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【摘要】目的建立安心口服液的质量标准。方法采用高效液相色谱（HPLC）测定制剂中主要活性成分芍药苷的含量。结果芍药苷的测定色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（250 mm×4.6 mm，5 μm）；甲醇-水（25∶75）为流动相；柱温：30.0℃；流速1.0 ml/min；检测波长为230 nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于2 000。结论芍药苷的含量测定方法学研究结果均符合相关技术要求。
【关键词】 安心口服液； 芍药苷； 高效液相色谱
Abstract：Objective To optimize the preparation process of Anxin Oral Liquid.MethodsThe content of paeoniflorin was determined by HPLC.ResultsThe HPLC conditions of paeoniflorin were as follows: C18 chromatographic column(250 mm×4.6mm,5 μm), MeOH∶H2O(25∶75), column temperature:30℃, flow rate:1.0 ml/min, detection wavelength 230 nm, and theory plates(according to Paeoniflorin) was be not less than 2 000.ConclusionThe consequences correspond with the relevant criterion.
Key words：Anxin Oral Liquid; Paeoniflorin; HPLC
安心口服液系由生地、白芍、天麻等组成的临床治疗小儿多发性抽动症有效经验方，原为合剂，改为口服液，本方研究的目的是研制和开发治疗小儿多发性抽动症（TS）有效的中成药新制剂［1］。方中白芍为君，入肝经可敛肝阴，现代药理研究表明白芍含有芍药苷。为了建立本产品的质量标准，根据本品处方药物组成，结合所含药物成分的特性，采用高效液相色谱（HPLC）法测定制剂中主要活性成分芍药苷的含量，芍药苷的含量测定方法学研究主要包括系统适用性实验、线性关系的考察、稳定性实验、精密度实验、重复性实验以及加样回收率实验，研究结果均符合相关技术要求。
1 仪器与材料
Agilent1100高效液相色谱仪；色谱柱：Lichrospher C18柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）（淮阴汉邦科技有限公司）。
芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110736-200423）。甲醇为色谱纯，其余所用试剂均为分析纯。
安心口服液：自制，批号分别为 061122，061124，061126。
2 方法与结果
2.1 色谱条件经比较色谱峰分离情况以及分离度，确定的色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（250 mm×4.6 mm ， 5μm）；甲醇-水（25∶75）为流动相进行洗脱，柱温：30.0℃；流速1.0 ml/min；检测波长为230 nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于2 000［2］。
空白实验：取本品中缺白芍的阴性制剂，按供试品溶液制备方法制备，测定，结果表明，在芍药苷色谱峰处无干扰（见图1）。
2.2 供试品溶液的制备根据实验最终确定本品供试品溶液的制备方法为：精密吸取本品1.5 ml，置离心管中，加甲醇7 ml，超声20 min(频率：40 kHz，功率：500 W)，离心(4 800 r/min，15 min)，上清液置于10 ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得。
2.3 标准曲线及线性范围精密称取在干燥器中用五氧化二磷减压干燥36 h的芍药苷对照品适量，置于量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，使其浓度为0.384 mg/ml，摇匀，作为芍药苷对照品的储备液。精密吸取上述对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml，置于1 ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，使其浓度分别为0.0768，0.153 6，0.230 4，0.307 2，0.384 mg/ml。各对照品液分别进样10 μl，重复两次，按上述色谱条件测定峰面积值，以峰面积平均值和对照品浓度进行回归处理。回归方程、相关系数以及线性范围分别为：Y=16 380.462 2X－27.269 5；相关系数r=0.999 7；芍药苷在0.768～3.84 μg范围线性关系良好。
图1 安心口服液HPLC检测图谱（略）
2.4 稳定性实验取供试品溶液，每隔1.0 h进样10 μl，测定芍药苷10 h内的保留时间及峰面积值，结果其RSD为2.39% 。
2.5 精密度实验取浓度为0.307 2 mg/ml的芍药苷对照品溶液,连续进样5次， 进样量10 μl，测定其峰面积值，结果其RSD为0.183 8% 。
2.6 重复性实验取本品，精密吸取1.5 ml置离心管中，按供试品溶液制备方法制备样品，平行实验5份，进样量10 μl，测定其芍药苷的含量，结果样品中芍药苷的平均含量为2．3450 mg/ml，RSD为1．84% 。
2.7 加样回收率实验精密吸取芍药苷含量为1.563 mg/ml的本品0.3 ml 6份，分别置于离心管中，再精密加入浓度为0.505 mg/ml芍药苷对照品溶液0.8，1.0，1.2 ml各两份，分别加甲醇3.5 ml超声20 min(频率：40 kHz，功率：500 W)，离心(4 800 r/min 15 min)，上清液置于5 ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，进样。色谱条件同前，进样10 μl，外标两点计算芍药苷含量。结果其平均回收率为100.78%，RSD为2.89% 。
2.8 样品的测定精密吸取3个批号的本品1.5 ml，分别按供试品溶液制备方法制备，得供试品溶液。并按上述含量测定方法分别测定其中芍药苷的含量，结果样品中芍药苷的平均含量分别为1.64 mg/ml（061122），1.78 mg/ml（061124），1.68 mg/ml（061126）。
3 讨论
3.1 流动相的选择选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱，分别采用不同体系和比例的流动相进行色谱分离：甲醇-水（30∶70）以及甲醇-水（25∶75），结果表明以甲醇-水（25∶75）为流动相分离效果最佳。
3.2 供试品溶液的制备条件的选择超声提取方法及次数考察样品中芍药苷含量直接超声平均值为2.325 mg，超声3次平均值为2.057 mg，经直观分析，结果表明直接超声的方法优于蒸干后超声3次的方法，从简便、节约、不影响提取效率的前提出发，确定提取方法为取本品直接超声的方法。
超声提取时间考察20，40，60 min取样样品中芍药苷的含量分别为2.357 4，2.358 6，2.338 1mg。上述结果经直观分析，表明超声时间对芍药苷的含量没有显著性影响，从省时、节约、不影响提取效率的前提出发，确定超声提取时间为20 min。
根据上述考察结果最终确定本品供试品溶液的制备方法。
【参考文献】
［1］ 张 骠.小儿多发性抽动症中医证治特点及其研究述略［J］.江苏中医药,2004,25（9）:1.
［2］ 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］. 北京:化学工业出版社,2005:44.