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【摘要】 目的建立川芎配方颗粒高效液相色谱（HPLC）指纹图谱。方法应用Kromasil KR-100-5 C18柱，0.5％磷酸水溶液和甲醇进行梯度洗脱，流速为1.0 ml/min，检测波长为240 nm，柱温为20℃。结果得到分离度、重复性均较好的川芎配方颗粒HPLC指纹图谱，标示了11个共有峰，对10批川芎配方颗粒HPLC指纹图谱进行相似度评价，并与川芎饮片HPLC指纹图谱进行比较研究。结论川芎配方颗粒HPLC指纹图谱的建立，为其质量控制提供了依据。
【关键词】 川芎配方颗粒； 高效液相色谱； 指纹图谱
Abstract：ObjectiveTo establish the analytical method for the fingerprint of Chuanxiong Dispensing Granules by HPLC. MethodsSeparation was performed on a Kromasil KR-100-5 C18 column, with mobile phase consisting of 0.5% phosphoric acid-water and methanol and with gradient elution at the flow rate of 1.0 ml/min. The UV detection wavelength was 240 nm, column temperature was 20℃. ResultsAn HPLC fingerprint for Chuanxiong Dispensing Granules was established Both fidelity and reparability were good. It had 11 common peaks. ConclusionAccording to the foundation of HPLC fingerprint, we can control the quality of Chuanxiong Dispensing Granules.
Key words：Chuanxiong Dispensing Granules； HPLC； Fingerprint
川芎配方颗粒为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎经加工制成的配方颗粒，主要含生物碱类、有机酸类和挥发油类成分。功能活血行气、祛风止痛，用于治疗月经不调、经闭痛经、癥瘕腹痛、胸胁刺痛、跌扑肿痛、头痛、风湿痹痛［1］。目前，对川芎药材的指纹图谱多有报道［2～5］，但对其配方颗粒指纹图谱以及与饮片指纹图谱的比较研究尚未见报道。本文采用高效液相色谱法对川芎配方颗粒进行了研究，得到分离度、重复性均较好的指纹图谱，利用高效液相色谱技术对其主要色谱峰进行了初步归属，同时对10批川芎配方颗粒指纹图谱进行了相似度评价，并与川芎饮片指纹图谱进行比较研究，为川芎配方颗粒全面质量控制提供依据。
1 仪器与试药
Waters2695_2996高效液相色谱仪；Empower色谱工作站；甲醇（色谱纯，Fisher）；磷酸（分析纯）；水（Milli－Q级）；川芎配方颗粒10批（为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎经加工制成的配方颗粒，四川绿色药业科技发展股份有限公司提供）；川芎饮片3批（上述10批川芎配方颗粒的投料饮片，四川绿色药业科技发展股份有限公司提供）；阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所提供）。
2 方法
2.1 供试品溶液的制备取本品粉末0.5 g，加甲醇20 ml，水浴回流提取1 h，滤过，挥去部分溶剂，转移至10 ml容量瓶中，甲醇定容，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
2.2 参照物溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，即得。
2.3 色谱条件及测定方法色谱柱为Kromasil KR-100-5 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为0.5％磷酸水溶液（A）和甲醇（B），梯度洗脱为0～3min（85%A），3～55min（85%A～10%A），55～60 min（10%A）；流速1.0 ml/min；检测波长240 nm；柱温20℃；记录时间为60 min；采样频率为每秒采一个数据点；泵模式5 ml/min；进样量10 μl。
2.4 方法学考察
2.4.1 空白实验吸取甲醇10 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果表明空白溶剂无干扰。
