高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷的含量

　　【摘要】 目的：建立高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷的含量。方法：采用shimpack CLCODS色谱柱（6 mm×150 mm），流动相：甲醇水冰醋酸（45∶55∶0.5），流速1.0 mL/min，柱温40 ℃，进样量10 μL，检测波长277 nm。结果：黄芩苷在进样量0.01～0.07 mg/mL范围内浓度与峰面积线性关系良好，回归方程为Y=1486379X3748（r=0.9999，n=7），平均加样回收率为103.12%，RSD为1.76%。结论：本方法快速、简便、结果准确，可用于控制该制剂的质量。

　　【关键词】  高效液相色谱法 小儿惊风七厘散 黄芩苷

　　［Abstract］ Objective:To establish an high performance chromatography (HPLC) method to assay the concentration of baicalin in Xiaoer Jingfeng Qili San. Methods: Shimpack CLCODS (6 mm×150 mm) column and a mobile phase of methanol, water and glacial acetic acid (45∶55∶0.5) was used with the flow rate of 1.0 mL/min and the column temperature of 40 ℃. The detection wavelength was 277 nm. Results: There was a linear relationship within the range of 0.01～0.07 mg/mL and the regression equation was Y=1486379X3748 (r=0.9999, n=7). The recovery rate was 103.12% and RSD was 1.76%. Conclusions: This method is simple and accurate and able to control the quality of the preparation.

　　［Key words］ High performance liquid chromatography; Xiaoer Jingfeng Qili San; Baicalin

　　小儿惊风七厘散收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十一册，由牛黄、麝香、天麻、黄芩、黄连等33味中药组成，具有祛风化痰、解热镇惊的功效。临床上用于小儿外感风邪、惊风抽搐、咳吐痰涎、食滞呕吐、腹痛泄泻等症。其中黄芩苷是黄芩的有效成分，在现行质量标准中无含量测定指标［1］。目前为止，用高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷含量尚无报道。为了更好地控制该制剂的质量，本实验建立了高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷的含量，并经方法学考察，认为本法简便快速，结果准确，可用于该制剂质量控制。

　　1  仪器与试药

　　LC10AD 高效液相色谱仪，SPD10A紫外可见光检测器，CTO10A柱温箱，CR6A数据处理机（日本岛津公司）；CQ250 超声波清洗器（中船总公司七二六研究所）。黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号为110715200514）；小儿惊风七厘散（腾冲县东方红制药厂，规格：0.2 g/瓶，批号：20060706、20070703、20071105）；甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为纯化水。

　　2  方法与结果

　　2.1   色谱条件

　　色谱柱：shimpack CLCODS色谱柱（6 mm×150 mm）；流动相：甲醇水冰醋酸（45∶55∶0.5）［2］，流速1.0 mL/min；检测波长：277 nm；柱温：40 ℃；进样量：10 μL。理论塔板数按黄芩苷峰计算为4 156，拖尾因子为1.03。此条件下主峰与杂质峰达到基线分离。

　　2.2  对照品储备液的配制

　　精密称取真空减压干燥至恒重的黄芩苷对照品10.0 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.1 mg/mL的对照品储备液，备用。

　　2.3  供试品溶液的制备

　　取本品0.1 g，精密称定，置25 mL容量瓶中，加50%的甲醇溶液适量，超声处理30 min，放冷，用50%的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液备用。

　　2.4  阴性对照溶液的制备

　　按小儿惊风七厘散处方量和工艺制备方法制成不含黄芩的阴性样品。取阴性样品0.1 g，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

　　2.5  阴性对照试验

　　按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，结果见图1。阴性对照溶液中的组分不干扰供试品溶液中黄芩苷的测定。黄芩苷的保留时间为15.8 min。

　　图1  高效液相色谱图（1黄芩苷）（略）

　　2.6  标准曲线

　　分别精密量取0.1 mg/mL的对照品储备液1、2、3、4、5、6、7 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，分别精密吸取上述溶液10 μL进样，测定峰面积，以色谱峰面积（Y）为纵坐标，对照品溶液浓度（X）为横坐标，外标法得黄芩苷标准溶液的线性回归方程为：Y=1486379X3748（r=0.9999，n=7），结果表明黄芩苷浓度在0.01～0.07 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

　　2.7  精密度试验

　　精密量取浓度为0.1 mg/mL的对照品储备液3 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得浓度为0.03 mg/mL对照品溶液，取上述溶液10 μL，一天内重复进样5次，测得各次峰面积分别为40410、40437、40504、40892、40632，以峰面积计算精密度，结果日内RSD为0.49%。

　　2.8  加样回收率试验

　　精密称取已知含量的样品（批号为20060706）6份，每份0.1 g，分别置25 mL容量瓶中，精密加入0.1 mg/mL黄芩苷对照品储备液3 mL，黄芩苷加入量为0.30 mg，按“2.3”项下方法制成供试品溶液，取10 μL进样测定并计算回收率，结果见表1。

　　表1  黄芩苷加样回收率试验（略）

　　2.9  稳定性试验

　　取同一样品（批号为20060706），按“2.3”项下方法进行操作，分别在制备后0、2、4、6、8、10、12 h进样测定黄芩苷的含量，结果黄芩苷的含量分别为2.906、2.915、2.924、2.881、2.863、2.841、2.873 mg/g，RSD为1.0%。表明样品溶液在12 h内稳定性良好。

　　2.10  样品测定

　　取3批不同批号的样品，按“2.3”项下方法制成供试品溶液。另取0.1 mg/mL的对照品储备液2 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，制成对照品溶液。分别取供试品和对照品溶液各10 μL，按上述色谱条件测定并按外标法计算黄芩苷的含量，结果见表2。

　　表2  样品含量测定结果（略）

　　3  讨论

　　本文曾以不同比例甲醇水冰醋酸、乙腈水冰醋酸为流动相进行实验，结果表明采用甲醇水冰醋酸（45∶55∶0.5）为流动相，供试品溶液黄芩苷峰与其他杂质成分峰分离较好。

　　黄芩苷易溶于稀醇溶液中［3］，在甲醇、水中溶解较少［4］。笔者曾用甲醇、50%甲醇溶液、甲醇∶盐酸（100∶1）溶液超声提取，另外对提取时间进行考察，选择20、30、40 min不同时间提取，结果表明用50%甲醇溶液超声处理30 min，能保证较高的提取率，且含量和回收率较理想。本试验在黄芩苷含量测定方法文献［5，6］的基础上，以文中色谱条件测定黄芩苷含量，供试品溶液中其他杂质峰不影响主成分峰的含量测定，结果准确，方法快速、简便，可用于该制剂的质量控制。

　　【参考文献】

　　［1］ 中华人民共和国药典委员会. 卫生部药品标准中药成方制剂［S］. 第十一册. 1996: 23.

　　［2］ 中华人民共和国药典委员会. 中华人民共和国药典(一部) ［S］. 2005年版. 北京: 化学工业出版社, 2005: 579.

　　［3］ 孙 芳, 汪晓军, 党宏万. 复方黄芩颗粒质量标准研究［J］. 中国药师, 2005, 8(9): 724725.

　　［4］ 粱生旺. 中药制剂定量分析［M］. 北京: 中国中医药出版社, 1997: 204205.

　　［5］ 李延雪, 苏玉娟, 宋宝鹏. HPLC法测定牛黄上清片中黄芩苷的含量［J］. 中国药品标准, 2006, 7(3): 6162.

　　［6］ 刘 刚, 邹 军, 陈志明. 高效液相色谱法测定鼻渊灵颗粒中黄芩苷含量［J］. 医药导报, 2005, 24(10): 952953.