点击显示 收起
【摘要】 目的建立肠炎宁片的薄层色谱方法。方法采用不同方法及展开系统，以对照药材为对照，分别对地锦草、黄毛耳草、樟树根、香薷进行薄层色谱方法研究。结果地锦草以正己烷-醋酸乙酯（5∶1）、黄毛耳草以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸（5∶3∶1）、樟树根以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇（5∶3∶0.5）为展开剂，香薷采用聚酰胺薄膜以丙酮-36%醋酸（2∶1）展开剂，均获理想分离效果，且阴性无干扰。结论方法简便、快速、重复性好，可作为肠炎宁片的薄层鉴别方法。
【关键词】 肠炎宁片； 地锦草； 黄毛耳草； 香薷； 薄层色谱法
Abstract：ObjectiveTo establish methods for TLC identification of Changyanning Tablet. MethodsHerba euphorbiae humifusae, Hedyotis chrysoticha,Radix cinnamomi camphorae，Elsholtzia Ciliata Hyland，the 4 components of the Tablet，were identified by the method，after developed with suitable solvent.ResultsThe eluents for Herba euphorbiae humifusae,Hedyotis chrysoticha, Radix cinnamomi camphorae，Elsholtzia Ciliata Hyland were petroleum n-Hexane∶EtAe=5∶1，CHCl3∶EtAe：HCOOH=5∶3∶1，CHCl3∶EtAe∶MeOH=5∶3∶0.5，and Acetone：36%HAC=2∶1 by Polyamide Film Chromatography respectively.ConclusionThe method is simple，reliable，specific and can be used for quality control of Changyanning Tablet.
Key words：Changyanning Tablet; Herba euphorbiae humifusae; Hedyotis chrysoticha; Elsholtzia Ciliata Hyland; TLC
肠炎宁片为江西特色中药品种，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》第18册，由地锦草、黄毛耳草、樟树根、香薷、枫树叶组成，主要用于急、慢性胃肠炎、腹泻、细菌性痢疾、小儿消化不良的治疗。该品种方中多为江西地方中药材，有关方中各药材的化学成分及分析方法研究报道较少，原部颁标准中该品种的质量标准简单、落后，难以适应现代中药发展的需要。由于该品种临床疗效较好，近年市场销售成倍增长，为了适应现代中药的发展和提高产品质量的可控性，课题组对其进行了薄层色谱研究。
1 仪器与试药
939全自动薄层制板器（重庆市南岸贝尔德仪器技术厂）；BPQ-Ⅱ薄层喷雾气压泵（重庆市南岸贝尔德仪器技术厂）；CQ-250超声波清洗器（上海船舶电子设备研究所）；ZF-2型三用紫外仪（上海市安亭电子仪器厂）；定量毛细管（美国Drummond公司）。
地锦草对照药材（批号：1167-200001，中国药品生物制品检定所）；黄毛耳草对照药材（自制）；樟树根对照药材（自制）；香薷对照药材（批号121456-200401，中国药品生物制品检定所）；所用试剂均为分析纯。
肠炎宁片（批号20050402，20060312，20060530，20070137，20070209，20070303，20070518，江西天施康中药股份有限公司提供）。
2 方法与结果
2.1 地锦草TLC鉴别取不同批号肠炎宁片各5片，研细，加甲醇30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml溶解，用乙醚萃取两次，20 ml/次，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为各供试品溶液。另取地锦草对照药材1 g，加水煎煮1 h，滤过，滤液浓缩至约20 ml，加乙醚萃取两次，20 ml/次，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为对照品溶液。再按肠炎宁片制剂处方比例取除地锦草外的其他各药材，照本品制剂工艺及供试品溶液制备方法操作，制备地锦草阴性对照溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取上述溶液各5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯（5∶1）为展开剂，取出，晾干，喷以5%磷钼酸乙醇液，80℃烘至显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性制剂无干扰，见图1。
图1 地锦草TLC图（略）
