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摘要：目的建立头痛宁片的质量标准。方法用薄层色谱法对片剂中的制何首乌、防风、当归、天麻进行了定性鉴别；采用高效液相色谱法测定了片剂中大黄素含量。结果薄层色谱斑点清晰,空白样品无干扰；大黄素在0.052 5～0.525μg范围内具有良好的线性关系，r=1.000,平均加样回收率为99.28%,RSD为1.971%(n=5)。结论 该方法简便，精确，重现性好,可作为该制剂的质量控制。
关键词：头痛宁片； 薄层色谱法； 高效液相色谱法
Quality Standard for Toutongning Tablet
LI Qingjie, LIU Yongqiang, CHANG Yanru, PEN Yanhong, DING Yunlu
(Jilin Tianyao Scitech Co. Ltd., Changchun, Jilin 130012, China; Gruduate Student of 2003 Grade, Changchun College of TCM, Changchun, Jilin 130012, China)
Abstract：ObjectiveTo establish the quality specification of Toutongning tablet. MethodsRadix polygoni multiflori praeparata cum succo glycines sotae, Radix saposhni Roviae , Radix angelicae sinensis, and Rhizoma gastrodiae in tablets were identified by TLC ,emodin in tablets were detemined by HPLC .ResultsThe TLC sperts developed were fairly clear and the blank test showed no interference. Recovery was 99.28% and RSD was 1.971%(n=5) for emodin.ConclusionThe method developed is simple and accurate with good reproducibility,and the method can be used for qudily control of Toutongning tablet.
Key words：Toutongning tablet; TLC; HPLC
头痛宁片由土茯苓、制何首乌、防风、当归、天麻5味中药组成, 具有熄风涤痰、逐瘀止痛之功效。用于治疗偏头痛、紧张性头痛，属痰瘀阻络证。该药是由头痛宁胶囊改变剂型而来。为确保制剂质量,保证用药安全有效,在原有标准基础上,对该药质量标准进行了进一步提高。对制剂中制何首乌、防风、当归、天麻进行了薄层鉴别；并选取制何首乌中的大黄素作为指标性成分进行含量测定的研究,采用高效液相色谱法建立了该制剂中大黄素的含量测定方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器SHIMADZU LC10AT高效液相色谱仪，SPD10A 紫外可见检测器，WDL95 色谱工作站，超声波清洗机（功率250W，频率20KHZ）天鹏电子技术(北京)有限公司。
1.2 试药甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯,高效薄层预制板(青岛海洋化工厂),层析用中性氧化铝(上海五四化学试剂厂)。大黄素对照品、天麻素对照品，供含量测定用，均购于中国药品生物制品检定所。
2 方法与结果
2.1 鉴别
2.1.1 制何首乌的鉴别 取本品研细的粉末4 g，加氯仿20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。按处方比例和制备工艺制备除去制何首乌的阴性样品，按供试品溶液制备方法操作，得制何首乌阴性对照溶液，另取大黄素对照品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取对照品溶液4 μl，供试品及阴性对照溶液各8 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30~60℃）甲酸乙酯甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照则无对应斑点。结果见图1。
2.1.2 防风的鉴别取本品研细的粉末4 g，加乙醇30 ml，加热回流1 h，滤过，滤液浓缩至适量，加于中性氧化铝柱（内径1.5 cm，长5 cm）上，用丙酮20 ml洗脱，收集洗脱液，挥干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。按处方比例和制备工艺制备除去防风的阴性样品，按供试品溶液制备方法操作，得防风阴性对照溶液。另取防风对照药材1 g，加氯仿20 ml，浓氨溶液1 ml，回流提取1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 ml使溶解，作为对照药材溶液。吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60~90℃）醋酸乙酯（7∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照则无对应斑点。结果见图2。
