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【摘要】目的建立小叶榕中牡荆素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为迪马TC- C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相为乙腈－1%醋酸（14∶86），流速1.0 ml/min，柱温为25℃，检测波长340 nm。结果牡荆素在0.082 4~0.82 4 μg范围内呈良好的线性关系，r=0.999 7；平均回收率为100.39%，RSD为2.20%。结论该方法简单、灵敏度高，可用于小叶榕中牡荆素的含量测定。
【关键词】 小叶榕 牡荆素 高效液相色谱
Abstract：Objective：To establish an HPLC method for the determination of Viterxin in Xiaoyerong. MethodsLUNA ODS C18 BDS （250 mm×4.6 mm，5 μm）was used with acetonitrile -1%Acetic Acid （14∶86）as mobile phase.The flow rate was 1.0 ml·min-1.The detection wavelength was 340 nm. ResultsThe linear range of Viterxin was 0.082 4~0.824 μg，r=0.999 7. The average recovery was 100.39%，RSD was 2.20%.ConclusionThe method is simple，rapid and accurate.
Key words：Xiaoyerong； Viterxin； HPLC
小叶榕Xiaoyerong为桑科植物榕树Ficus microcarpa L.f.的干燥叶，又名：细叶椿、细叶榕、垂叶榕，属桑科椿属常绿大乔木，高20~25 m，生气根［1~2］。全年可采收，斩取叶和幼枝，除去树枝，取净叶片，晒干。小叶榕多生长于村边或山林中，分布于我国的广西、广东、福建、台湾、浙江南部、云南、贵州等地，印度、缅甸、马来西亚等国也有分布。
小叶榕既可作风景树、行道树，又具有药用价值。其树皮纤维可制鱼网和人造棉，茎、皮、果、叶、胶汁等均可入药，具有祛风清热、活血解毒、散淤利湿等功效。民间多用于治疗关节风湿痛、跌打损伤、小便不通、风火牙痛、急性痢疾及肠炎、疥癣、痔疮等病症。其叶、皮、果等提取的浸膏是治疗止咳、感冒类中成药的主要原料。
小叶榕中的主要有效成分是黄酮类化合物，具有止咳祛痰、抗菌消炎的作用。小叶榕药用部位中黄酮类化合物的种类很多，其中以牡荆素的含量较高，并且生理活性较强，具有抗病毒、抗甲状腺肿和抑制肿瘤细胞生长等作用。因此以牡荆素作为测定指标，有利于评价小叶榕药用部位的质量。
采用高效液相色谱法测定小叶榕中牡荆素的研究尚未见报道。现报道如下。
1 器材
LC-2010AH型高效液相色谱仪(日本岛津)；HS10260D型超声波清洗器(f超声工作频率40 kHz、天津市恒奥科技发展有限公司)；AUW120D型电子天平(日本岛津)。 醋酸(AR)；乙腈(色谱纯)；娃哈哈纯净水；牡荆素(Viterxin)对照品（中国药品生物制品检定所，No.111687，供含量测定用）；新鲜小叶榕采自贵州省兴义市沧江乡。
2 方法与结果
2.1 含量测定方法
2.1.1 色谱条件 色谱柱为迪马TC- C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相为乙腈－1％醋酸（14∶86）；流速1 ml/min；柱温25℃；检测波长340 nm；进样量为20 μl；牡荆素对照品浓度为0.0824 mg/ml；在此条件下，色谱图如图1，牡荆素保留时间为30.417 min，理论板数31 141。
图1 牡荆素对照品色谱图（略）
2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取牡荆素对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.082 4 mg的溶液，即得。
2.1.3 供试品溶液的制备 取小叶榕药材粉末(过40目筛) 2.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加30％乙醇25 ml，密塞，称定重量，超声波振荡60 min，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.1.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定即得。小叶榕药材色谱图见图2。供试品中牡荆素保留时间为30.487 min， 理论塔板数36 241。
2.2 测定方法学研究
2.2.1 检测波长的确定 取对照品溶液测定其紫外光谱。牡荆素在340 nm处有最大吸收，所以检测波长选定为340 nm。
图2 小叶榕药材色谱图（略）
2.2.2 线性关系考察 精密吸取对照品溶液（0.082 4 mg/ml）1，2，4，6，8，10 μl，按上述色谱条件注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积(A)为纵坐标，以牡荆素进样质量（B）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程：A＝14.801+1 135.9B，r＝0.999 7。表明牡荆素在0.082 4～0. 824 μg范围内峰面积呈良好的线性关系。
2.2.3 精密度实验 精密吸取小叶榕药材供试品溶液20 μl，连续进样5次，测得峰面积平均值为388.101 2， RSD为1.42%，表明测定的精密度良好。
2.2.4 稳定性实验 取同一供试品溶液分别于1，2，4，8，12，24 h依法测定。结果见表1。峰面积平均值为382.954。RSD＝2.11％。表明供试品在8 h内稳定性良好。
表1 牡荆素含量测定稳定性实验结果（略）
2.2.5 重复性实验 精密称取同一小叶榕药材粉末5份，按照上述方法制备供试品溶液，测定并计算牡荆素含量（见表2）。药材中牡荆素含量测定的RSD为3.38％，说明本方法的重复性好。
2.2.6 回收率实验 采用加样法进行回收率实验。精密称取1.0 g 小叶榕药材粉末（含量0.021%）5份，分别精密加入牡荆素对照品储备液（0.082 4 mg/ml）2.5 ml，按照上述方法制备供试液并测定。依照以下公式计算回收率：回收率（%）＝（测得量－药材含量）/对照品加入量×100%。结果表明5个加入量的回收率都较高，平均达到100.39%，RSD为2.20%。结果见表3。
表2 牡荆素含量测定重复性实验结果（略）
表3 牡荆素含量测定回收率实验结果（略）
2.3 药材测定结果 按照上述方法测定10批小叶榕药材的牡荆素含量。结果见表4。
表4 小叶榕药材牡荆素含量测定结果（略）
从表4测定结果中可以看出，10批小叶榕药材样品中牡荆素含量最高为0.041%，最低为0.016%，小叶榕药材牡荆素的含量均在0.010％以上。据此研究结果制订小叶榕中牡荆素含量标准为：本品按干燥品计算牡荆素含量不得低于0.010％。
3 讨论
目前，对小叶榕化学成分的研究文献报道的很少。本实验研究从小叶榕中提取出牡荆素，通过实验表明牡荆素为小叶榕中可控成分之一，故将其作为药材中的指标性成分进行含量测定，可有效地控制小叶榕的质量。
【参考文献】
［1］ 张秀实，吴钲益，曹子余. 中国植物志［M］. 北京：科学出版社，1998：112.
［2］ 中国科学院昆明植物研究所.云南植物志［M］. 北京：科学出版社，1995：597.