高效液相色谱法测定痧气丸中天麻素的含量

　　【摘要】 目的：建立高效液相色谱法测定痧气丸中天麻素的含量。方法：采用shimpack CLCODS（6 mm×150 mm）色谱柱，流动相：甲醇磷酸盐溶液（0.1 mol/L磷酸二氢钾溶液和0.1 mol/L磷酸氢二钠溶液等量混合）水(2∶3∶95)，流速1.0 mL/min，柱温35 ℃，进样量10 μL，检测波长220 nm。结果：天麻素在进样量0.01～0.05 mg/mL范围内线性关系良好，回归方程为Y=794640X+393.2（r=0.9997，n=5），平均加样回收率为98.50%，RSD为1.95%。结论：本方法快速、简便、结果准确，可用于控制该制剂的质量。

　　【关键词】  高效液相色谱法 痧气丸 天麻素

　　Determination of Gastrodin in Shaqi Pills by High Performance Chromatography

　　CUN Shican

　　(The Drug Inspection Institute of Baoshan, Yunnan Province, Yunnan Baoshan  678000, China)

　　［Abstract］ Objective:To establish a high performance chromatography (HPLC) method to assay the concentration of gastrodin in Shaqi pills. Methods: Shimpack CLCODS (6 mm×150 mm) column and a mobile phase of methanolphosphate solution (0.1 mol/L KH2PO4 solution and 0.1 mol/L Na2HPO4 solution contour mixed)water (2∶3∶95) were used with the flow rate of 1.0 mL/min and the column temperature of 35 ℃. The detection wave length was 220 nm. Results: There was a linear relationship within the range of 0.01～0.05 mg/mL and the regression equation was Y=794640X+393.2 (r=0.9997, n=5). The average relative recovery rate was 98.50% and RSD was 1.95%. Conclusions: This method is simple and accurate and able to control the quality of the preparation.

　　［Key words］ High performance chromatography; Shaqi pills; Gastrodin

　　痧气丸收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十五册，由麻黄、天麻、麝香、大黄、朱砂等11味中药组成。具有祛暑辟秽，开窍解毒的功效。临床上用于水土不服、痧胀腹痛、恶心吐泻、头痛、牙关紧闭、四肢逆冷、头昏目眩等症。其中天麻素是天麻的有效成分，在现行质量标准中无含量测定指标［1］。目前为止，用高效液相色谱法测定痧气丸中天麻素含量的方法尚无报道。为了更好地控制该制剂的质量，本实验建立了高效液相色谱法测定痧气丸中天麻素的含量，并经方法学考察，认为本法简便快速，结果准确，可用于该制剂的质量控制。

　　1  仪器与试药

　　LC10AD高效液相色谱仪，SPD10A紫外可见光检测器，CTO10A柱温箱，CR6A数据处理机(日本岛津公司)；CQ250 超声波清洗器(中船总公司七二六研究所)。天麻素对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号为08079903)；痧气丸(云南省腾冲县制药厂，规格：0.5 g/瓶，批号：061018、070356、071014)；甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾、磷酸氢二钠均为分析纯，水为纯化水。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

　　色谱柱:shimpack CLCODS(6 mm×150 mm)；流动相：甲醇磷酸盐溶液（0.1 mol/L磷酸二氢钾溶液和0.1 mol/L磷酸氢二钠溶液等量混合）水(2∶3∶95)，流速1.0 mL/min；检测波长220 nm；灵敏度0.30 AUFS；柱温35 ℃；进样量10 μL。理论塔板数按天麻素峰计算为2 870，拖尾因子为0.98。此条件下主峰与杂质峰达到基线分离。

　　2.2  对照品储备液的配制

　　精密称取在80 ℃真空减压干燥1 h的天麻素对照品［2］10.09 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得到浓度为0.1009 mg/mL的对照品储备溶液，备用。

　　2.3  供试品溶液的制备

　　取本品0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%的甲醇溶液25 mL，密塞，称定重量。超声处理2 h，放冷，再称定重量，用80%的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液备用。

　　2.4  阴性对照溶液的制备

　　按痧气丸处方量和工艺制备方法制成不含天麻的阴性样品。取阴性样品0.5 g，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

　　2.5  阴性对照试验

　　按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，结果见图1。阴性对照溶液中的组分不干扰供试品溶液中天麻素的测定。天麻素的保留时间约为18.8 min。

