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高效液相色谱法测定风湿定片中丹皮酚的含量

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摘要:【摘要】目的:对风湿定片中的丹皮酚进行含量测定。结论:本方法结果准确,重现性好,可用于风湿定片中丹皮酚的含量测定。风湿定片。含量测定[Abstract]Objective:ToestablishanassaymethodtodeterminepaeonolinFengshidingtablets。...

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  【摘要】  目的:对风湿定片中的丹皮酚进行含量测定。方法:采用HPLC法,以DiamonsilC18为色谱柱,以甲醇水(50∶50)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为274 nm。结果:丹皮酚在6~70 μg/mL范围内线性关系良好,相关系数r=0.9999;平均回收率为99.60%,RSD=1.23% (n=6)。结论:本方法结果准确,重现性好,可用于风湿定片中丹皮酚的含量测定。

  【关键词】  丹皮酚;风湿定片;高效液相色谱;含量测定

  [Abstract] Objective: To establish an assay method to determine paeonol in Fengshiding tablets. Methods: By HPLC was employed with DiamonsilC18 as the column, methanol and water (50∶50) as the mobile phase, the flow rate at 1.0 mL/min and the detection wavelength at 274 nm. Results: The calibration curve of paeonol was linear from 6 μg/mL to 70 μg/mL with r=0.9999; the average recovery was 99.60% with RSD 1.23% (n=6). Conclusions: This reproducible and reliable HPLC analysis provides a quantitation of Fengshiding tablets.

  [Key words]  Paeonol; Fengshiding tablets; HPLC; Assay

  风湿定片为部颁标准中药成方制剂12册中收载的品种,由八角枫白芷徐长卿甘草四味药组成,具有活血通络、除痹止痛的作用,用于风湿性关节炎类风湿性关节炎颈肋神经痛、坐骨神经痛。丹皮酚是徐长卿的主要成分之一,许多含徐长卿的中药制剂均以丹皮酚作为质控指标。因原标准中没有含量测定项,无法有效控制药品质量,为了提高制剂质量标准,更有效地控制该药物的质量,本文采用HPLC法测定风湿定片中丹皮酚的含量,现报道如下。

  1  仪器与试剂

  Agilent 1100型高效液相色谱仪(带自动进样器,MWD紫外检测器);KQ250DE型数控超声波清洗器;UV2210紫外分光光度仪;丹皮酚对照品(供含量测定用,中国药品生物制品检定所,批号:07089704);风湿定片(陕西兴邦药业有限公司);甲醇(色谱纯,德国Merck公司);水为重蒸馏水;其余试剂均为分析纯。

  2  方法与结果

  2.1  色谱条件

  DiamonsilODS色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相:甲醇水(50∶50);流速:1.0 mL/min;柱温:室温;检测波长:274 nm;进样量:20 μL。

  2.2  对照品溶液的制备

  精密称取丹皮酚对照品适量,加甲醇制成每1 mL中含对照品20 μg的溶液,即得。

  2.3  供试品溶液的制备

  取本品10片,研细,约取0.2 g,精密称定,置25 mL容量瓶中,加入甲醇溶解容后滤过,取续滤液,即得。

  2.4  阴性对照溶液的制备

  取除徐长卿以外的药材,按处方及制备方法制得不含徐长卿的阴性片若干。取阴性片10片,研细,约取0.2 g,精密称定,按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

  2.5  系统适应性试验

  按照上述色谱条件,吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液,分别注入色谱仪,结果见图1。实验结果表明,阴性对照溶液中的组分不干扰丹皮酚的测定。理论板数按丹皮酚峰计不低于3 000。

  2.6  线性关系考察

  精密称取丹皮酚对照品11.9 mg,置100 mL量瓶中,加甲醇适量,使溶解,稀释至刻度,摇匀。分别精密移取1.25、2.5、5.0、7.5、10.0、15 mL于25 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,分别吸取20 μL,注入液相色谱仪中,将样品浓度与峰面积进行回归处理,得回归方程:Y=100.22X+25.619,r=0.9999,结果表明,本方法中丹皮酚在6~70 μg/mL浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好。

  2.7  精密度试验

  吸取对照品溶液重复进样5次,测得峰面积的RSD为0.88%,结果表明,精密度良好。

  2.8  稳定性试验

  在室温条件下,取风湿定片(批号:050601)样品粉末约0.15 g,精密称定,按供试品溶液制备方法制得供试品溶液。精密吸取供试品溶液20 μL,按上述色谱条件,在0、2、4、8、12、24 h分别按上述色谱条件进样测定,测得峰面积的RSD为0.24% (n=6)。结果表明,供试品溶液在24 h内稳定。

  2.9  重复性试验

  取风湿定片(批号:050601)样品粉末约0.2 g,精密称定,共6份,按供试品溶液制备方法制得6份供试品溶液;按上述色谱条件测定,计算供试品中每粒含丹皮酚分别为0.61、0.60、0.59、0.60、0.58、0.60 mg(RSD为1.73%),表明本文方法重现性较好。

  2.10  回收率试验

  称取丹皮酚对照品约10 mg,精密称定,置100 mL容量瓶中,加甲醇定容,混合均匀,备用。取风湿定片(批号:050601)样品粉末约0.1 g,精密称定,共6份,置25 mL具塞锥形瓶中。依次分别精密加入上述丹皮酚对照品溶液适量,按上述方法测定,结果见表1。

  2.11  样品测定

  3批样品各取2份,按样品测定方法进行测定,记录峰面积,按外标法计算丹皮酚的含量,结果见表2。

  3  讨论

  3.1  波长的选择

  用紫外分光光度计对丹皮酚对照品溶液作220~320 nm波长扫描,其最大吸收波长为274 nm,选择此波长作为检测波长。表1  样品回收率测定结果表2  风湿定片中丹皮酚含量

  3.2  流动相的选择

  对HPLC分析时流动相的组成和配比,参考了药典等文献,比较了甲醇水(45∶55)[1]、甲醇水(50∶50)[2, 3]、甲醇水(55∶45)[4]、甲醇水(60∶40)[5]、甲醇水(70∶30)[6]、甲醇水(80∶20)[7]等不同流动相,并针对本制剂处方的特点进行了探索。结果以甲醇水(50∶50)比例最佳,峰形与柱形较好,分离效果较好,故选用甲醇水(50∶50)作为流动相。

  本文建立了风湿定片中丹皮酚含量测定的高效液相色谱法,该方法简便、灵敏、快速、准确,可以作为风湿定片质量控制标准。

  【参考文献】

  [1]中华人民共和国药典委员会编. 中华人民共和国药典[S]. 2005年版(一部). 北京: 化学工业出版社, 2005: 200201.

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  [4] 谢文健, 陈燕芬, 吴钉红. HPLC法测定调肠消炎片中丹皮酚的含量[J]. 中药材, 2007, 30(6): 740741.

  [5] 潘洪平, 陈 英, 符翠莉. 高效液相色谱法测定桂枝茯苓胶囊中丹皮酚含量[J]. 中国中药杂志, 2002, 27(8): 591593.

  [6] 陈英红, 姜瑞芝, 高 阳. HPLC法测定耳聋左慈丸中马钱苷和丹皮酚的含量[J]. 中国药事, 2007, 21(9): 733735.

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作者: 未知 2009-9-12
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