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摘要：目的为降脂袋泡茶提供质量控制的方法。 方法采用TLC法对大黄、金银花分别进行了色谱鉴别，采用HPLC测定了复方大黄中大黄素的含量。TLC鉴别方法专属性强。用HPLC法对含量大黄素进行了定量分析，流动相为甲醇水磷酸（70∶30∶0.01），流速1.0 ml/min，检测波长254 nm。结果大黄素在0.01～0.22 μg之间有良好的线性关系，平均回收率为101.19%，RSD为2.87%。结论该质量标准可有效地控制降脂袋泡茶的质量 。
关键词：降脂袋泡茶； 质量标准； 大黄素； 薄层色谱法； 高效液相色谱法
Study on Quality Standard for Jiangzhi Bagged Tea
SHEN Jie, JI Feng
(Shanghai Traditional Chinese Medicine Hospital, Shanghai 200071, China; Shanghai Zhabei Institute for Drug Control, Shanghai 200083, China)
Abstract:ObjectiveTo establish the quality standard for Jiangzhi Bagged Tea. MethodsThe Herba Lysimachiae and Radix et Rhizoma Rhei in Jiangzhi Bagged Tea were identified by TLC. Emodin of the Tea was determined by HPLC. The mobile phase was methanol-water-phosphatic acid（70∶30∶0.01）, flow rate was 1.0 ml/min. The detection wavelength was at 254 nm. ResultsThe linear range of Emodin was 0.01～0.22 μg, the average recovery rate was 101.19% and RSD was 2.87%, respectively. ConclusionThis method is simple, reliable and accurate, and it can be used for quality control of Jiangzhi Bagged Tea.
Key words:Jiangzhi Bagged Tea; Quality Standard; Emodin; TLC; HPLC
降脂袋泡茶是由大黄、金银花等3味中药组成，有清热泻火，润肠通便之功效。临床上用于降血脂有显著疗效。为有效地控制该产品的质量，我们对本品进行了定性及定量研究，制订了该制剂中大黄和金银花的薄层色谱定性鉴别方法及君药大黄中大黄素的含量测定方法。文献报道，大黄素的含量测定有HPLC法，薄层扫描法，紫外分光光度法等［1~3］，本文采用HPLC法定量测定大黄素。
1 仪器与试药
1.1 仪器Waters高效液相色谱仪（包括510泵，7725i进样阀，Waters484紫外检测器，CDMC-2A数据处理机）；SB2200超声波发生器（中美合资上海必能信超声有限公司，80W，40KHZ）。
1.2 试药硅胶G，H板，青岛海洋化工厂；大黄经鉴定为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.的干燥根及根茎，由上海市药材公司提供；大黄素对照品（0756-9707）、绿原酸对照品（0753-2001）由中国药品生物制品检定所提供；降脂袋泡茶、阴性样品由上海中医医院提供；甲醇为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 定性鉴别
2.1 大黄薄层鉴别取本品粉末5 g加甲醇20 ml超声处理30 min，滤过。取滤液置水浴蒸干，残渣加1 ml甲醇溶解。作为供试品溶液。空白品制法同上（用去大黄的样品相同方法处理）。另取大黄酸对照品加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液。照薄层色谱法试验，吸收上述3种样品溶液各4 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上。以石油醚（30~60℃）甲酸乙酯甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，先展开，再取出，后晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色斑点。结果见图1。
1 、2、3.供试品溶液 4.大黄酸对照品 5.空白样品
图1 大黄薄层色谱图（略）
2.2 金银花鉴别取本品粉末2.0 g，加甲醇15 ml，超声处理20 min，滤过。取滤液置水浴蒸干，残渣加1 ml甲醇溶解。作为供试品溶液。空白对照品方法同上（用去金银花的样品相同方法处理）。
另取绿原酸对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为标准对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品10 μl，空白对照品和标准对照品10 μl。分别点于同一硅胶G板上，以醋酸丁酯∶甲酸∶水（7∶2.5∶2.5）的上层溶液为展开剂。展开，取出，晾干，置紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。结果见图2。
1 、2、3.供试品溶液 4.空白样品 5.对照样品
图2 金银花薄层色谱图（略）
3 含量测定
3.1 色谱分析条件色谱柱：uBondapak，C18（3.9 mm×300 mm，10 μl），Nova-pak C18预柱；流动相为甲醇水磷酸（70∶30∶0.01），使用前经减压抽滤脱气；流速1.0 ml/min；检测波长254 nm，0.02AUFS；纸速为1 mm/min；保留时间约15 min；数据处理定量方法为外标峰面积测定法。
3.2 标准曲线测定精密称取大黄素对照品11.0 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀（每毫升含大黄素0.22 mg）。精密吸取1 ml，置25 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀（每毫升含大黄素0.008 8 mg）；精密吸取1 ml，置10 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀（每毫升含大黄素0.022 mg）。分别精密吸取0.008 8 mg/ml的对照溶液1.0，2.5，5.0，10.0 μl和0.022 mg/ml对照溶液7.5，10 μl，注入高效液相色谱仪中，以大黄素的量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。其回归方程为：Y=1 838 800X-30 445，r=0.999 9，平均回收率为101.19%，RSD为2.87%，线性范围为0.01～0.22 μg。
3.3 样品液制备取降脂袋泡茶适量，粉碎成粉末（过四号筛），取0.70 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤纸滤过，过0.45 μm的微孔滤膜，即得样品液。
3.4 精密度实验精密吸取对照品溶液，先后进样5次，大黄素含量RSD=0.17%（n=5）。
3.5 重复性实验同一批号样品5份，按样品测试条件测定，大黄素的含量RSD为2.02%。
3.6 稳定性实验将同一样品液于1,2,3天测定，结果表明大黄素含量的RSD=3.86%（n=3）。
3.7 空白对照液制备与测定按处方比例和工艺，制成不含大黄的空白样品，按样品液的制备方法制备，测定。结果表明，处方中其他药材和辅料不干扰大黄素的测定。结果见图1。
3.8 加样回收率测定精密称取已知含量的样品（C=0.172 0 mg/g）5份，置于具塞试管，分别加入不同量的大黄素对照品溶液（C=0.008 28 mg/ml）10，9，8，7，6 ml，再分别加入甲醇15，16，17，18，19 ml，配制成加样样品液。将加样样品液分别按上述色谱条件测定其含量，并计算加样回收率。结果见表1。
3.9 样品含量测定按上述的含量测定方法，分别测定3个不同批次的降脂袋泡茶样品。结果见表2。
表1 回收率实验结果（略）
表2 3批降脂袋泡茶中大黄素的含量测定结果（略）
4 讨论
4.1 本品的薄层色谱鉴别均作了阴性对照实验，结果表面各薄层斑点不受样品中其他各药的干扰，专属性较强、简单易行，可作为本品定性检测指标。
4.2 文献报道采用HPLC法测定大黄素时，测定波长根据复方中其他药物的干扰情况，有所差异［4~6］，本文采用254 nm处测定，结果方中其他成分不干扰大黄素的测定。采用本法测定大黄素含量测定的线性范围为0.008 8～0.22 μg，线性回归方程为Y=1 838 800X-30 445，r=0.999 9，平均回收率为1.01%，RSD为2.87%。该法简便、准确，重现性好，可作为降脂袋泡茶质量控制的方法。
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