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消痛灵搽剂质量标准研究

来源:《时珍国医国药》
摘要:【摘要】目的建立消痛灵搽剂的质量标准。方法采用薄层色谱法(TLC)对处方中的栀子、姜黄、乳香、没药进行定性鉴别。采用反相高效液相色谱法(RPHPLC)定量分析消痛灵搽剂中大黄素和大黄酚的含量。大黄素在0。...

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  【摘要】  目的建立消痛灵搽剂的质量标准。方法采用薄层色谱法(TLC)对处方中的栀子、姜黄、乳香、没药进行定性鉴别;采用反相高效液相色谱法(RPHPLC)定量分析消痛灵搽剂中大黄素和大黄酚的含量。结果TLC分离效果好,斑点清晰;大黄素在0.248~1.984μg,大黄酚在0.292~2.336 μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率大黄素为99.7%,RSD﹦0.64%;大黄酚为99.2%,RSD﹦0.89%。结论 该方法简便、准确、重复性好、能有效控制该复方制剂的质量。

  【关键词】  消痛灵搽剂; 大黄素; 大黄酚; 薄层色谱; 反相高效液相色谱

  基金项目:青海省重点科技攻关资助项目(No.2005-N-115)

  Research on Quality Standard of Xiaotongling Liniment

  YUAN Ming,  REN Yanming,ZHAO Xiehui,WEN Shaodun

  (Medical College of Qinghai University, Xining 810001, China)

  Abstract:ObjectiveTo establish the quality standard of Xiaotongling liniment.MethodsFructus Gardeniae, Rhizoma Curcumae longae, Olibanum, Myrrha were identified by TLC. The content of emodin and chrysophanol in Xiaotongling liniment was determined by RPHPLC.ResultsThe identified characteristics of chromatography were distinct and the spots were clear. The standard curve was linear within the range of 0.248~1.984μg for emodin and 0.292~2.336μg for chrysophanol.The average recovery of emodin was 99.7% with RSD of 0.64%,with that of chrysophanol was 99.2% with RSD of  0.89%.ConclusionThe method is convenient,accurate and has a good reappearance.The preparation's quality can be controlled effectively.

  Key words:Xiaotongling liniment;  Emodin;  Chrysophanol;  TLC;  HPLC

  消痛灵搽剂是由我院文绍敦教授根据中医药理论和多年临床经验,筛选有效药物研制而成的中药复方外用制剂,全方以大黄为君药,栀子为臣药,佐以姜黄、乳香、没药,具有清热止痛、化淤散结的功效,主要用于治疗急性痛风性关节炎、跌打损伤、局部淤肿疼痛等病症,临床疗效显著。为了有效控制该制剂的质量,本文建立了TLC法对栀子、姜黄、乳香、没药等4味药材进行定性鉴别;并采用RPHPLC法测定君药大黄中的大黄素和大黄酚的含量。研究结果表明,该方法具有简便、准确、重复性好、专属性强等特点,能有效控制消痛灵搽剂的质量。

  1  仪器与试药

  高效液相色谱仪(LC10AT泵,SPD10A紫外检测器,日本岛津公司);N2000型色谱数据工作站(浙江大学智能信息工程研究所);KQ100超声波清洗器(浙江昆山市超声仪器有限公司);硅胶G板(自制,规格:12 cm×24 cm);大黄素、大黄酚、栀子苷、姜黄素对照品(中国药品生物制品检定所);乳香、没药对照药材由青海大学医学院中药教研室魏全嘉教授鉴定;消痛灵搽剂及阴性对照样品(自制);甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯。

  2  薄层色谱鉴别

  2.1  栀子的TLC法鉴别 取消痛灵搽剂作为供试品溶液。 取缺栀子的阴性样品作为阴性对照溶液。另取栀子苷对照品,加甲醇制成每毫升含2 mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述溶液各3 μl,分别点样于同一块硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇(5∶2)为展开剂,展开,取出,晾干。用10%的硫酸乙醇液显色,110 ℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显浅黄色斑点,阴性对照溶液在相应的位置上无此斑点。结果见图1。

  2.2  姜黄的TLC法鉴别 取消痛灵搽剂作为供试品溶液。 取缺姜黄的阴性样品作为阴性对照溶液。另取姜黄素对照品,加甲醇制成每毫升含2 mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述溶液各3 μl,分别点样于同一块硅胶G薄层板上,以甲醇-醋酸乙酯-甲酸(5.5∶1.2∶0.6)为展开剂,展开,取出,晾干。用浓氨水显色,110 ℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显黄色斑点,阴性对照溶液在相应的位置上无此斑点。结果见图2。

  图1  栀子的TLC图谱(略)

  图2   姜黄的TLC图谱(略)

  2.3  乳香的TLC法鉴别 取消痛灵搽剂作为供试品溶液。 取缺乳香的阴性样品作为阴性对照溶液。另取乳香对照药材0.5 g,加乙醚10 ml,超声处理20 min,滤过,滤液作为对照药材溶液。吸取上述溶液各3 μl,分别点样于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30~60℃)- 醋酸乙酯(34∶6)为展开剂,展开,取出,晾干。用5%香草醛硫酸溶液显色,110 ℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显紫色斑点,而阴性对照溶液在相应的位置上无斑点。结果见图3。

