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【摘要】 目的：建立止喘口服液中盐酸麻黄碱的含量测定法。方法：采用高效液相色谱法，选用Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；流动相为乙腈0.1%磷酸溶液（10∶90，V/V）；检测波长：207 nm；流速0.7 mL/min；进样量20 μL；柱温：室温。结果：盐酸麻黄碱在4.5～27.0 mg/L范围内线性关系良好（r=0.999 8，n=6），平均回收率为98.99%，RSD为0.96%。结论：本法简便快捷、灵敏，结果准确，可用于止喘口服液中盐酸麻黄碱的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱法；盐酸麻黄碱；止喘口服液
［Abstract］ Objective:To develop a method for the determination of ephedrine hydrochloride in Zhichuan oral solution. Methods: HPLC method was used. The column was Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm). The mobile phase was acetonitrile0.1% phosphoric acid solution (10∶90, V/V). The detection wavelength was 207 nm. The flow rate was 0.7 mL/min and the injection volume was 20 μL.Results: The liner range of ephedrine hydrochloride was 4.5～27.0 mg/L (r=0.9998, n=6). This average recovery was 98.99% and RSD was 0.96%. Conclusions: This method is simple, rapid, sensitive and accurate, and can be used as a method of quality control for ephedrine hydrochloride in Zhichuan oral solution.
［Key words］ High performance liquid chromatography; Ephedrine hydrochloride; Zhichuan oral solution
止喘口服液为本院临床验方，由盐酸麻黄碱、盐酸苯海拉明等组成，具有平喘、抗过敏作用，经多年临床验证对小儿支气管哮喘具有良好疗效，且副作用小。该制剂用紫外分光光度法测定盐酸麻黄碱的含量［1］，样品处理繁琐费时，本实验选用高效液相色谱法进行测定，建立了专属性好、简便可行的含量测定方法，适用于该制剂中盐酸麻黄碱的质量控制。
1 材料
SHIMDZU高效液相色谱仪，SPD10A紫外检测器，Classvp色谱工作站（日本岛津），盐酸麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号171242200405），止喘口服液［批准文号：赣药制字（2004）第H0304号，江西省儿童医院制剂室自制］；乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为纯化水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：乙腈0.1%磷酸溶液（10∶90，V/V）；检测波长：207 nm；流速0.7 mL/min；柱温：室温；进样量20 μL。在此条件下盐酸麻黄碱与其它组分能达到基线分离，理论塔板数按盐酸麻黄碱计算应不低于6 000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取105 ℃干燥至恒重的盐酸麻黄碱对照品适量，加流动相制成15 mg/L的溶液，作为储备液，备用。
2.2.2 供试品溶液 精密量取止喘口服液2 mL，置于25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。用0.45 μm微孔滤膜过滤。精密量取续滤液2 mL，置于10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.3 阴性对照液 按处方比例及工艺，制备缺盐酸麻黄碱的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备不含盐酸麻黄碱的阴性样品溶液。
2.3 系统适应性及专属性考察
分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各20 μL注入高效液相色谱仪，阴性对照品在盐酸麻黄碱峰位置处无吸收峰，即其它成分对测定无干扰，盐酸麻黄碱峰与其它组分峰基线分离良好，见图1，对照品溶液及供试品溶液主峰的保留时间一致，保留时间约13 min。
2.4 线性关系考察
精密吸取对照品储备液适量，用流动相稀释至4.5、9.0、13.5、18.0、22.5、27.0 mg/L 6个不同浓度，在上述色谱条件下，精密量取以上溶液各20 μL，注入
图1 盐酸麻黄碱色谱图
液相色谱仪，以峰面积Y对浓度X进行线性回归，回归方程为Y=58 647.6X+20 917.1，r=0.999 8，n=6，在4.5～27.0 mg/L浓度范围内峰面积对浓度的线性关系良好。
2.5 进样精密度试验
精密量取15 mg/L的对照品储备液0.18 mL，于100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，得浓度为0.027 mg/mL盐酸麻黄碱对照品溶液，在上述色谱条件下，取上述溶液20 μL，重复进样5次，以峰面积计算精密度，测得盐酸麻黄碱峰面积值为1 609 964、1 591 984、1 610 760、1 616 328、1 620 406，RSD为0.68%，表明精密度良好。
2.6 重复性试验
取同一批口服液5份，按“2.2.2”项下供试品处理方法处理样品，按上述色谱条件测定，测得样品盐酸麻黄碱含量分别为12.14、12.54、12.51、12.60、12.78 mg/L，RSD为0.12%，表明重复性良好。
2.7 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12 h进行测定，其含量RSD为0.15%，表明12 h内测定结果基本稳定。
2.8 加样回收试验
精密移取已知含量的样品9份，分别加入高、中、低3个浓度的盐酸麻黄碱对照品各3份，在上述色谱条件下，每次进样20 μL，注入高效液相色谱仪，测定结果见表1。
2.9 样品测定
取4批次样品，按供试品溶液的制备方法制备，另精密称取盐酸麻黄碱对照品适量，配成一定的浓度（13.44 mg/L），分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μL，按上述色谱条件测定，记录色谱图，按外标法计算含量，结果见表2。
3 讨论
用高效液相色谱法测定盐酸麻黄碱的含量，不同的文献报道，检测波长、流动相有所不同［25］。本文将适量浓度的盐酸麻黄碱对照品溶液在200～400 nm范表1 加样回收率试验结果表2 样品测定结果
围内进行扫描，结果显示盐酸麻黄碱在207 nm处有最大吸收，且其它组分在该波长处无干扰，因此，选择该波长作为检测波长。曾以乙腈磷酸二氢钾缓冲液、甲醇水、甲醇0.01 mol/L磷酸氢二钾为流动相，盐酸麻黄碱有拖尾峰出现，分离效果差，而以乙腈0.1%磷酸溶液为流动相，盐酸麻黄碱在4.5～27.0 mg/L范围内，溶液的浓度与峰面积呈良好的线性关系，检测灵敏度高，保留时间适宜。
本实验采用高效液相色谱法测定止喘口服液中盐酸麻黄碱的含量，确定了色谱条件及检测浓度范围，本方法简便、快速、准确，解决了紫外分光光度法测定时样品处理繁琐费时造成的误差。采用紫外分光光度法测定，在样品处理时需精密加入茚三酮溶液（临用新配），用1%碳酸钠溶液调pH至7.8～7.9，然后置水浴中加热10 min，迅即放冷，精密加水7 mL再测定。而采用HPLC法样品只需过滤稀释后直接进样，节省了时间，也节约了试剂，适用于盐酸麻黄碱的含量测定。
【参考文献】
［1］ 中华人民共和国药典委员会. 中华人民共和国药典［S］. 2005年版（二部）. 北京: 化学工业版社, 2005: 569.
［2］ 高向波, 王玉梅. HPLC法同时测定复方氨茶碱口服液中氨茶碱和盐酸麻黄碱的含量［J］. 儿科药学杂志, 2007, 13(3): 2425.
［3］ 范义风, 卢剑波. 高效液相色谱法测定止喘合剂中盐酸麻黄碱的含量［J］. 交通医学, 2006, 20(3): 349351.
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