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【摘要】 目的建立辛芷颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法对方中麻黄、金银花、黄芩进行定性鉴别；采用反相高效液相色谱法测定欧前胡素的含量。结果TLC色谱中均能明显检出麻黄碱，黄芩苷，绿原酸。欧前胡素检测浓度在0.1～0.5 μg范围内线性关系良好(r=0.999 6)，平均回收率为99.07(RSD=1.04％，n=5）。结论该方法简便、准确、重复性好，可作为辛芷颗粒质量控制的方法。
【关键词】 反相高效液相色谱法； 薄层色谱法； 辛芷颗粒
基金项目：河北省科技厅科技攻关项目(No.052761640)
辛芷颗粒为河北省中医院经验方。本处方的功能为散邪通窍、祛淤排脓；治疗邪毒侵袭，热毒内蕴，或邪毒湿浊淤滞鼻窍所致鼻塞，打喷嚏，流脓涕，头胀头痛，嗅觉不灵敏，记忆力减退等慢性鼻炎，鼻窦炎，过敏性鼻炎见上述症状者。方中辛夷、苍耳子、白芷、薄荷、麻黄芳香散邪、通利鼻窍，为君药；金银花、黄芩、生石膏、鱼腥草有宣肺散邪、清热解毒、消肿排脓之功效，为臣药。为有效地控制产品质量，保证临床用药安全有效，需要控制君药白芷中主要成分欧前胡素的含量［1］。本研究采用TLC法对麻黄、金银花、黄芩进行了定性鉴别，采用RP-HPLC法测定欧前胡素的含量，可为该制剂提供一种简便、灵敏度高、重现性好的质量控制方法。
1 仪器与试药
Agilent l1O0高效液相色谱仪；G1316A紫外及可见光检测器。欧前胡素对照品(批号：110856-200406，含量测定用)，由中国药品生物制品检定所提供，辛芷颗粒由河北省中医院制剂科提供；氯仿为分析纯，甲醇、乙腈为色谱纯，水为高纯水。
2 辛芷颗粒的薄层色谱鉴别
2.1 麻黄的鉴别 取本品10 g，研细，加浓氨试液数滴，再加氯仿30 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》005年版Ⅰ部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿甲醇浓氨试液（20∶5∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.2 黄芩的鉴别取本品10 g，研细，加甲醇30 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10 μl，分别点于同一含1％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠的黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯丁酮甲酸水（5∶3∶1∶1）为展开剂，预平衡30 min，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.3 金银花的鉴别取本品10 g，研细，加醋酸乙酯30 ml，加盐酸调pH值至2～3，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各2 μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯醋酸乙酯甲酸冰醋酸水（2∶30∶2∶2∶4）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3 欧前胡素的含量测定
3.1 色谱条件色谱柱：Alhima ODS C18 柱(250 mm×4.6 mm，5μm)；流动相：甲醇水(65∶35)；检测波长：250 nm；体积流量：1.2 ml/min；柱温：23℃。
3.2 对照品溶液的制备取欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.03 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3.3 供试品溶液的制备取本品内容物5袋，精密称定，置50 ml量瓶中，加氯仿适量，超声处理30 min，放冷，加氯仿稀释至刻度，滤过。精密吸取续滤液10 ml，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解并转移置5 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。
3.4 空白对照液的制备按处方比例称取除白芷外其他药味，按处方工艺制成制剂，按供试品溶液制备法制成空白对照液，进样测定，结果其他药材和辅料均不干扰欧前胡素的测定。
3.5 线性关系的考察精密称取欧前胡素对照品10 mg，置100 ml量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密吸取上述对照品储备液1，2，3，4，5 ml，分别置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别吸取10μl进样，按上述色谱条件测定。以欧前胡素的质量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，计算回归方程为Y=3 976.6x+0.73，r=0.999 6。结果表明欧前胡素在0.1～0.5 μg与峰面积积分值呈良好的线性关系。
3.6 精密度试验取同一对照品溶液，连续5次进样，测欧前胡素峰面积积分值，其RSD为0.60％。
3.7 重现性试验取同一批样品(批号：060806)，称取5份，制备供试品溶液，进样，测定，结果欧前胡素的质量分数为42.9μg/袋，RSD为1.82%。
3.8 回收率试验取批号为060806的样品5份，每份5袋，取内容物精密称定(含欧前胡素的0.037 mg)，分别精密加入1 ml（0.038 mg/ml）欧前胡素对照品溶液，制备供试品溶液，测定，计算加样回收率，结果平均回收率为99.07% ，RSD为1.04％。
3.9 样品测定取不同批号样品制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，进行测定，结果见表1。
表1 辛芷颗粒中欧前胡素的测定结果（略）
4 讨论
根据制剂处方中所含主药的理化性质，通过定性鉴别、检查、含量测定等研究，制定了可控制本品内在质量的质量标准［2］。结果表明，薄层色谱灵敏、分辨率高，无阴性药材的干扰，RP-HPLC法测定本品君药白芷中欧前胡素峰的含量，方法简便、可靠、准确。
【参考文献】
［1］ Jiangsu New Medical College．Dectionary-of Chinese Materia Medica(中药大辞典)［M］.Shanghai：Shanghai People' s Publishing House，1975．
［2］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：69.