  2.4   没药的TLC法鉴别 取消痛灵搽剂作为供试品溶液。 取缺没药的阴性样品作为阴性对照溶液。另取没药对照药材0.5 g,加乙醚10 ml,超声处理20 min,滤过,滤液作为对照药材溶液。吸取上述溶液各3 μl,分别点样于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-丙酮(17∶2)为展开剂,展开,取出,晾干。用5%香草醛硫酸溶液显色,110℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显紫色斑点,而阴性对照溶液在相应的位置上无斑点。结果见图4。

  图3  乳香的TLC图谱(略)

  图4  没药的TLC图谱(略)

  3  含量测定

  3.1  色谱条件 色谱柱:Hypersil C18柱(250 mm ×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇- 0.1%磷酸溶液(87∶13);检测波长:254 nm;流速:1.0 ml·min-1;进样量:10 μl。

  3.2  线性范围的考察 精密称取大黄素对照品6.2 mg,大黄酚对照品7.3 mg,分别置两个50 ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液2,4,6,10,16μl,进样,在上述色谱条件下测定峰面积,以大黄素、大黄酚进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为:Y大黄素=1.26×103 X-12.95,r=0.999 7;Y大黄酚=2.81×103 X-7.52,r=0.999 5。结果表明,大黄素、大黄酚进样量在0.248~1.984 μg和0.292~2.336 μg线性关系良好。

  3.3   供试品溶液的制备 精密量取消痛灵搽剂样品3 ml,置水浴上蒸干,残渣加适量甲醇溶解,转移至10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。

  3.4   阴性对照实验 取缺大黄阴性对照样品,按“3.3”项下方法制备阴性对照品溶液,取10 μl进样,结果在与大黄素、大黄酚对照品保留时间相同的位置上无色谱峰出现,表明缺大黄的阴性对照品溶液对测定无干扰。

  3.5   精密度实验 精密吸取大黄素、大黄酚对照品溶液各10 μl , 在上述色谱条件下连续进样5次,大黄素、大黄酚峰面积积分值的RSD分别为0.86%,1.02%,结果表明该方法的精密度良好。

  3.6   重复性实验 取同一批号样品5份,分别按“3.3”项下操作,依法测定,计算得大黄素、大黄酚的平均含量分别为0.136,0.283 mg·ml-1,RSD分别为1.53%和0.71%。

  3.7   稳定性实验 取同一供试品溶液放置不同时间(0,2,4,8,12 h)后进样,测定峰面积,结果RSD为0.23%,表明溶液在12 h内保持稳定。

  3.8  加样回收实验 取已知含量的样品5份,分别精密加入大黄素对照品溶液(0.124 mg·ml-1)、大黄酚对照品溶液(0.146 mg·ml-1)各2 ml,按“3.3”项下制备回收率测定用样品溶液,依法测定,计算回收率,大黄素平均回收率为99.7%,RSD=0.64%;大黄酚平均回收率为99.2%,RSD=0.89%,结果表明本方法的回收率好。

  3.9   样品测定 精密吸取对照品和供试品溶液,依上述条件进行测定,记录峰面积,按外标法以峰面积计算含量。结果见表1。

  表1  样品含量测定结果(略)

  4  讨论

  薄层色谱法(TLC)鉴别项下选用的展开系统均参照《中国药典》(2005年版)的鉴别方法[1]制定,方中栀子、姜黄选择主要有效成分栀子苷、姜黄素作为对照品,而乳香、没药无对照品,则选用对照药材作对照,样品及阴性对照品采用平行试验, 结果表明各检出成分分离效果好,不受其他成分的干扰,操作简便,专属性强,可作为该制剂的定性控制指标。

  大黄为消痛灵搽剂的君药,主要含有游离和结合的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚,其中大黄素具有抑菌、抗炎、免疫调节、抑制血小板聚集、改善微循环、降低血液黏度、抗氧化、清除自由基、保护肝肾等作用[2];大黄酚具有止咳、抗菌、止血、抗氧化、清除自由基等作用[3],这些药理作用在很大程度上与该复方制剂的功能主治相一致,故选择君药大黄中的大黄素、大黄酚作为质量控制指标成分,结合文献[4]用RP-HPLC进行含量测定,前处理过程简单,阴性无干扰,灵敏度高,准确性及重现性好,可作为本品的定量控制指标。

  根据样品测定结果,5批样品中大黄素的平均含量为0.131 mg·ml-1,大黄酚的平均含量为0.287 mg·ml-1,考虑到药材来源、制剂工艺等因素,建议其限度为本品含大黄以大黄素和大黄酚的总量计,不得少于0.4 mg·ml-1。

  【参考文献】

  [1] 国家药典委员会. 中国药典[S].北京:化学工业出版社,2000:18.

  [2] 张喜平,李宗芳.大黄素的药理作用研究概况[J].中国药理学通报,2003,19(8):851.

  [3] 谭晓虹,张丹参,张 力,等.大黄酚在兔体内药动学的研究[J].中国医院药学杂志,2005,26(8):947.

  [4] 王亚林,索银科,刘学东. HPLC法测定清热消炎片中大黄素和大黄酚的含量[J].西北药学杂志,2004,19(5):207.

 

作者: 未知 2009-8-31
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