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【摘要】 目的观察阴性对照品对供试品的色谱是否有影响。方法用薄层色谱（TLC）法对针椒巴布剂中两面针、八角枫进行鉴别。结果与结论供试品色谱中，在与原药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。
【关键词】 两面针；八角枫；薄层色谱；针椒巴布剂
针椒巴布剂由两面针、辣椒籽、八角枫3味药组成。本课题组采用薄层色谱鉴别方法对本方中两面针与八角枫进行了TLC鉴别实验研究。
1 器材
1.1 材料
针椒巴布剂［规格1（厚）、规格2（薄），本课题组自制］；各阴性对照品（自制）；两面针原药材购自佛山药材公司，八角枫原药材采自从化流溪河鸡枕山；硅胶G（中国青岛海洋化工集团公司），其他试剂均为分析纯。
1.2 仪器
BSZ-2型自动双重蒸馏水器（上海博通）；超声波清洗器 (昆山超声仪器有限公司)； METTLER-TOLEDD ABS-265-S型电子天平(瑞士)；TD-II全自动薄层制板器(上海科哲)； IXUS750型Canon数码相机（日本佳能公司）；DHG101-7A电热鼓风式干燥箱（巩义市英峪予华仪器厂）；WFH-201B紫外透射反射仪（上海精科）；JJW-5KVA精密交流净化稳压器（上海市稳压器厂）。
2 鉴别研究
2.1 两面针TLC鉴别
2.1.1 供试品溶液的制备①取巴布剂3片，除去盖衬，剪碎，称取5 g，置具塞锥形瓶中，加入0.5 mol/L盐酸100 ml，超声处理30 min，滤过，滤液用氨水调pH至9，用三氯甲烷振摇提取4次，20 ml/次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。
②取巴布剂3片，除去盖衬，剪碎，称取5 g，置具塞锥形瓶中，加氨水1 ml与三氯甲烷50 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。
③取巴布剂3片，除去盖衬，剪碎，称取5 g，置具塞锥形瓶中，加75%的乙醇100 ml，密塞，浸渍过夜，超声处理30 min，滤过，滤液蒸至无醇味（可加适量蒸馏水稀释），用氨水调pH至9，用三氯甲烷振摇提取4次，20 ml/次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。
2.1.2 两面针原药材溶液的制备取两面针原药材2 g，粉碎，同“供试品溶液制备”的方法制成原药材溶液。
2.1.3 缺两面针阴性对照溶液的制备取缺两面针阴性对照样品5 g，同“供试品溶液制备”的方法制成缺两面针阴性对照溶液。
2.1.4 薄层板硅胶G薄层板。
2.1.5 展开剂①苯-醋酸乙酯-甲醇-丙三醇-氨水（10∶5∶1∶0.1∶0.06）;②苯-醋酸乙酯-无水乙醇-氨水（24∶3∶1∶0.5）;③苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨水（10∶2.5∶1∶0.15∶0.06）。
2.1.6 展开照《中国药典》2005版Ⅰ部薄层色谱法(附录VIB)试验,吸取供试品溶液、两面针原药材溶液、缺两面针阴性对照溶液各20 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开，取出，晾干。
2.1.7 显色置紫外光灯（365 nm）下检视或喷改良碘化铋钾试液。
2.1.8 结果通过以上实验优选，优化的TLC鉴别条件为：以“2.1.1”项中③方法制备供试品，以展开剂③展开，喷改良碘化铋钾试液显色。
2.1.9 结论以两面针原药材为对照进行薄层色谱鉴别，供试品色谱中，在与原药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，见图1。
2.2 八角枫的TLC鉴别
2.2.1 供试品溶液的制备①取巴布剂4片，除去盖衬，剪碎，称取8 g，用含1%盐酸的70%乙醇150 ml加热回流1 h，滤过，蒸去乙醇，加水10 ml溶解，静置，滤过，滤液用氢氧化钠溶液调pH至9～10，用三氯甲烷振摇提取3次，20 ml/次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。
②取巴布剂4片，除去盖衬，剪碎，称取8 g，加70%乙醇150 ml加热回流1 h，振摇滤过，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。
③取巴布剂4片，除去盖衬，剪碎，称取8 g，加pH值8～9的氢氧化钠溶液20 ml润湿，再加入三氯甲烷100 ml回流提取30 min，滤过，滤液放冷，分取氯仿层，蒸干，残渣用1%盐酸溶解，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。
④取巴布剂4片，除去盖衬，剪碎，称取8 g，加150 ml蒸馏水浸泡12 h，超声处理15 min，滤过（40目筛），滤液用醋酸乙酯提取3次，20 ml/次，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。
⑤取巴布剂4片，除去盖衬，剪碎，称取8 g，加蒸馏水150 ml浸泡12 h，超声处理15 min，滤过（40目筛），滤渣加蒸馏水20 ml洗涤，合并滤液与洗涤液，用稀盐酸调pH 2～3，用醋酸乙酯提取3次，20 ml/次，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。
2.2.2 八角枫原药材溶液的制备取八角枫原药材2.5 g,粉碎，加水60 ml回流1 h，滤过，余同“供试品溶液制备”的方法制成对照药材溶液。
2.2.3 缺八角枫阴性对照溶液的制备取缺八角枫阴性对照样品8 g，同“供试品溶液制备”的方法制成阴性对照溶液。
2.2.4 薄层板硅胶G薄层板。
2.2.5 展开剂苯-醋酸乙脂-甲醇-异丙醇-氨水（10∶2.5∶1∶0.15∶0.06）。
2.2.6 展开照薄层色谱法《中国药典》2005年版Ⅰ部附录VI B）试验，吸取上述原药材溶液、供试品溶液与缺八角枫阴性对照溶液各20 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，展开，取出，晾干。
2.2.7 显色置紫外光灯（365 nm）下检视或喷改良碘化铋钾试液。
2.2.8 结果通过以上实验优选，优化的TLC鉴别条件为：以“2.2.1”项中⑤方法制备供试品，喷改良碘化铋钾试液显色。
2.2.9 结论以八角枫原药材为对照进行薄层色谱鉴别，供试品色谱中，在与原药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。