宣肺止咳合剂质量标准研究

　　【摘要】目的：研究宣肺止咳合剂的质量控制标准。方法：采用薄层色谱法对制剂中桔梗，麻黄，甘草，牛蒡子，桑白皮，苦杏仁进行定性鉴别；用高效液相色谱法对制剂中盐酸麻黄碱进行含量测定。结果：各薄层定性鉴别色谱中，所鉴别的药材薄层色谱特征明显，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。盐酸麻黄碱在（1.7078～54.65）μg·mL-1范围内呈良好的线性关系，相关系数为1.00，平均回收率为97.52%，RSD为0.83%。结论：薄层定性和高效液相测定方法可用于制剂的质量控制。

　　【关键词】  宣肺止咳合剂 质量标准 薄层色谱法 高效液相色谱法 盐酸麻黄碱

　　Studies On Quality Standard of Xuanfeizhike Mixture

　　Pu Wei-ya,Liu Zhi-hui,Qian Fang,et al.

　　（Jiangsu Provincial Hospital of TCM,Nanjing 210029,China）

　　【ABSTRACT】 Objective:To establish a method for quality control of Xuanfeizhike Mixture.Methods: Radix Platycodonis、Herba Ephedrae、Radix Glycyrrhizae、Fructus Arctii、Cortex Mori and Semen Armeniacae Amarum，were identified by TLC.A method of HPLC to determine ephedrine hydrochloride in the capsule，was developed.Results: The studies on the quality control showed that the characteristics for identification by TLC were distinct.The quantification method had the line-arrange of （1.7078～54.65）μg·mL-1 （r=1.00）.The average vecovery was97.52% and its RSD was 0.83%.Conclusions: The methods can be used for the identification and quantification of the preparation.

　　【KEY WORDS】Xuanfeizhike Mixture；Quality standard；TLC；HPLC；Ephedrine hydrochloride

　　宣肺止咳合剂由麻黄、桔梗、甘草、远志、桑白皮、炒牛蒡子等组成，具有宣肺利咽、清润止咳之功效，临床用于喉源性咳嗽、过敏性咳嗽及“上感”、感冒后痒咳等。为了控制该制剂的质量，我们对其进行了定性定量研究。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器

　　高效液相色谱仪Agilent 1100，四元泵（G1311A），柱温箱（G1316A），VWD检测器（G1314A），工作站（Chemstation），Agilent手动进样器（10 μL定量环）。1/10万电子分析天平（BP-211D型，德国Sartorius）；玻璃点样毛细管（华西医科大学仪器厂生产）；939型全自动薄层制板器，重庆市南岸贝尔德仪器技术厂；KQ-1000E型医用超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；101-1A型电热鼓风干燥箱（南通沪通制药机械设备厂）；HH-4数显型恒温水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；Cary50紫外分光光度计（美国瓦里安技术有限公司）；WD-9413A凝胶成像分析仪（北京市六一仪器厂）。

　　1.2 试药

　　HG/T2354-92型薄层层析硅胶，青岛海洋化工有限公司；硅胶G，青岛海洋化工集团；盐酸麻黄碱对照品（含量测定用，批号171242-200405），购自中国药品生物制品检定所；宣肺止咳合剂，江苏省中医院中药制剂实验室制备（批号： 060905、060906、060906；规格：100mL/瓶）。薄层色谱所用试剂均为分析纯，高效液相色谱所用试剂为色谱纯，水为超纯水。

　　2 薄层色谱鉴别

　　2.1 麻黄［1］

　　取合剂50mL，加氢氧化钠试液调pH至11～12，用氯仿萃取2次，每次20 mL，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性对照溶液。另取麻黄对照药材2 g，加水热回流提取1小时，滤过，滤液按照供试品处理方法处理，作为麻黄对照药材溶液。

　　吸取供试品溶液、阴性供试品溶液、对照药材溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上。以氯仿-甲醇-浓氨试液（20：5：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮显色剂，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点，阴性无干扰。

　　2.2 桔梗

　　取合剂30 mL，加3%盐酸溶液至100mL，加热回流1 h，放冷，滤过，滤液用氯仿萃取2次，每次20 mL，合并萃取液（用水30 mL洗涤），蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性供试品溶液。另取桔梗对照药材2 g，加3%盐酸溶液100mL，加热回流1小时，滤过，滤液按照供试品处理方法处理，作为桔梗对照药材溶液。

　　吸取供试品溶液、阴性供试品溶液、对照药材溶液各3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯（1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性无干扰（结果见图2）。