　　A对照品，B供试品，C阴性对照品，1天麻素

　　图1  高效液相色谱图（略）

　　2.6  线性试验

　　分别精密移取0.1009 mg/mL的对照品储备液1、2、3、4、5 mL， 置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，分别精密吸取上述溶液10 μL进样，测定峰面积，以色谱峰面积（Y）为纵坐标，对照品溶液浓度（X）为横坐标，外标法得天麻素标准溶液的线性回归方程为：Y=794640X+393.2（r=0.9997，n=5）。结果表明天麻素浓度在0.01～0.05 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

　　2.7  精密度试验

　　精密移取0.1009 mg/mL的对照品储备液3 mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得浓度为0.03027 mg/mL对照品溶液，取上述溶液10 μL，一天内重复进样5次，测得各次峰面积分别为24 141、24 234、24 325、24 618、24 886，以峰面积计算精密度，结果日内RSD为1.25%。

　　2.8  加样回收率试验

　　精密称取已知含量的样品（批号为070356）6份，每份0.5 g，分别置具塞锥形瓶中，精密加入0.1009 mg/mL天麻素对照品储备液5 mL，天麻素加入量为0.5045 mg，按“2.3”项下方法制成供试品溶液，取10 μL进样测定并计算回收率，结果见表1。

　　表1  天麻素加样回收率试验（略）

　　2.9  稳定性实验

　　取同一样品（批号为070356），按“2.3”项下方法操作，分别在制备后0、2、4、6、8、10、12 h进样测定天麻素的含量，结果天麻素的含量分别为1.132、1.133、1.168、1.130、1.123、1.115、1.126 mg/g，RSD为1.49%。表明样品溶液在12 h内稳定性良好。

　　2.10  样品测定

　　取3批不同批号的样品，按“2.3” 项下方法制成供试品溶液。另取0.1009 mg/mL的对照品储备液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，制成对照品溶液。分别取供试品和对照品溶液各10 μL，按上述色谱条件测定并按外标法计算天麻素的含量，结果见表2。

　　表2  样品含量测定结果（略）

　　3  讨论

　　本文曾以不同比例甲醇水冰醋酸、乙腈0.05%磷酸溶液、甲醇磷酸盐溶液（0.1 mol/L磷酸二氢钾溶液和0.1 mol/L磷酸氢二钠溶液等量混合）水为流动相，在天麻素最大吸收峰270、220、200 nm处分别进行实验，结果表明：采用甲醇磷酸盐溶液（0.1 mol/L磷酸二氢钾溶液和0.1 mol/L磷酸氢二钠溶液等量混合）水（2∶3∶95）为流动相，在220 nm波长处测定，供试品液中天麻素峰分离度较好，拖尾因子为0.98，且其它组分峰出峰较少。

　　甲醇的浓度对制剂中天麻素的提取率有显著影响。本文参照有关文献，以80%甲醇为提取溶剂［3］，采用超声处理2 h、回流提取2 h、超声处理30 min后静置24 h再超声处理2 h三种提取方法对同一样品（批号为070356）进行测定，天麻素含量分别为1.136、1.133、1.121 mg/g，结果表明用80%甲醇溶液超声处理2 h，能保证较高的提取率，且含量和回收率较理想。

　　本试验在天麻素含量测定方法文献［4，5］的基础上，以文中色谱条件测定天麻素含量，供试品溶液中其他杂质峰不影响主成分峰的含量测定，试验结果准确，方法快速、简便，可用于控制该制剂的质量。

　　【参考文献】

　　［1］ 中华人民共和国药典委员会. 卫生部药品标准中药成方制剂［S］. 第十五册. 1997: 208.

　　［2］ 中华人民共和国药典委员会编. 中华人民共和国药典［S］. 2005年(一部). 北京: 化学工业出版社, 2005: 39.

　　［3］ 秦 剑, 邓开英, 李胜容, 等. RPHPLC测定天麻丸中天麻素含量［J］. 中成药, 2003, 25(6): 508509.

　　［4］ 徐自升, 丁安伟, 潘 杨, 等. HPLC测定天舒滴丸中天麻素含量［J］. 中成药, 2004, 26(3): 252253.

　　［5］ 刘哨凡, 黄诗远, 田兆红, 等. HPLC测定天麻胶囊中天麻素含量［J］. 中国药师, 2007, 10(2): 147148.