高效液相色谱法测定神康宁丸中梓醇的含量

　　【摘要】目的：测定神康宁丸中梓醇的含量。方法：采用高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈：0.1%磷酸溶液(2：98)，流速为1.0ml/min，检测波长为210nm。结果：神康宁丸中梓醇的含量以地黄计0.4mg/g，回收率为97.7%(n=5)。结论：高效液相色谱法可用于评价神康宁丸的质量。

　　【关键词】  高效液相色谱法；神康宁丸；梓醇

　　神康宁丸由地黄、酸枣仁、山药等12味中药组成，主要含有梓醇、皂苷、阿魏酸等。具有清热解毒，滋阴养血，平肝安神的功效。本文采用高效液相色谱法测定神康宁丸中梓醇的含量，色谱峰分离效果好，方法简单、准确。为控制该药品的内在质量提供了可靠的方法。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器  高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD10Avp，浙大N2000色谱数据工作站。

　　1.2  试药  梓醇对照品(110808200407)由中国生物制品检定所提供，所用试剂均为色谱纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈：0.1%磷酸溶液(2：98)为流动相：柱温为35℃；流速为1.0ml/min；测定波长210nm。

　　2.2  溶液的制备  对照品溶液的制备：取梓醇对照品6mg，精密称定，置10ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀,作为对照品溶液。供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取约6.0g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流提取1h，放冷，补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml,水浴蒸干，残渣加水10ml溶解加于中性氧化铝柱(3g中性氧化铝，湿法装柱，内径1cm，分别用水20ml，甲醇20ml预洗)上，静置20min，用甲醇40ml洗脱,收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加水溶解，转移置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

　　2.3  线性关系考察  精密吸取梓醇对照品溶液2、5、8、10、15μl注入液相色谱仪，以进样量(μl)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程y=26009.29x-1829.33、r=0.9997。结果提示：梓醇的进样量在0.2492～1.8690μg范围内线性关系良好。

　　2.4  精密度考察  精密吸取同一对照品溶液各10μl，按正文2.1项下色谱条件，连续进样5次，测定色谱峰面积均值为x=263205.297，RSD为0.60%，表明精密度良好。

　　2.5  稳定性考察  精密吸取供试品溶液10μl，按0，2，4，12，36h时间间隔进样，按正文2.1项下的色谱条件，测定色谱峰面积，测定结果峰面积均值为x=203436.522，RSD为1.15%，结果表明，供试品在制备后36h内测定稳定。

　　2.6  重现性的考察  精密称取同一批样品共5份，按供试品溶液项下制备方法，依法独立测定，测定样品含量，以考察本法的重现性，结果RSD为1.65%，表明重现性良好。

　　2.7  回收率的测定  精密称取同法测定的已知含量样品(0.736mg/g)共5份，分别精密加入对照品适量，按2.2项下供试品溶液的制备方法制备，按样品含量测定方法进行测定，计算回收率，结果加样回收率平均值为97.7%，RSD为1.13%(n=50)。

　　2.8  梓醇的含量测定  取3批样品，按供试品溶液的制备方法制备，精密吸取对照品溶液10μl及供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算3批样品含量，结果分别为0.736、0.679、0.644mg/g。本实验对神康宁丸分析表明，梓醇的含量在0.644-0.736mg/g之间。

　　3  讨论

　　本品为浓缩水丸，地黄为方中君药，梓醇为其主要活性成分。经过多次筛选流动相系统，供试品溶液中梓醇在选定的色谱条件下，与相邻组分分离度良好，阴性液无干扰。经方法学考察，方法的重现性、精密度、稳定性试验均良好，回收率为97.7%。确立本制剂含量指标为梓醇，定量方法为高效液相色谱法。建议控制梓醇的含量定为0.4mg/g较合适［1-2］。

　　【参考文献】

　　［1］刘 霞，郝旭亮.HPLC测定阿胶远志膏中梓醇的含量［J］.中成药，2003，25(7)：602.

　　［2］和 健，王建国.HPLC测定清消颗粒中梓醇的含量测定［J］.中国中药杂志，2003，28(9)：883.