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高效液相色谱法测定氢氯噻嗪原料的含量

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摘要:【摘要】目的:建立氢氯噻嗪原料药的含量测定方法。结论:该方法专属性强,灵敏度高,重复性好,操作简便,适用于氢氯噻嗪原料的质量控制。【关键词】氢氯噻嗪高效液相色谱法含量测定HPLCDeterminationofHydrochlorothiazideZENGTan,ZHOULin(ChongqingInstituteforDrugControl,Chongqing400121,China)[......

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  【摘要】 目的:建立氢氯噻嗪原料药的含量测定方法。方法:采用C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以0.1 mol/L磷酸二氢钠乙腈(9∶1)(用磷酸调节pH值至3.0)为流动相,检测波长271 nm,流速1.5 mL/min,柱温30 ℃。结果:氢氯噻嗪浓度在0.004~0.20 mg/mL浓度范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999,n=7),加样回收率99.82%,RSD=0.98%。结论:该方法专属性强,灵敏度高,重复性好,操作简便,适用于氢氯噻嗪原料的质量控制。

  【关键词】  氢氯噻嗪 高效液相色谱法 含量测定

  HPLC Determination of Hydrochlorothiazide

  ZENG Tan, ZHOU Lin

  (Chongqing Institute for Drug Control, Chongqing  400121, China)

  [Abstract] Objective:To develop an HPLC method for the determination of Hydrochlorothiazide. Methods: The chromatographic separation was performed on a C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) held in the oven of 30 ℃. The mobile phase consisted of a degassed mixture of 0.1 mol/L monobasic sodium phosphate and acetonitrile (9:1), adjusted with phosphoric acid to a pH of 3.0. The flow rate was 1.5 mL/min and UV detection wavelength was 271 nm. Results: The calibration of the responses of hydrochlorothiazide ranged from 0.004 to 0.20 mg/mL with a correlation coefficient of 0.9999, recovery rate of 99.82% and RSD=0.98%. Conclusions: The method proves to be quick, simple and sensitive. It could be applied into the quality control of hydrochlorothiazide.

  [Key words] Hydrochlorothiazide; High performance liquid chromatography; Determination of content

  氢氯噻嗪是一种临床应用十分普遍的药物,主要抑制髓袢升支皮质部对Na+和Cl的重吸收,使肾脏对氯化钠的排泄增加而产生利尿作用,常与其他降压药物配合作用治疗高血压。原质量标准采用甲醇钠滴定法测定其含量[1],毒性较大且操作不便,方法精密度差。本研究参考国内外氢氯噻嗪原料的质量标准[2],建立了氢氯噻嗪含量测定的HPLC方法。

  1  仪器和试药

  Agilent 1100高效液相色谱仪(配有紫外检测器及二极管阵列检测器),AE240型电子天平(瑞士梅特勒)。磷酸二氢钠(分析纯,重庆北碚化学试剂厂)、乙腈(色谱纯,山东禹王实业有限公司化工分公司)、水(二次蒸馏水)、氢氯噻嗪对照品(中国药品生物制品检定所,批号为100309200702,含量99.8%)。

  2  方法与结果

  2.1  测定波长选择

  取氢氯噻嗪对照品20 mg,置50 mL量瓶中,用甲醇乙腈(1∶1)5 mL溶解,用流动相稀释至刻度,摇匀,精密量取此溶液5 mL置50 mL容量瓶中,用流动相稀释至刻度,在200~400 nm波长处扫描,扫描结果见图1。由图可见,最大吸收波长为224 nm、271 nm。224 nm波长靠近末端吸收且杂质在此波长处吸收较大,故选择271 nm做为检测波长。

  图1  氢氯噻嗪紫外扫描图谱(略)

  2.2  色谱条件及系统适用性实验

  色谱柱:pHenomenex C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:0.1 mol/L磷酸二氢钠溶液乙腈(9∶1)(用磷酸调节pH值至3.0);测定波长:271 nm;流速:1.5 mL/min;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。在此色谱条件下,氢氯噻嗪峰的保留时间为11.217 min,理论塔板数为19 054,氢氯噻嗪峰与最近杂质峰的分离度为13.58。色谱图见图2。

  图2  氢氯噻嗪原料色谱图(略)

