反相高效液相色谱法测定乌兰十三味滴丸中栀子苷的含量

　　【摘要】目的建立反相高效液相色谱法检测乌兰十三味滴丸中栀子苷含量的方法。方法采用Kromasil-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，甲醇-0.2%磷酸（68∶32）为流动相，检测波长238 nm，流速1.0 ml/min。结果栀子苷在13.26～79.56μg/ml范围内，浓度与峰面积呈线性关系，Y=32.348X+12.809，r=0.999 9。平均加样回收率为98.66%，RSD为0.503%。结论该方法简便，准确，可作为乌兰十三味滴丸中栀子苷的含量测定方法。

　　【关键词】  乌兰十三味滴丸 栀子苷 高效液相色谱法

　　蒙成药乌兰十三味滴丸由土木香、苦参、悬钩子木、山柰、诃子、川楝子、栀子、茜草、枇杷叶、紫草茸、橡子、紫草、金莲花组成。具有清血热之功效。用于血热上盛，头痛，目赤，高血压病症［1］。本实验建立反相高效液相色谱法测定乌兰十三味滴丸中栀子苷的含量。该方法简单、准确、快速、可靠，可作为乌兰十三味滴丸的质量控制标准。

　　1  仪器与试药

　　仪器：美国Agilent-1100高效液相色谱仪，MWD紫外检测器，二元高压梯度泵，HP-1100化学工作站；phenomenex生产kromasil- C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；Mettler Toledo(梅特勒-托利多)十万分之一电子天平；AS-3120超声仪。

　　试药：甲醇为Fisher色谱纯，栀子苷对照品由中国药品生物制品检定所提供。批号：749-200108（含测用），磷酸为分析纯，水为娃哈哈纯净水，样品乌兰十三味滴丸自制。流动相：甲醇-0.2%磷酸水（68∶32）。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱分析条件色谱柱：kromasil C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.2%磷酸（68∶32）；检测波长：238 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：室温；进样量：20 μl。

　　2.2  对照品溶液的配制精密称取栀子苷对照品6.63 mg，于50 ml量瓶内用甲醇-水（1∶1）溶解并稀释至刻度，制成0.132 6 mg/ml栀子苷的甲醇溶液。

　　2.3  供试品溶液的制备取本品适量，研细，精密称定0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇-水（1∶1）50 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇-水（1∶1）补足减失的重量，摇匀，取上清液，以0.45 μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

　　2.4  阴性对照液的制备按处方配比投入无栀子的其他药材和辅料, 制成阴性制剂, 按样品溶液制备方法制备。

　　2.5  色谱系统的适用性考察分别精取对照品溶液，供试品及阴性对照液，在本实验选定的色谱条件下，分别进样20μl，在对照品栀子苷的出峰位置，阴性对照液无干扰。见图1。

　　2.6  线性关系考察精密量取对照品液1，2，3，4，5，6 ml分别于10 ml量瓶中，用甲醇-水（1∶1）溶液稀释至刻度。质量浓度分别为13.26，26.52，39.78，53.04，66.30，79.56 μg/ml，上述色谱条件下，每个样测定1次，每次进样20μl，测定峰面积。以进样量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=32.348X+12.809，r=0.999 9。结果表明在13.26～79.56 μg/ml范围内，对照品量与峰面积呈良好的线性关系。见表1及图2。表1  栀子苷线性关系测定结果（略）

　　2.7  稳定性实验取供试品溶液，在相同条件下于不同时间内连续进样，每次20 μl，测定栀子苷的峰面积及含量，实验结果表明，栀子苷在4 h内测定含量基本不变，RSD为0.586%。见表2。表2  不同时间测定栀子苷含量（略）

　　2.8  精密度实验精密吸取对照品溶液20 μl，重复进样5次，测得栀子苷对照品峰面积值，RSD为0.384%。见表3。表3  精密度实验结果（略）

　　2.9  重复性实验取同一批号样品5份，分别按“含量测定”项下操作，测定各自含量，结果RSD为0.537%，重复性良好。见表4。表4  重复性实验结果（略）

　　2.10  加样回收实验精密称取5份已知含量的供试品0.25g，精密加入栀子苷对照品约1.15mg，作为加样供试品溶液,以下按“含量测定”项下的方法进行，结果平均回收率为98.66%，RSD为0.503%。见表5。

　　2.11  样品含量测定各取不同批号样品约0.5g，精密称定，按“2.3”项下的方法操作并测定。见表6。

　　3  讨论

　　3.1  提取条件的选择

　　本实验提取条件根据文献报道用纯甲醇、甲醇-水（1∶1）、甲醇-比（7.5∶2.5），分别用15，30，60 min超声提取，结果以甲醇-水（1∶1）超声提取30 min最好。表5  栀子苷加样回收实验结果（略）表6  样品中栀子苷的含量测定结果（略）

　　3.2  流动相的选择

　　实验中曾采用其它溶剂系统作流动相［2，3］，但分离效果不佳，杂质对栀子苷吸收峰有干扰，选用本流动相后，分离效果较好。

　　【参考文献】

　　［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册［S］.1998:73.

　　［2］国家药典编委会.中国药典，一部［S］.北京：化学工业出版社，2005：附录28.

　　［3］王巍杰, 贾晓冬, 肖 引, 等.HPLC测定清开灵滴丸中栀子苷的含量［J］.中国中药杂志，2005，30（13）:1034.