高效液相色谱法同时测定珍菊降压滴丸中氢氯噻嗪和芦丁的含量

　　【摘要】  目的建立高效液相色谱法同时测定珍菊降压滴丸中氢氯噻嗪和芦丁的定量测定方法。方法以Inertsil ODS-3（4.6 mm×250 mm，5 μm）为固定相，以0.1% 冰醋酸（用三乙胺调pH至4.0）－乙腈（80∶20）为流动相，流速为1.0 ml·min-1，检测波长为270 nm。结果氢氯噻嗪和芦丁的线性范围分别为6.25～100.08 μg·ml-1（r= 0.999 9）和25.97～399.60 μg·ml-1（r = 0.999 9），平均回收率分别为99.08%，97.25%。结论该法快速、准确，可同时测定珍菊降压滴丸中氢氯噻嗪和芦丁的含量。

　　【关键词】  珍菊降压滴丸 氢氯噻嗪 芦丁 高效液相色谱法

　　珍菊降压滴丸是新研制的新药，该药是珍菊降压处方中野菊花、珍珠层粉及芦丁3味中药(或提取物)和氢氯噻嗪与盐酸可乐定两味西药与辅料聚乙二醇经融化滴制而成的滴丸剂。本品为棕褐色或黑褐色滴丸，气微香，味苦［1］。本文参照文献［2～3］方法，建立HPLC方法同时测定珍菊降压滴丸中氢氯噻嗪和芦丁的含量，为该制剂的质量控制提供参考。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器  岛津LC-20AT高效液相色谱仪（在线脱气机、二元泵、自动进样器、DAD检测器，岛津公司）；LC-solution 色谱工作站； CP124S电子分析天平（SARTORIUS，德国）；KQ-250DB数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

　　1.2   试药  珍菊降压滴丸及阴性对照样品自制；芦丁对照品（批号100080-200306，供含量测定用），氢氯噻嗪对照品（批号10309-0001，供含量测定用），购自中国药品生物制品检定所；乙腈（色谱纯，Fisher 试剂公司，批号052064）；其他试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件的选择  色谱柱为Inertsil ODS-3（4.6 mm×250 mm,5 μm），流动相：0.1%冰醋酸（用三乙胺调pH至4.0）－乙腈（80∶20），检测波长270 nm，流速1.0 ml/min，柱温为室温，进样量20μl。

　　2.2  对照品溶液的配制精密称取氢氯噻嗪和芦丁对照品适量，分别加流动相制成每毫升含氢氯噻嗪25 μg和每毫升含芦丁100 μg的对照品溶液。

　　2.3  供试品溶液的制备取本品5丸，精密称定，置500 ml量瓶中，加流动相至约100 ml，超声处理10 min使溶解，放冷，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

　　2.4  阴性对照实验  分别精密吸取两种对照品溶液20 μl，注入液相色谱仪。氢氯噻嗪的保留时间Rt=9.334 min，芦丁的保留时间Rt＝11.446 min。取供试品溶液，吸取20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。氢氯噻嗪的保留时间Rt=9.387 min，芦丁的保留时间Rt=11.631 min。

　　取不含氢氯噻嗪和芦丁的阴性滴丸5丸，按“2.3”项下的供试品制备方法处理得缺氢氯噻嗪和芦丁的阴性对照品溶液，吸取20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。阴性样品在与对照品和供试品相对应的位置上无吸收峰。结果见图1。

　　a-氢氯噻嗪对照品色谱图   b-芦丁对照品色谱图

　　c-样品色谱图  d-阴性对照色谱图

　　图1  珍菊降压滴丸HPLC图谱

　　2.5  线性关系考察  精密量取氢氯噻嗪对照品溶液（1.001 mg/ml）和芦丁对照品溶液（1.001 mg/ml），制备成浓度分别为氢氯噻嗪6.25，12.51，25.02，50.04，100.08 μg/ml和芦丁25.97，49.95，99.90，199.80，399.60 的对照品溶液。各精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积。以峰面积值（A）对浓度（C）进行线性回归，得回归方程分别为氢氯噻嗪：A=74 239C +263，r=0.999 9；芦丁：A=24031C－714，r=0.999 9。结果表明，氢氯噻嗪和芦丁的线性范围分别为6.25～100.08 μg/ml和25.97～399.60 μg/ml。

　　2.6  精密度实验精密吸取氢氯噻嗪和芦丁对照品混合溶液和供试样品溶液各20 μl，按正文含量测定项下的方法进行测定，重复进样6次。对照品混合溶液氢氯噻嗪平均峰面积1 864 364，RSD为0.06%；芦丁平均峰面积2 447 959，RSD 为 1.28%。供试样品溶液氢氯噻嗪平均峰面积1 537 421，RSD为0.08%；芦丁平均峰面积2 363 438，RSD为0.69%。

　　2.7  稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液20 μl，于0，2，4，6，8，12 h进行测定。测定结果氢氯噻嗪平均峰面积为173 971 5 ，RSD为0.14%；芦丁平均峰面积2 281 859，RSD为0.20%。试验结果表明，RSD＜2%，说明氢氯噻嗪和芦丁12 h内基本稳定。

　　2.8  重复性实验  取同一批样品（批号050513）6份，按拟定的含量测定方法，平行制备供试品溶液，测得峰面积并计算含量，氢氯噻嗪含量2.46 mg/丸，RSD为0.87%；芦丁含量9.71 mg/丸，RSD为1.15 %。

　　2.9  回收率实验  取样品（批号050513）约0.45 g，精密称定，平行称取6份，分别加入适量的氢氯噻嗪和芦丁对照品，按照供试品溶液制备与测定，以外标法计算氢氯噻嗪和芦丁的总量，计算回收率。结果见表1～2。 表1  氢氯噻嗪回收率测定结果表2  芦丁回收率测定结果

　　2.10   样品测定取本品5丸，精密称定，按“2.3”项下的供试品制备方法操作，制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液20μl ，按上述色谱条件测定。结果见表3。表3  样品含量测定结果 表中数据为标示量百分比；n=3

　　3  讨论

　　含量测定是评价药品质量的主要指标之一，要求采用的方法应具有专属性与准确性。珍菊降压滴丸由野菊花、珍珠层粉及芦丁3味中药(或提取物)和氢氯噻嗪与盐酸可乐定两味西药组成。处方中野菊花清热降火，清利头目，平肝降压；珍珠层粉平肝潜阳，安神定惊，清热明目，共为主药；盐酸可乐定具有中枢降压作用，氢氯噻嗪为利尿降压药，共为辅药；芦丁降低毛细血管通透性，增加其张力为佐使药。诸药合用共奏平肝、潜阳、清热、降压之功效。珍菊降压滴丸为珍菊降压片剂改型而成，为了控制本品质量，本文借鉴有关文献报道建立了珍菊降压滴丸中氢氯噻嗪和芦丁的含量测定方法。本方法简便可靠、精密度高、分离度好，可用于珍菊降压滴丸的质量控制。

　　【参考文献】

　　［1］ 宋民宪, 郭维加. 新编国家中成药［M］.北京：人民卫生出版社,2002：1075.

　　［2］ 靳宝峰, 温丽萍, 刘 伟, 等. HPLC法测定复方降压片的研究［J］.药物分析杂志, 1994, 14(5)：46.

　　［3］ 闫花丽, 吉曙光, 黄安军, 等. HPLC测定珍菊降压片中氢氯噻嗪和芦丁的含量［J］.中成药, 2004, 26(7)：547.