2.1.3 当归的鉴别取本品研细的粉末4 g，加甲醇20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，用乙醚振摇提取3次，15 ml/次，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。按处方比例和制备工艺制备除去当归的阴性样品，按供试品溶液制备方法操作，得当归阴性对照溶液，另取当归对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各7 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷醋酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照则无对应斑点。结果见图3。
2.1.4 天麻的鉴别取本品研细的粉末2 g，置具塞锥形瓶中，加甲醇20 ml，置60℃水浴中温浸2 h，超声波处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，用乙醚振摇提取两次，20 ml/次；水液用水饱和正丁醇振摇提取3次，20 ml/次，合并提取液，蒸干，残渣用70%乙醇10 ml溶解，加于中性氧化铝柱（5 g，内径1.5 cm，70%乙醇湿法装柱）上，用70%乙醇50 ml洗脱，收集全部洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液；按处方比例和制备工艺制备除去天麻的阴性样品，按供试品溶液制备方法操作，得天麻阴性对照溶液，另取天麻素对照品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取以上3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，醋酸乙酯甲醇水（9∶1∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照则无对应斑点。结果见图4。
左起 大黄素 供试 阴性
图1 制何首乌薄层色谱图 （略）
左起 药材 供试 阴性
图2 防风薄层色谱图 （略）
左起 药材 供试 阴性
图3 当归薄层色谱图 （略）
左起 天麻素 药材 供试 阴性
图4 天麻薄层色谱图 （略）
2.2 头痛宁片中大黄素的含量测定
2.2.1 色谱条件与系统适用性实验 色谱柱为Dikma 5μm C18 4.6 mm×250 mm； 流动相为甲醇0.1%磷酸（80∶20）；流速1 ml /min；检测波长254 nm；柱温室温；进样量10 μl。通过专属性考察表明在上述色谱条件下其他组分对大黄素峰无干扰分离良好。见图5~7。
2.2.2 溶液配制对照品溶液制备：精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每毫升含21 μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品研细，混匀，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 ml，密塞，称定重量，超声波处理20 min（功率250 W，频率20 kHz），放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 线性关系的考察分别吸取对照品溶液2.5，5.0，10，15，20，25 μl，按上述色谱条件测定，结果见表5。以峰面积为纵坐标，大黄素进样量为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=7 000 000X-42 344，r=1.000，结果表明大黄素在0.052 5~0.525 μg范围内线性关系良好。
2.2.4 精密度实验取本品按供试品溶液制备方法操作得共试品溶液，连续进行5次测定，记录峰面积，以峰面积计算其相对标准偏差，其相对标准偏差为1.25%，表明方法精密度良好。
2.2.5 稳定性实验取本品按供试品溶液制备方法操作得共试品溶液，每2 h测定1次，连续进行测定，记录峰面积，计算其相对标准差，其相对标准偏差为1.77%，表明在12 h内，供试品溶液稳定性良好。
2.2.6 重现性实验对同一批样品按供试品溶液制备方法操作得5份样品溶液，独立进行5次测定，其相对标准偏差为1.962%，表明方法重现性良好。
图5 大黄素对照品色谱图（略）
图6 头痛宁片供试品色谱图（略）
图7 头痛宁片阴性对照色谱图（略）
2.2.7 回收率实验采用加样回收法。精密称取研细的样品5份，置具塞锥形瓶中，精密加入浓度为0.21 mg/ml的大黄素对照品溶液1 ml，精密加入甲醇19 ml，按供试品溶液的制备方法操作得供试品溶液，测定，计算回收率。其平均回收率为99.28%，符合要求。结果见表1。
表1 回收率实验（略）
2.2.8 样品含量测定分别取不同批号的本品，按供试品溶液的制备方法操作得供试品溶液。分别吸取对照品及供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,测定。结果见表2。
表2 样品含量测定（略）
3 讨论
在大黄素光谱扫描过程中发现其在221～288 nm处均有较强吸收，根据文献报道及样品干扰情况，以254 nm作为吸收波长能够满足含量测定要求，故选择254 nm为测定吸收波长。实验结果表明，该方法能有效地控制头痛宁片的质量。
参考文献：
［1］ 杨东辉，蔡少青，王 璇. HPLC法测定何首乌及复方虫草胶囊中大黄素、大黄素甲醚的含量［J］.中草药，2000，31(3):177.
［2］ 高咏莉.HPLC法测定清火片中大黄素的含量［J］.时珍国医国药，2004，16(3):11.
［3］ 葛秀允，代光秀.高效液相色谱法测定何首乌中大黄素的含量［J］.时珍国医国药，2002，13(12):729.
［4］ 李义平，张胜春，杨广德 .何首乌中大黄素的提取方法研究［J］.中成药，2004，26（4）：271.
(吉林天药科技有限公司，吉林 长春130012； 长春中医学院2003级研究生，吉林 长春130012）