　　图1  制剂中麻黄的薄层鉴别（略）

　　1.供试品；2.麻黄对照药材；3.麻黄阴性

　　图2  制剂中桔梗的薄层鉴别（略）

　　1.供试品；2.桔梗药材；3.桔梗阴性

　　图3  制剂中甘草的薄层鉴别（略）

　　1.甘草对照药材；2.供试品；3.甘草阴性

　　图4  制剂中牛蒡子的薄层鉴别（略）

　　1.供试品；2.牛蒡子对照药材；3.牛蒡子阴性

　　图5  制剂中桑白皮的薄层鉴别（略）

　　1.供试品；2.桑白皮对照药材；3.桑白皮阴性

　　图6  制剂中苦杏仁的薄层鉴别（略）

　　1.供试品；2.苦杏仁对照药材；3.苦杏仁阴性

　　2.3 甘草［2，3］

　　取合剂40mL，加3%盐酸溶液至100mL，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液用氯仿萃取2次，每次20 mL，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为甘草供试品溶液。同法阴性供试品溶液。另取甘草对照药材2 g，加3%盐酸溶液100 mL，加热回流1小时，滤过，滤液按照供试品处理方法处理，作为甘草对照药材溶液。

　　吸取供试品溶液5 μL，对照药材溶液10 μL，阴性供试品溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（10：20：7：0.5）［3］为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显黄色的主斑点，阴性无干扰（结果见图3）。

　　2.4 牛蒡子 ［4］

　　取合剂30 mL，用乙酸乙酯萃取2次，每次20 mL，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为牛蒡子供试品溶液。同法制备阴性供试品溶液。另取牛蒡子对照药材2g，加水回流1小时，放冷，滤过，滤液按照供试品处理方法处理，作为牛蒡子对照药材溶液。

　　吸取供试品溶液、对照药材溶液、阴性供试品溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-冰醋酸（40：5：10：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点，阴性无干扰（结果见图4）。

　　2.5 桑白皮［5］

　　取合剂20 mL，加饱和碳酸钠溶液20mL，超声处理20分钟，滤过，滤液加稀盐酸调解pH至1～2，静置30min，虑过，滤液用乙酸乙酯萃取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为桑白皮供试品溶液。同法制备阴性供试品溶液。另取桑白皮对照药材2 g，加60%乙醇回流1小时，滤过，滤液按供试品处理方法处理，作为桑白皮对照药材溶液。

　　吸取供试品溶液、对照药材溶液、阴性供试品溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸（40：5：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 %硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰（结果见图5）。

　　2.6苦杏仁

　　取合剂20 mL，用石油醚萃取两次，每次20mL，弃取石油醚萃取液，再用水饱和正丁醇萃取3次，每次20mL，合并萃取液用少量氨水（5mL）洗涤3次，蒸干。残渣加甲醇2 mL使溶解，作为苦杏仁供试品溶液。同法制备阴性供试品溶液。另取苦杏仁对照药材2 g，加水蒸馏，收集馏液，按供试品处理方法处理，作为苦杏仁对照药材溶液。

　　吸取供试品溶液、对照药材溶液、阴性供试品溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸（40：5：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以磷钼酸硫酸显色剂，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰（结果见图6）。

　　3 定量研究

　　3.1 测定波长的选择

　　经紫外测定，盐酸麻黄碱对照品溶液在210nm波长处有强吸收，故选择210 nm作为检测波长。

　　3.2 色谱条件［6］

　　色谱柱：Supelco ODS C18柱（250×4.6 mm，5μm），流动相：乙腈:0.2 %磷酸水溶液=5:95；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1。色谱柱的理论板数按盐酸麻黄碱峰计算不低于5000。

　　3.3 供试品溶液、阴性供试品溶液、对照品溶液的制备［7］

　　供试品溶液的制备：取三批样品（060905、060906、060906），每批各取两份，精密吸取合剂10mL，置250mL烧瓶中，加入20%NaOH溶液120mL，NaCl 7.5g，再加水50mL。加热保持微沸，收集馏出液至预先加入0.5mol/L稀盐酸5mL的容量瓶中，收集馏出液120mL左右，加水定容至200mL。同法制备阴性供试品溶液。