2.2 黄毛耳草TLC鉴别 取本品3片，加甲醇40 ml超声处理30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇2～3 ml使溶解，加至氧化铝柱（中性氧化铝，100～200目，3 g，柱内径15 mm），以甲醇30 ml洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄毛耳草对照药材1 g，加水适量煎煮1.5 h，滤过，滤液蒸干，自“残渣加甲醇2～3 ml使溶解”起照供试品溶液制备方法，制备对照药材溶液。另同法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法［1］实验，分别吸取上述溶液各5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸（5∶3∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性制剂无干扰，见图2。
图2 黄毛耳草TLC图（略）
2.3 樟树根TLC鉴别 取本品10片，加甲醇40 ml超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 ml使溶解，用乙醚萃取3次，20 ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，转移至中性氧化铝柱（3 g，100～200目，柱内径15 mm），以20 ml甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取樟树根对照药材1 g，加水煎煮1 h，滤过，滤液浓缩约15 ml，自“用乙醚萃取3次”起同供试品制备方法操作，制备对照药材溶液。另同法制备阴性对照溶液。按照薄层色谱法［1］实验，分别吸取供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl，对照药材溶液5 ml，分别点于同一以硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇（5∶3∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，先后喷以2%三氯化铁乙醇溶液，铁氰化钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性制剂无干扰。见图3。
图3 樟树根TLC图（略）
2.4 香薷TLC鉴别 取本品4片，加甲醇40 ml超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，加至D101大孔吸附树脂柱上（柱高12 cm，柱内径15 mm），以水50 ml洗脱，弃去水液，再以50%乙醇60 ml洗脱，收集60%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加水20 ml溶解，加乙醚萃取3次，20 ml/次，合并乙醚液，挥干，残渣加甲1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取香薷对照药材1 g，加水适量煎煮30 min，滤过，滤液至约20 ml，自“加至D101大孔吸附树脂柱上”起照供试品溶液制备方法，制备对照药材溶液。另同法制备阴性对照溶液。按照薄层色谱法［1］实验，分别吸取上述溶液各2 μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以丙酮-36%醋酸（2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，先置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性制剂无干扰。见图4。
图4 地锦草TLC图（略）
3 讨论
地锦草为方中君药，主含黄酮、鞣质类等成分［2］，现有文献［1，3］中多以黄酮类成分为指标进行鉴别或测定。由于处方中的黄毛耳草［4］、香薷［5］均含有与地锦草中相同的黄酮类成分，采用黄酮类成分为指标进行地锦草鉴别时，阴性有干扰。经实验摸索，采用正文中的方法进行鉴别，阴性无干扰，且经不同时间生产的7批次产品检验，显示该方法的灵敏度高，方法稳定、重复性好，可以作为地锦草药材的特征性鉴别方法。
黄毛耳草系民间中草药，收载于江西省中药材标准（1996年版），主要用于治疗湿热黄疸、水肿、痢疾、腹泻等，现有文献资料中仅见其化学成分的研究报道和一篇槲皮素的含量测定报道，未见有关黄毛耳草的薄层鉴别研究。黄毛耳草主含黄酮类、环烯醚萜类及内酯类成分等［4］，由于黄酮类成分鉴别受制剂中其他药材干扰，实验中对其内酯类成分进行了研究，并经不同时间生产的7批次产品检查，表明该法稳定、重复性好，且灵敏度高，可为黄毛耳草药材及其制剂的鉴别提供借鉴。
香薷主要含挥发油、黄酮类成分，另含木脂素、萜类、脂肪酸等［5］，经查阅文献发现，有关香薷的检测［1，6，7］成分主要为挥发油，未见水溶性成分检测报道。由于本制剂中香薷采取了水煎煮工艺，因而制剂中很难检出挥发油成分；经对水溶性成分检测研究，以香薷标准药材进行对照，采用聚酰胺薄膜进行分离、检查有特征斑点，且该成分灵敏度较高，方法重复性好，可为香薷药材中水溶性成分检查提供参考。
【参考文献】
［1］ 国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］. 北京：化学工业出版社，2005:84，182，附录ⅥB.
［2］ 朱 英. 地锦草的研究进展［J］. 现代中药研究与实践,2003,17(5):62.
［3］ 雷 鹏,刘 韶,李新中,等. HPLC测定地锦草中槲皮素、山柰素的含量［J］.中药材, 2005,28(8):666.
［4］ 李 萍.高效液相色谱法测定黄毛耳草中槲皮素的含量［J］. 广东药学院学报,2006,22(1):57.
［5］ 丁晨旭,纪兰菊.香薷化学成分及药理作用研究进展［J］.上海中医药杂志,2005,39(5):63.
［6］ 吉 力,仝 燕,李先端,等.香薷止泻胶囊的质量标准研究［J］.中国实验方剂学杂志,2004,10(4):1.
［7］ 国家药典委员会.国家药品标准·新药转正标准，第41册［S］. 2004:36.