，r=0.999 9（n=6）。
　　图5  血脂灵胶囊HPLC色谱图（略）
　　2.2.4  精密度实验取本品内容物0.2 g，按供试品溶液的制备方法制备，按已确定的色谱条件重复进样5次，测定峰面积积分值，计算RSD为0.84%。
　　2.2.5  稳定性实验精密吸取同一供试品溶液10 μl，分别于制备后0，3，6，9，12 h进样测定，结果表明，样品溶液在12 h内基本稳定，样品峰面积的RSD为0.15%。
　　图6  阴性对照HPLC色谱图（略）
　　2.2.6  重复性实验取同一批号样品5份，按供试品溶液的制备方法制备，进样测定，求得样品含量的RSD为0.66%，表明重复性良好。
　　2.2.7  回收率实验精密称取已知含量的一批样品（含量1.974 8 mg/粒）约0.1 g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷对照品稀乙醇溶液（0.455 3 mg/ml）1.5 ml，挥干，按供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定，结果平均回收率为97.42%，RSD为0.45%。结果见表1。
　　表1  加样回收率测定结果（略）
　　2.2.8  样品含量取3批样品，按供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，测定样品含量。结果见表2。
　　表2  3批样品含量测定结果（略）
　　3  讨论
　　本品薄层色谱鉴别均作了阴性对照实验，结果阴性无干扰、专属性强，其中山楂鉴别原采用熊果酸为对照品，经反复实验发现对应斑点Rf值并不一致，现改用齐墩果酸作为对照品，试验结果对应斑点一致，阴性无干扰。
　　制何首乌是血脂灵处方中的君药，2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷为其主要有效成分。现代研究表明2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷类化合物具有抗衰老、提高免疫功能、防治动脉硬化及保肝作用。本法采用反相高效液相色谱法测定2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷的含量，能较好地控制该制剂质量。
　　曾对样品提取溶剂进行考察，分别采用乙醇超声、50%乙醇超声、50%乙醇加热回流3种提取方法，经测定，乙醇超声含量较低，而50%乙醇超声和50%乙醇加热回流结果相近，故采用较简便的超声提取方法。
　　【参考文献】
　　［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］．北京：化学工业出版社，2005：123．
　　［2］ 中华人民共和国卫生部药典委员会．卫生部药品标准·中药成方制剂,第17册［S］．1998：105．