　　对照品溶液的制备：精密称取盐酸麻黄碱对照品10.93mg，用流动相溶解制成每mL含盐酸麻黄碱54.65μg的对照品溶液。

　　图7  宣肺止咳合剂供试品溶液分别吸取阴性供试品溶液、盐酸麻黄碱对照品溶液、供试品溶液各10 μL于高效液相色谱仪中进行试分离，供试品与对照品在相同位置有较大吸收，阴性样品在与盐酸麻黄碱峰相应位置无干扰。（见图7、图8和图9）（略）

　　图8  盐酸麻黄碱对照品溶液（略）

　　图9  宣肺止咳合剂阴性对照溶液（略）

　　3.4 线性关系考察

　　取上述对照品溶液，用流动相分别稀释为（27.325、13.6625、6.8313、3.4156、1.7078）μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取各不同浓度的对照品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪中测定。以对照品浓度为横坐标，相应峰面积积分值为纵坐标，经线性回归，得盐酸麻黄碱回归方程为y=2664.2x-1.042，r=1.00，盐酸麻黄碱在（1.7078～54.65）μg·mL-1范围内，与峰面积的积分值呈良好的线性关系。

　　3.5 精密度试验

　　精密吸取同一个批号（060905）的宣肺止咳合剂供试品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，重复进样6次，测定，以峰面积计算，RSD为0.39%，结果表明，此分析方法精密度良好。

　　3.6 重复性试验

　　吸取同一个批号（060905）的宣肺止咳合剂样品，共6份，依法制备供试品溶液。分别精密吸取6份供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪中，测定，以峰面积计算，RSD=1.15%，表明此方法的重复性良好。

　　3.7 加样回收率试验

　　精密吸取已知含量的宣肺止咳合剂样品（批号：060905）各6份，分别加入盐酸麻黄碱对照品，依供试品溶液制备方法制备样品溶液，进样，测定，计算，结果见表1。

　　表1  盐酸麻黄碱加样回收率表（略）

　　3.8 样品含量测定

　　取3个批号宣肺止咳合剂样品，每批两份，按“3.3”项下方法制备供试品溶液，进样，测定，计算。3批样品中盐酸麻黄碱的含量分别为（0.147、0.139、0.143）mg·mL-1。

　　4.讨论

　　1.取盐酸麻黄碱对照品溶液,在（200～400）nm波长扫描,结果表明盐酸麻黄碱在210nm处有最大吸收,故确定检测波长为210nm。

　　2.用同一种方法处理麻黄药材和宣肺止咳合剂，所测得的麻黄碱含量有差异，麻黄药材水提浓缩液中麻黄碱的含量大于宣肺止咳合剂中麻黄碱的含量，可能在宣肺止咳合剂共煎时，由于麻黄与其它药物的配伍使得麻黄碱含量降低。

　　3.麻黄为肺经要药，佐以杏仁宣肺降气，止咳平喘，故为方中君药。但麻黄作为发汗解表第一药的同时，其主要活性成分盐酸麻黄碱在心脑血管等方面的副作用也日益受到重视

　　SFDA已经将麻黄碱禁止用于OTC中，因此，麻黄碱作为止咳平喘主要药效成分和其副作用之本源的同时，将麻黄碱作为宣肺止咳合剂质量控制的主要成分具有重大意义，有利于合理地控制制剂的质量。

　　4.测定宣肺止咳合剂中盐酸麻黄碱的含量过程中,曾采用乙醚、氯仿、乙醇与甲醇分别提取盐酸麻黄碱,但最终以蒸馏法提取的效果最好,该法简单,杂质峰少,回收率高。以该法对馏出液体积及麻黄碱含量等因素进行关系考察时,发现馏出液近120ml时,通过HPLC法所测的麻黄碱峰面积的积分值不再增加,说明麻黄碱蒸馏提取完全。

　　5.供试品中伪麻黄碱的含量同时可被测定出，且蒸馏法处理拱试品测得的伪麻黄碱含量高于柱洗脱法处理测得的含量，但在实验中发现，随着溜出液的增加，伪麻黄碱的溜出并不是一直减少趋势，收集至最后有增多的趋势，收集120mL溜出液只收集到测得伪麻黄碱总量的88%，所以蒸馏法处理供试品不适用于宣肺止咳合剂中伪麻黄碱的含量测定。

　　【参考文献】

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　　6 谢晓兰.HPLC法测定平喘合剂中麻黄碱、伪麻黄碱的含量［J］.药品评价,2006；3（6） ：469～470

　　7 赵大成,曲婷丽,温红平,赵正保.高效液相色谱测定止嗽定喘口服液中盐酸麻黄碱的方法研究［J］.肿瘤研究与临床，2005；12（6）：394～395