高效液相色谱法测定森登四味胶囊中槲皮素的含量

　　【摘要】  目的建立高效液相色谱（HPLC）法检测森登四味胶囊中槲皮素含量的方法。方法采用Kromasil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)，甲醇-0.2%磷酸（56∶44）为流动相，检测波长360 nm，流速1.0 ml/min，柱温25℃。结果槲皮素在1.08～6.48 μg/ml范围内，浓度与峰面积呈线性关系，Y=35.561X+0.847 2(r=0.999 9)。平均加样回收率为99.62%，RSD为0.687%。结论该方法简单、准确、快速、可靠，可作为森登四味胶囊的质量控制标准。

　　【关键词】  森登四味胶囊 槲皮素 高效液相色谱法

　　蒙成药森登四味胶囊由文冠木、诃子、川楝子、栀子组成。具有清热解毒，消肿之功效，用于痛风痹病，关节黄水病，水肿等症［1］。本文建立反相高效液相色谱法测定森登四味胶囊中槲皮素的含量。该方法简单、准确、快速、可靠，可作为森登四味胶囊的质量控制标准。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器美国Agilent-1100高效液相色谱仪，MWD紫外检测器，二元高压梯度泵，HP-1100化学工作站；phenomenex生产kromasil- C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；Mettler Toledo(梅特勒-托利多)十万分之一电子天平；KQ-50B超声仪。

　　1.2   试药甲醇为Fisher色谱纯，槲皮素对照品由中国药品生物制品检定所提供。批号：081-9003（含测用），磷酸为分析纯，水为双蒸水，样品森登四味胶囊自制。流动相：甲醇-0.2%磷酸水（56∶44）。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱分析条件色谱柱：kromasil C18 (250 mm × 4.6 mm，5μm)；流动相：甲醇-0.2%磷酸（56∶44）；检测波长：360 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：25℃；进样量：20 μl。

　　2.2  对照品溶液的配制精密称取槲皮素对照品1.08 mg，于100 ml量瓶内用甲醇溶解并稀释至刻度，制成0.010 8 mg/ml槲皮素的甲醇溶液。

　　2.3  供试品溶液的制备取本品1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇100 ml，密塞，称定重量，超声处理60 min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，以0.45 μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

　　2.4  色谱系统的适用性考察分别精取对照品溶液，供试品及阴性对照液，在本实验选定的色谱条件下，分别进样20 μl，在槲皮素对照品出峰位置，阴性对照液无干扰。见图1。

　　2.5  线性关系考察精密称取对照品液1，2，3，4，5，6 ml分别于10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度。质量浓度分别为1.08，2.16，3.24，4.32，5.4，6.48 μg/ml上述色谱条件下，每个样测定两次，每次进样20μl，测定峰面积并取平均值。以进样量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=35.561X+0.847 2，r=0.999 9。结果表明在1.08～6.48 μg/ml范围内，对照品量与峰面积呈良好的线性关系。见表1～2。

　　2.6  稳定性实验取供试品溶液，在相同条件下于不同时间内连续进样，每次20μl,测定槲皮素的峰面积及含量，实验结果表明，槲皮素在4 h内测定含量基本不变，RSD为0.309%。见表2。表1  槲皮素线性关系测定结果 表2  不同时间测定槲皮素含量

　　2.7  精密度实验精密吸取对照品溶液20μl，重复进样5次，测得槲皮素对照品峰面积值，RSD为1.535%。见表3。表3  精密度实验结果

　　2.8  重复性实验取同一批号样品5份，分别按“含量测定”［2］项下操作，测定各自含量，结果RSD为0.200%，重现性良好。结果见表4。表4  重复性实验结果

　　2.9  加样回收实验精密称取5份已知含量的供试品0.5 g，精密加入槲皮素对照品约0.23 mg，作为加样供试品溶液,以下按“含量测定”项下的方法进行，结果平均回收率为99.62%，RSD为0.687%。结果见表5。表5  槲皮素加样回收实验结果

　　2.10  样品含量测定各取不同批号样品约1 g，精密称定，按质量标准【含量测定】［2］项下的方法操作并测定。见表6。表6  样品中槲皮素的含量测定结果

　　3  讨论

　　本实验提取条件根据文献报道用①100%甲醇、②50%甲醇比50%水、③50%甲醇比50%（5%盐酸水），分别用30，60，90 min超声提取，结果以100%甲醇超声提取60 min最好。

　　根据槲皮素的紫外吸收图谱，槲皮素有3个吸收峰，分别为210，255，370 nm(文献报道多数在360nm检测槲皮素)［2，3］。实验对以上4个波长进行了考察，360nm检测槲皮素，阴性对照在此波长处没有吸收峰，说明其它成分无干扰，故槲皮素测定波长为360nm。

　　【参考文献】

　　［1］ 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册［S］.1998:185.

　　［2］ 中华人民共和国卫生部药典编委会.中国药典［S］.2000:附录VID.

　　［3］ 许 良，谭晓杰，李 清，等.RP-HPLC法测定蒙药森登-4汤中栀子苷、槲皮素和没食子酸的含量［J］.沈阳药科大学学报,2007,24(3):151.