2.4.2 参照物实验吸取阿魏酸参照物溶液10 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，其主峰的保留时间用于确定川芎配方颗粒中阿魏酸的峰位。
2.4.3 仪器精密度实验取同一供试品溶液，连续进样6次。同时取峰面积大于总峰面积的3.0%的色谱峰保留时间峰面积进行统计，其保留时间的相对标准偏差RSD均低于1%，仪器精密度良好。
2.4.4 稳定性实验取同一供试品溶液，分别在0，1，2，4，8，12，24，48 h进行检测。同时取峰面积大于总峰面积的3.0%的色谱峰保留时间峰面积进行统计，其保留时间的相对标准偏差RSD均低于1%，表明样品48 h内稳定性良好。
2.4.5 重复性实验取同一批号供试品，按“2.1”项下方法分别制备供试品溶液6份，进样检测。同时取峰面积大于总峰面积的3.0%的色谱峰保留时间峰面积进行统计，其保留时间的相对标准偏差RSD均低于1%，重复性良好。
3 结果
3.1 峰的辨认和分区指纹图谱建立的原则应从色谱峰的整体性出发，找出能构成指纹特征的色谱峰的峰号、峰位、峰数。经比较所有测定和记录的色谱图，在观察众多供试品色谱图后，确定川芎配方颗粒的11个峰作为特征组成其指纹图谱，见图1。
为了便于辨认和分析比较，将整个色谱图分成A，B，C，D 4个区。A区包括1～7号峰（保留时间范围0～20 min），为极性较大的水溶性成分；B区包括8～11号峰（保留时间范围20～40 min），为生物碱和有机酸等中等极性的成分；C区（保留时间范围40～50 min）是川芎挥发油特征区；D区（保留时间范围50～60 min）为极性较小的成分。实际上1～4号峰不是绝对意义上的4个峰，而是一组分离不完全的峰，这一组峰在每一个供试品色谱图中都出现，但分离欠佳，故可将其作为一个整体进行辨认。
图1 川芎配方颗粒指纹图谱特征峰（略）
3.2 川芎配方颗粒指纹图谱的建立取川芎配方颗粒10批样品，按照供试品溶液的制备和检测方法进行检测，色谱图见图2。
图2 10批川芎配方颗粒指纹图谱（略）
以样品1为参照图谱，其全谱的相似度（相关系数法）分别为1.000，0.996，0.996，0.994，0.996，0.995，0.987，0.991，0.983，0.983，同时取峰面积大于总峰面积的3.0％的色谱峰保留时间峰面积进行统计，其保留时间的相对标准偏差RSD均低于1％。
3.3 川芎配方颗粒与川芎饮片指纹图谱的比较取10批川芎配方颗粒的投料饮片，照川芎配方颗粒指纹图谱供试品的处理方法及分析条件对川芎饮片进行指纹图谱分析。将川芎配方颗粒与川芎饮片指纹图谱进行比较，见图3。
从图3总体上看，配方颗粒与饮片之间存在一定的差异，主要表现在3个方面：①指纹图谱A区色谱峰在配方颗粒中更加明显；②C区色谱峰减弱；③D区色谱峰消失。可能的原因是，饮片经提取、成型等工艺后，有效成分总体减少，但不同的成分减少的程度不一致，因此部分成分的相对信号增强，部分成分的信号相对减弱。
配方颗粒以水为溶媒提取，故在以极性较大的水溶性成分为主的A区，色谱峰更为明显。C区为挥发油特征区，配方颗粒挥发油以水蒸气蒸馏法提取，经β－环糊精包合后加入浸膏粉中，大生产挥发油提取率较低，再经包合后，配方颗粒中挥发油含量极低，故C区色谱峰减弱，不计入配方颗粒特征色谱峰。D区的色谱峰消失，则由于配方颗粒以极性大的水为溶媒提取，该区的色谱峰所代表的成分极性较小且不具挥发性，故在指纹图谱中体现不出。
4 讨论
中药配方颗粒是以单味中药饮片为原料，经提取、浓缩、干燥、制粒等工序制成的粉末状或颗粒状制剂。中药配方颗粒指纹图谱的研究，皆在考察配方颗粒与饮片物质组成的异同，为配方颗粒制备工艺的合理性提供依据。
图3 川芎配方颗粒与川芎饮片指纹图谱的比较（略）
本文所采用的指纹图谱研究方法为高效液相色谱法，并采用紫外二极管阵列检测器。由于方法和仪器的限制，指纹图谱重点关注的是有紫外吸收的成分，该部分成分占不到配方颗粒总重的5％，还有很多无紫外吸收的成分，特别是多糖类成分不能在指纹图谱中反应出来，而该部分成分能否完全代表川芎的药理作用还有待确证。
另外，10批川芎配方颗粒所用3批投料饮片均为同年采收的药材经炮制加工所得，因此10批供试品的指纹图谱是否能完全反映川芎配方颗粒的特征还有待确证。
【参考文献】
［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：28.
［2］ 杨光明，蔡宝昌，王天山，等.川芎化学成分的气相-质谱与指纹图谱研究（Ⅰ）［J］.西北药学杂志，2002，17（4）：147.
［3］ 孙 沂，郭 涛，隋 因，等.川芎HPLC-FP方法学研究［J］.中国中药杂志，2003，28（2）：167.
［4］ 王嗣岑，朱丽华，贺浪冲.川芎药材活性部位的高效液相色谱指纹图谱定性分析方法［J］.西安交通大学学报（医学版），2003，24（3）：221.
［5］ 杨光明，蔡宝昌，潘 扬，等.川芎药材指纹图谱研究与产地比较（Ⅰ）［J］.南京中医药大学学报（自然科学版），2002，18（3）：172.