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【摘要】 目的：对风湿定片中的丹皮酚进行含量测定。方法：采用HPLC法，以DiamonsilC18为色谱柱，以甲醇水（50∶50）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为274 nm。结果：丹皮酚在6～70 μg/mL范围内线性关系良好，相关系数r=0.9999；平均回收率为99.60%，RSD=1.23% (n=6)。结论：本方法结果准确，重现性好，可用于风湿定片中丹皮酚的含量测定。
【关键词】 丹皮酚；风湿定片；高效液相色谱；含量测定
［Abstract］ Objective: To establish an assay method to determine paeonol in Fengshiding tablets. Methods: By HPLC was employed with DiamonsilC18 as the column, methanol and water (50∶50) as the mobile phase, the flow rate at 1.0 mL/min and the detection wavelength at 274 nm. Results: The calibration curve of paeonol was linear from 6 μg/mL to 70 μg/mL with r=0.9999; the average recovery was 99.60% with RSD 1.23% (n=6). Conclusions: This reproducible and reliable HPLC analysis provides a quantitation of Fengshiding tablets.
［Key words］ Paeonol; Fengshiding tablets; HPLC; Assay
风湿定片为部颁标准中药成方制剂12册中收载的品种，由八角枫、白芷、徐长卿、甘草四味药组成，具有活血通络、除痹止痛的作用，用于风湿性关节炎、类风湿性关节炎、颈肋神经痛、坐骨神经痛。丹皮酚是徐长卿的主要成分之一，许多含徐长卿的中药制剂均以丹皮酚作为质控指标。因原标准中没有含量测定项，无法有效控制药品质量，为了提高制剂质量标准，更有效地控制该药物的质量，本文采用HPLC法测定风湿定片中丹皮酚的含量，现报道如下。
1 仪器与试剂
Agilent 1100型高效液相色谱仪(带自动进样器，MWD紫外检测器)；KQ250DE型数控超声波清洗器；UV2210紫外分光光度仪；丹皮酚对照品(供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号：07089704)；风湿定片(陕西兴邦药业有限公司)；甲醇(色谱纯，德国Merck公司)；水为重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
DiamonsilODS色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；流动相：甲醇水（50∶50）；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：274 nm；进样量：20 μL。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇制成每1 mL中含对照品20 μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品10片，研细，约取0.2 g，精密称定，置25 mL容量瓶中，加入甲醇溶解定容后滤过，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备
取除徐长卿以外的药材，按处方及制备方法制得不含徐长卿的阴性片若干。取阴性片10片，研细，约取0.2 g,精密称定，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。
2.5 系统适应性试验
按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，分别注入色谱仪，结果见图1。实验结果表明，阴性对照溶液中的组分不干扰丹皮酚的测定。理论板数按丹皮酚峰计不低于3 000。
2.6 线性关系考察
精密称取丹皮酚对照品11.9 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇适量，使溶解，稀释至刻度，摇匀。分别精密移取1.25、2.5、5.0、7.5、10.0、15 mL于25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别吸取20 μL，注入液相色谱仪中，将样品浓度与峰面积进行回归处理，得回归方程：Y=100.22X+25.619，r=0.9999，结果表明，本方法中丹皮酚在6～70 μg/mL浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好。
2.7 精密度试验
吸取对照品溶液重复进样5次，测得峰面积的RSD为0.88%，结果表明，精密度良好。
2.8 稳定性试验
在室温条件下，取风湿定片（批号：050601）样品粉末约0.15 g，精密称定，按供试品溶液制备方法制得供试品溶液。精密吸取供试品溶液20 μL，按上述色谱条件，在0、2、4、8、12、24 h分别按上述色谱条件进样测定，测得峰面积的RSD为0.24% (n=6)。结果表明，供试品溶液在24 h内稳定。
2.9 重复性试验
取风湿定片（批号：050601）样品粉末约0.2 g，精密称定，共6份，按供试品溶液制备方法制得6份供试品溶液；按上述色谱条件测定，计算供试品中每粒含丹皮酚分别为0.61、0.60、0.59、0.60、0.58、0.60 mg（RSD为1.73%），表明本文方法重现性较好。
2.10 回收率试验
称取丹皮酚对照品约10 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加甲醇定容，混合均匀，备用。取风湿定片（批号：050601）样品粉末约0.1 g，精密称定，共6份，置25 mL具塞锥形瓶中。依次分别精密加入上述丹皮酚对照品溶液适量，按上述方法测定，结果见表1。
2.11 样品测定
3批样品各取2份，按样品测定方法进行测定，记录峰面积，按外标法计算丹皮酚的含量，结果见表2。
3 讨论
3.1 波长的选择
用紫外分光光度计对丹皮酚对照品溶液作220～320 nm波长扫描，其最大吸收波长为274 nm，选择此波长作为检测波长。表1 样品回收率测定结果表2 风湿定片中丹皮酚含量
3.2 流动相的选择
对HPLC分析时流动相的组成和配比，参考了药典等文献，比较了甲醇水（45∶55）［1］、甲醇水（50∶50）［2, 3］、甲醇水（55∶45）［4］、甲醇水（60∶40）［5］、甲醇水（70∶30）［6］、甲醇水（80∶20）［7］等不同流动相，并针对本制剂处方的特点进行了探索。结果以甲醇水（50∶50）比例最佳，峰形与柱形较好，分离效果较好，故选用甲醇水（50∶50）作为流动相。
本文建立了风湿定片中丹皮酚含量测定的高效液相色谱法，该方法简便、灵敏、快速、准确，可以作为风湿定片质量控制标准。
【参考文献】
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