高效液相色谱测定丹参滴注液中丹酚酸B含量

　　【摘要】  目的建立一种用高效液相色谱（HPLC）法测定丹参滴注液中丹酚酸B的含量的方法。方法色谱柱Dikma Kromasil C18 (5 μm, 100A 250 mm×4.6 mm)；流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；流量为0.8 ml·min-1；检测波长286 nm；柱温30℃；进样量20 μl。结果丹酚酸B的加样提取平均回收率为99.03％，RSD为1.02％，重复性实验的RSD为1.8l％。结论该方法简便可靠，结果稳定，重复性好，该方法可用于测定丹参滴注液中丹酚酸B的含量。

　　【关键词】  丹酚酸B 含量测定 高效液相色谱法 丹参滴注液

　　丹参滴注液收载于国家中成药标准汇编内科心系分册，由丹参中提取的水溶性化合物总丹酚酸制得。总丹酚酸具有抗肝纤维化、抗动脉粥样硬化和改善记忆功能障碍等作用［1］，由丹参素、丹酚酸A、B、E，原儿茶醛等各种芳香酚酸类化合物组成。丹参滴注液标准中对丹参素钠、原儿茶醛进行了高效液相色谱含量测定，对其中含量高、活性强的丹酚酸B未进行含量测定。我们参照有关文献［2，3］，用高效液相色谱柱测定丹参滴注液中丹酚酸B的含量，取得满意效果。

　　1    器材

　　1.1   仪器与试药  戴安高效液相色谱仪（P680A四元泵，PDA-100二极管阵列检测器，TCC-100柱温箱，Chromeleon色谱工作站）。丹酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所提供。批号：111562-200302)，丹参滴注液（安徽华源生物药业有限公司生产。规格：250 ml，16 g。批号：061112，061115，061118，061120，061201)。甲醇、乙腈为色谱纯(天津四友公司)，水为重蒸馏水，甲酸为分析纯。

　　1.2    色谱条件Dikma Kromasil C18 (5 μm, 100A 250 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；流量：0.8 ml·min-1；检测波长286 nm；进样量20 μl。

　　2    方法与结果

　　2.1   溶液的配制

　　2.1.1   对照品溶液的配制  取丹酚酸B对照品约5 mg，精密称定，置50 ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，得10 mg·L-1 的对照品溶液。

　　2.1.2    供试品溶液的配制  精密量取丹参滴注液(批号061112)10 ml，置50 ml量瓶中， 加水至刻度，摇匀，即得。

　　2.1.3    阴性样品溶液的制备按丹参滴注液制备方法和“2.1.2”项制得不含丹参的阴性对照品溶液，备用。

　　2.2    测定方法  精密吸取上述供试品溶液与对照品溶液各20 μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算样品的含量。

　　2.3    方法学验证

　　2.3.1   标准曲线的制备  精密称取丹酚酸B对照品适量，配成1 g·L-1的标准储备液；分别吸取10，20，40，80，100 μl分别置于5个1 ml量瓶中，以水稀释至刻度，混匀后分别进样20 μl，记录色谱图见图1。以色谱峰面积(A)对成分浓度(C)作回归统计，回归方程为：A=-9 863.5+13 282.6C，r=0.989 6，线性范围12.56～142.40 mg·L-1。

　　2.3.2   稳定性考察与精密度实验 取浓度为812.64 mg·L-1的供试品溶液分别在0，2，4，6，8 h进样，测得丹酚酸B供试品的峰面积RSD为1.06％，表明供试品溶液在8 h内稳定。取某一浓度(812.64 mg·L-1)供试品溶液，连续进样5次，测得进样精密度RSD为0.97％。

　　2.3.3    重复性实验取同一批号的丹参滴注液6份，按上述方法操作，测定丹参滴注液中丹酚酸B的含量，RSD为1.81％。结果表明重复性良好。

　　a2对照品  b2空白  c2丹参滴注液  1.丹酚酸B

　　图1  HPLC图（略）

　　2.3.4    加样回收率实验 取同一批号丹参滴注液(含量为812.6 mg·L-1)6份，每份约10 ml，精密量取，分别加入丹酚酸B对照品适量，精密称定，按含量测定方法测定，计算回收率(见表1)。可见，丹酚酸B的平均回收率为99.03％(RSD=1.02％)，符合分析方法的要求。

　　表1  加样回收率实验结果（略）

　　2.4    样品含量测定  取批号分别为061112，061115，061118，061120，061201的丹参滴注液适量，按“2. 2”项下操作，测得丹酚酸B的含量见表2。

　　表2  样品含量测定（略）

　　3    讨论

　　3.1  溶剂的选择本实验比较了丹酚酸B在50％甲醇与水中的稳定性，结果均在8 h内稳定，而因水价廉易得，故选用水为溶剂。

　　3.2  色谱条件的选择《中国药典》2005版，丹参片质量标准提供的色谱条件中，色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。根据单位实际情况，采用不同比例的甲醇-水、甲醇-水-甲酸、乙腈-水-甲酸为流动相进行测试，发现乙腈的洗脱效果优于甲醇，流动相中存有甲酸时的柱峰形明显优于流动相中存有乙酸时的峰形，故选择甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)为流动相。

　　【参考文献】

　　［1］ 戈升荣,俞一心, 谢更新.丹酚酸的药理作用研究进展［J］.中药材,2002,25 (9)：683．

　　［2］ 曹 枫,马长华,乔延江.HPLC法测定丹参三七配伍水煎液中丹酚酸B的含量［J］.北京中医药大学学报，2003，26(6)：45.

　　［3］ 李红磊,张忠义,胡玉佳,等.香丹注射液中丹酚酸B的HPLC法测定［J］.分析测试学报,2005,24(11):128