  2.3  线性范围

  精密称取氢氯噻嗪对照品20.00 mg,置50 mL量瓶中,用甲醇乙腈(1∶1)5 mL溶解并用流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照品储备液。分别量取对照品储备液适量,用流动相稀释制成每毫升含0.004、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.20 mg的溶液。照上述色谱条件,分别各取10 μL注入液相色谱仪,记录色谱图,以浓度为x,峰面积为y,计算回归方程为:y=1.5553+24769.1x,r=0.9999(n=7),表明氢氯噻嗪在0.004~0.20 mg/mL浓度范围内与峰面积的线性关系良好。

  2.4  检测限与定量限

  取浓度为0.1004 μg/mL的氢氯噻嗪对照品溶液进样10 μL,氢氯噻嗪峰的信噪比为3.7。以S/N为3和10分别计算氢氯噻嗪的检测限和定量限,分别为0.0814 μg、0.269 μg。

  2.5  专属性试验

  称取氢氯噻嗪约20 mg,分别经高温破坏(置坩锅中,电炉上加热至供试品熔融变色)、酸破坏(加0.1 mol/L盐酸溶液5 mL,置水浴中煮沸1 h,放冷,调节pH值至中性)、碱破坏(加0.1 mol/L氢氧化钠溶液5 mL,置水浴中煮沸1 h,放冷,调节pH值至中性)、氧化破坏(加36%过氧化氢溶液5 mL,室温放置1 h)、光照破坏(1 500 lx光照48 h)后,再分别加甲醇乙腈(1∶1)5 mL溶解,加流动相稀释至50 mL,摇匀,过滤,精密量取续滤液5 mL置50 mL容量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。取上述破坏后的样品溶液,照上述色谱条件分析,记录色谱图。色谱图见图3。

  图3  专属性试验色谱图(略)

  从上述图谱可以看出,本品经破坏后产生的降解产物均能与氢氯噻嗪主峰有效分离,用二极管阵列检测器在210 nm至400 nm的范围内扫描,氢氯噻嗪主峰的峰纯度均在990以上。说明上述条件可用于测定氢氯噻嗪的含量。

  2.6  精密度试验

  取“2.3”项下浓度为0.04 mg/mL的溶液,照上述色谱条件进行分析,连续进样5次,记录色谱图。峰面积的RSD为0.05%。

  2.7  系统耐用性

  分别用Agilent公司、pHenomenex公司、Aichrom公司的色谱柱按上述条件试验,不同公司的色谱柱对检测影响不大,结果基本一致。说明本方法的耐用性较好。

  2.8  重复性试验

  精密称取氢氯噻嗪原料共6份,各约20 mg,置50 mL量瓶中,用甲醇乙腈(1∶1)5 mL溶解,用流动相稀释至刻度,摇匀,精密量取此溶液5 mL置50 mL容量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。氢氯噻嗪对照品同法配制作为对照品溶液。按上述色谱条件分析,记录色谱图。计算氢氯噻嗪原料含量平均值为99.32%,RSD为1.23%。

  2.9  回收率试验

  精密称取氢氯噻嗪样品和对照品各20.00 mg,浓度均精密定容为0.04 mg/mL,各取10 mL样品溶液,分别精密加入80%、100%、120%(以体积计)的对照品溶液,精密量取10 μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件进行测定,以外标法定量,计算回收率,结果见表1。

  表1  加样回收率试验结果(略)

  3  讨论

  氢氯噻嗪原料药的现行质量标准为《中国药典》2005年版二部,含量测定项采用非水滴定法,专属性不强,氢氯噻嗪的合成中间体及水解产物4氨基6氯1,3苯二磺酰胺会消耗滴定液,此外甲醇钠滴定液毒性较大且浓度不稳定,在实际工作中既不环保也不方便操作。采用高效液相色谱法测定,方法简便可行。氢氯噻嗪合成中间体及水解产物4氨基6氯1,3苯二磺酰胺和氢氯噻嗪主峰分离度较好,减少了该杂质对含量测定的影响。以流动相配制的溶液,在12 h内稳定。该方法专属性强,灵敏度高,重复性好,操作简便,适用于氢氯噻嗪原料的质量控制。

  【参考文献】

  [1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(二部)[S]. 北京: 化学工业出版社, 2005: 406.

  [2] 美国药典委员会. 美国药典[S]. 第27版. 2004: 918.

 

作者: 未知 2009-9-12
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