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【摘要】 目的建立复方三七缓释片中有效成分的高效液相测定方法。方法采用Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-0.05%磷酸水溶液（乙腈0～12 min：22%；12～60 min：22%～40%）为流动相梯度洗脱，流速为1 ml·min-1，检测波长为203 nm。结果三七皂苷R1和人参皂苷Rg1，Re，Rb1的线性范围分别为0.373～3.73 μg（r= 0.999 7），0.937～9.37 μg（r= 0.999 1），0.144～1.44 μg（r=0.999 1），0.893～8.93 μg（r=0.999 0）；平均加样回收率（n=6）分别为99.12%，98.86%，99.25%，98.63%，RSD分别为1.31%，1.57%，1.75%，1.68%。结论该测定方法简便可行、重复性好，可用于复方三七缓释片中有效成分的含量测定。
【关键词】 三七；人参皂苷Rg1；人参皂苷Re；人参皂苷Rb1；三七皂苷R1； 高效液相色谱法
Abstract：ObjectiveTo establish the method of determining effective components in Compound Sanqi Sustained-release Tablets by HPLC.MethodsThe contents of notoginsenoside R1, ginsenoside Rg1, ginsenoside Re and ginsenoside Rb1 were simultaneously determined by HPLC conditions as follows：the column was Agilent C18（250 mm×4.6 mm， 5μm）,the mobile phase was CH3CN-0.05%H3PO4（CH3CN 0～12 min：22%；12～60 min：22%～40%）, the flow rate was 1.0 ml·min-1, the detection wavelength was 203 nm.ResultsThe linear range of notoginsenoside R1, ginsenoside Rg1, ginsenoside Re and ginsenoside Rb1, respectively, were 0.373～3.73μg（r= 0.999 7）,0.937～9.37 μg（r= 0.999 1）, 0.144～1.44μg（r=0.999 1）,0.893～8.93 μg（r=0.999 0）；the average recoveries(n=4) were 99.12%，98.86%,99.25% and 98.63% respectively, and RSD were 1.31%，1.57%，1.75% and 1.68%. ConclusionThe results indicate that the HPLC method is simple, accurate, highly selective and reproducible, thus it can be used for quality control of Compound Sanqi Sustained-release Tablets.
Key words:Compound Sanqi Sustained-release Tablets； Notoginsenoside R1；Ginsenoside Rg1; Ginsenoside Re； Ginsenoside Rb1; HPLC
复方三七缓释片是由三七、冰片等药材和相关缓释辅料制成，具有活血化淤，理气止痛之功效，常用于冠心病、心绞痛的治疗［1］。三七中含量最高的两种皂苷是人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1，因此许多含三七的制剂质控指标多限于这两种成分，同时以三七皂苷R1和人参皂苷Rg1，Re，Rb1 4种有效成分作为制剂质控指标的较少。本制剂以上述4种有效成分作为生产的质控指标，采用高效液相色谱法同时测定复方三七缓释片中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1，Re，Rb1的含量，能更有效地控制复方三七缓释片的质量。
1 器材与样品
1.1 仪器
BS124S型电子分析天平（德国Sartorius），Agilent1100型高效液相色谱仪。
1.2 试剂乙腈（色谱用，Merck公司），超纯水，甲醇（分析纯）。
1.3 样品复方三七缓释片(广东药学院中药开发研究所研制)。
1.4 对照品三七R1（notoginsenoside R1，110745-200516），人参皂苷Rg1（ginsenoside Rg1，110703-200424），人参皂苷Re（ginsenoside Re，110754-200320），人参皂苷Rb1（ginsenoside Rb1，110704-200318），均供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件Agilent C18柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相：乙腈-0.05%磷酸水溶液梯度洗脱（0～12 min：乙腈浓度为22%；12～60 min：乙腈的浓度由22%递升至40%）；流速为1 ml·min-1，检测波长为203 nm；柱温17℃ ；进样量10 μl。在该色谱条件下，三七皂苷R1和人参皂苷Rg1，Re，Rb1能够达到基线分离，其他成分对测定无干扰。结果见图1～2。
2.2 样品的制备
2.2.1 供试品溶液的制备取10片复方三七缓释片，研碎，混匀，精密称取1 g，精密加入甲醇25 ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率5 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液2.0 ml滤液上D101（5 g，层析柱规格：1.5 cm×20 cm）大孔树脂柱，先用50 ml蒸馏水洗脱，弃掉；再用100 ml 70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解定容至10 ml，备用。
2.2.2 对照品溶液的制备分别精密称取对照品三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Re和人参皂苷Rb1适量,甲醇溶解定容,制成浓度均为1 mg·ml-1的混合对照品溶液，备用。
2.3 线性关系分别吸取对照品混合溶液1，2，5，8，10 μl，注入高效液相色谱仪，按色谱条件测定。以各对照品进样量（Y）对峰面积（X）进行线性回归处理。结果见表1。表1 线性关系实验结果（略）
2.4 精密度实验精密吸取供试品溶液10 μl，连续进样6 次，测定峰面积积分平均值三七皂苷R1为312.6，RSD为0.28%；人参皂苷Rg1平均峰面积为1847.5，RSD为0.65%；人参皂苷Re平均峰面积为224.6，RSD为0.46%；人参皂苷Rb1平均峰面积为1113.5，RSD为0.35%。表明分析方法精密度良好。
2.5 稳定性实验取同一供试品溶液10 μl分别在0，1，2，4，5，8 h按上述色谱条件测定6次，结果三七皂苷R1的平均峰面积为312.6,RSD为0.80%；人参皂苷Rg1的平均峰面积为1 847.5，RSD为0.62%；人参皂苷Re的平均峰面积为224.6，RSD为0.42%；人参皂苷Rb1的平均峰面积为1 113.5，RSD为0.54%。表明4种成分在8 h内稳定性良好。
2.6 重复性实验取同一批号的供试品，按供试品溶液制备项下操作，平行制备6份，按色谱条件测定百分含量，三七皂苷R1的平均含量为6.45 mg·g-1，RSD为0.48%；人参皂苷Rg1的平均含量为26.61 mg·g-1，RSD为0.39%；人参皂苷Re的平均含量为3.55 mg·g-1，RSD为0.51%；人参皂苷Rb1的平均含量为31.98 mg·g-1，RSD为0.43%。表明4种成分的重复性良好。
2.7 加样回收率实验精密称取已知含量的供试品，分别精密加入一定量的三七皂苷R1和人参皂苷Rg1，Re，Rb1对照品，按供试品溶液制备项下操作，重复操作6份，按色谱条件测定含量，计算回收率。结果见表2。表2 加样回收率实验结果（略）
2.8 样品测定分别取4批复方三七缓释片，按供试品制备方法制备供试品溶液，精密吸取10 μl，按上述色谱条件进行测定。结果见表3。表3 样品测定结果（略）
3 讨论
我们曾采用《中国药典》方法进行含量测定，结果分析时间过长（约80 min），人参皂苷Rg1和人参皂苷Re也不能得到基线分离。《中国药典》方法［1］是采用水和乙腈为流动相进行梯度洗脱，但人参皂苷Rg1与人参皂苷Re达不到基线分离的效果，把水换成0.05%的磷酸水溶液，即可排除干扰，又能使各组分达到基线分离的效果，且分析时间较短。
样品分析过程中柱温以15～17℃为宜，若超过20℃ 则影响人参皂苷Rg1与人参皂苷Re的分离，理论塔板数以三七皂苷R1计应不低于4 000。
【参考文献】
［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：527.