高效液相色谱法测定二丁颗粒中总黄酮的含量

　　【摘要】 　　目的建立二丁颗粒中总黄酮的含量测定。方法色谱柱为Kromasil C18；以甲醇水醋酸（45∶53∶2）为流动相；检测波长359 nm；外标法定量。结果总黄酮在0.052 8～0.316 8 μg/μl范围内呈良好的线性关系，Y=16 714X-82.436,r=0.999 4，平均回收率为96.19%，RSD=1.2%，（n=6）。结论所用方法简便、灵敏、准确，可用于二丁颗粒的质量控制。

　　【关键词】  总黄酮；二丁颗粒；高效液相色谱法

　　Abstract:ObjectiveTo establish a method for determination of the total flavonoid in Erding Granules.MethodsA Kromasil C18 column was used with methanolwateracetic acid(45∶53∶2) as mobile phase.The content of ferulic acid was detected at a wavelength of 359 nm.ResultsThe linear range was 0.052 8 ～0.316 8 μg(r=0.999 4). The average recovery was 96.19% with RSD of 1.2% (n=6).ConclusionThe method is simple, sensitive and accurate. It can be used to control the quality of Erding Granules.

　　Key words:Total flavonoid;  Erding Granules;  HPLC

　　二丁颗粒是由紫花地丁、蒲公英、板蓝根、半边莲4味药材组成的中药复方制剂，具有清热解毒、利湿、退黄的功能。用于热疖痈毒、咽喉肿痛、风热火眼、湿热黄疸等的治疗。收载于《中国药典》2005年版Ⅰ部［1］。测定采用HPLC法，以芦丁为对照品，对二丁颗粒中蒲公英的总黄酮进行了含量测定。方法简便，重现性较好。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器

　　日本高效液相色谱系统（日本HITACHI系列）；UV757紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）;KQ-100A型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；XS205DU电子天平（梅特勒-托利多）。

　　1.2  试药

　　芦丁对照品（中国生物制品检定所）；二丁颗粒由修正药业集团股份有限公司提供，20 g/袋，（批号：051005,053006,054003）；空白对照药材购于东北大药房锦州分店；甲醇：一级色谱纯（天津市登峰化学试剂厂），水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件色谱柱为Kromasil C18（5 μm,4.6 mm×250 mm）；流动相为甲醇水醋酸（45∶53∶2）；流速：0.8 ml/min；检测波长359 nm；进样10 μl；柱温30℃；室温操作。精密称取芦丁对照品0.1 mg,用甲醇稀释，温热溶解，并用甲醇定容至50 ml容量瓶中，摇匀，使用UV757紫外分光光度计在200～500 nm范围内扫描，测得芦丁在254 nm,359 nm处有两个吸收峰，由于254 nm杂质峰较大，而359 nm则较小，且易分离，故选择检测波长为359 nm。

　　2.2  对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品13.2 mg，置25 ml容量瓶中，加甲醇温热溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。

　　2.3  供试品溶液的制备取二丁颗粒样品，研细，精密称定10.0 g，置100 ml具塞碘量瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min。放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液作为供试品溶液。取去蒲公英药材的二丁颗粒样品，同法制备空白对照液。取上述溶液5.0 ml置25 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。按上述色谱条件绘制三溶液的色谱图见图1～3。

　　2.4  线性关系考察精密量取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml，置10 ml容量瓶中加甲醇定容至刻度，摇匀，用液相色谱仪测定，进样10 μl，以进样量与峰面积计算得回归方程：Y=16 714X-82.436,r=0.999 4，表明总黄酮在0.052 8～0.316 8 μg范围内线性良好。

　　2.5  精密度考察精密量取芦丁对照品溶液（528 μg·ml-1）10 μl，重复进样5次，按上述色谱条件测定，各次峰面积积分值的RSD=0.85%。

　　2.6  重复性实验取同一批号样品（051005）5份，分别进行供试品溶液的制备，测定，同时取对照品溶液10 μl进样测定，按外标法计算含量，RSD=1.15%。

　　2.7  加样回收率实验取已知含量的样品（批号：051005）内容物10 g，精密称定，精密加入10 ml芦丁对照品溶液（0.528 mg·ml-1），按照供试品溶液制备项下的制备方法，依法测定，计算回收率。结果见表1。 表1  回收率测定结果（略）

　　2.8  样品的含量测定精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算，测定结果见表2［2］。 表2  样品含量测定结果（略）

　　3 讨论

　　芦丁的甲醇溶液经紫外分光光度计扫描，在254 nm，359 nm处有两个最大吸收峰，由于254 nm杂质峰较大，而359 nm处则较小，且易分离，故选359 nm作为检测波长。

　　色谱条件在流动相的选择过程中，选择甲醇与水适量比例，反复实验，使杂质峰与所测物质峰充分分离，加入适量酸，达到最佳分离效果，定量更准确。

　　【参考文献】

　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：293.

　　［2］何羽，薛朝金.HPLC测定绿梅止泻颗粒中芦丁的含量［J］.时珍国医国药，2006，17（7）：1184.