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【摘要】 目的研究决明子不同清炒品中5种醌类成分含量的变化。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为Shim-pack CLC-ODS C18柱；流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱；流速1 ml/min；波长440 nm。结果该方法准确可靠，重复性好。结论清炒温度越高，决明子中游离蒽醌含量有变大趋势，结合蒽醌含量有变小趋势，总蒽醌含量变化不大。
【关键词】 高效液相色谱法 决明子清炒品 蒽醌
Abstract：ObjectiveTo study the content variety of anthraquinone in different Semen Cassiae fried without additional ingredients.MethodsHPLC method was developed.The separation was performed on an ODS column with the mobile phase of CH3OH-0.1% phosphoric acid.The flow rate was 1ml/min and the detection wavelength was 320nm.ResultsThis method was convenient and reliable.ConclusionThe temperature that fried without additional ingredients is more high,the content of the dissociative anthraquinones is more rich,the content of the associative anthraquinones is less, but the content of the associative anthraquinones changed little.
Key words：HPLC; Semen Cassiae; Fries without additional ingredients; Anthraquinones
决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子。性味甘、苦、咸、微寒，归肝、大肠经。具有清肝明目、润肠、通便之功效，为临床常用中药［1］。其主要化学成分为蒽醌类化合物。决明子在历史文献中有醋制、炒制、火炙及酒制4种炮制方法，其中以炒制在文献中记载最多，且沿用至今［2］。在炒制过程中，由于受热等因素的影响，其化学成分及药理作用均有所变化。本实验采用HPLC法分别测定了它们中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚蒽醌类成分的含量，研究不同清炒品中蒽醌的含量变化，以期为决明子的基础研究和工业饮片炮制提供实验依据。
1 仪器与材料
LC-10ATvp高效液相色谱仪（日本岛津公司），AEG-45SM电子天平（十万分之一，日本岛津公司）；芦荟大黄素（批号0795-9702），大黄酸（批号0757-9804），大黄素（批号0756-200009），大黄酚（批号110796-200513），大黄素甲醚（批号0758-9803），均购自中国药品生物制品检定所；决明子（重庆合川GAP种植基地，由重庆中药研究院生药室提供并鉴定）；水为重蒸水，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 方法及结果
2.1 对照品溶液的制备分别精密称取芦荟大黄素0.53 mg，大黄酸0.58 mg，大黄素0.55 mg，大黄酚0.53 mg，大黄素甲醚0.58 mg，加甲醇，超声溶解，分别定容至5 ml，为对照品溶液。
取上述5种对照品溶液各2.0 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，即为混合对照品溶液。混合对照品溶液中各对照品的浓度分别为：芦荟大黄素对照品溶液0.021 2 mg/ml、大黄酸对照品溶液0.023 2 mg/ml、大黄素对照品溶液0.022 mg/ml、大黄酚对照品溶液0.021 2 mg/ml、大黄素甲醚对照品溶液0.023 2 mg/ml。
2.2 清炒品的制备称取5份决明子药材各300 g，编号，按表1处理。将处理好的决明子粉碎，备用。表1 不同清品的制备（略）
2.3 供试品溶液的制备
2.3.1 总蒽醌供试品溶液的制备取生品及各炮制品粉末（过4号筛）约1 g，精密称定。置索氏提取器中，加80%乙醇100 ml回流提取至无色，合并提取液，定容至100 ml，精密吸取25 ml提取液，经减压回收后，残渣加浓度为1 mol/L盐酸溶液400 ml回流水解3 h，然后用120 ml氯仿分4次回流萃取，30 ml/次，合并氯仿萃取液并加适量蒸馏水洗至中性，回收氯仿。残渣加氯仿溶解并转移至10 ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，即得［3，4］。
2.3.2 游离蒽醌供试品溶液的制备取总蒽醌供试品溶液的制备项下提取液25 ml，经减压回收后残渣加120 ml氯仿分4次回流提取至无色，合并氯仿萃取液，回收氯仿。残渣加氯仿溶解并转移至10 ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，即得。
2.4 色谱条件色谱柱为Shim-pack CLC-ODS C18(6.0 mm×150 mm,5μm)；流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱；流速1 ml/min；柱温为室温；检测波长440 nm。
2.5 标准曲线的绘制分别精密吸取混合对照品溶液8，10，12，14，16 μl进样，测定峰面积，绘制标准曲线，计算混合对照品中各对照品的回归方程及线性范围，结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的回归方程分别为：Y=814 521X-20 442,Y=1 110 506X-7296,Y=1 431 202X+4274，Y=1 739 861X-24 381,Y=707 106X-26453，其线性范围分别为：0.170～0.339 μg，0.186～0.371 μg，0.176～0.352 μg,0.186～0.371 μg。
2.6 精密度实验精密吸取混合对照品溶液10 μl，进样，测定各峰峰面积，连续测定5次，求得各峰面积值的相对标准偏差（RSD）分别为：芦荟大黄素0.7%，大黄酸1.8%，大黄素0.6%，大黄酚1.1%，大黄素甲醚1.4%。结果表明仪器精密度良好。
2.7 稳定性实验
2.7.1 对照品溶液稳定性实验精密吸取混合对照品溶液10 μl，进样，分别于0，2，4，8，12，24 h后重复上述操作，计算各成分峰面积值的相对标准偏差（RSD）分别为：芦荟大黄素0.9%，大黄酸0.8%，大黄素0.7%，大黄酚1.2%，大黄素甲醚1.3%。结果表明混合对照品溶液在24 h内基本上是稳定的。
2.7.2 供试品溶液稳定性实验精密吸取总蒽醌供试品溶液10 μl，进样，分别于0，2，4，8，12，24 h后重复上述操作，计算各成分峰面积值的相对标准偏差（RSD）分别为：芦荟大黄素0.6%，大黄酸0.7%，大黄素1.3%，大黄酚0.6%，大黄素甲醚1.7%。结果表明供试品溶液在24 h内基本上是稳定的。
2.8 重复性实验精密称取决明子药材（1号）5份，照“2.3”项下总蒽醌供试品溶液的制备方法制备供试液，精密吸取供试品溶液10 μl，进样，测定各成分峰面积值，计算各成分平均含量及RSD值分别为：芦荟大黄素为0.0084%,RSD为0.8%；大黄酸为0.0079%，RSD为1.1%；大黄素为0.0313%，RSD为1.2%；大黄酚为0.1732%，RSD为0.7%；大黄素甲醚为0.0883%，RSD为1.3%。结果表明，该方法具有较好的重现性。
2.9 加样回收率实验精密称取决明子药材（1号）6份，每份约0.5 g，精密称定，分别精密加入大黄酚对照品（50 μg/ml）15 ml。照“2.3”项下总蒽醌供试品溶液的制备方法制备供试液，精密吸取供试品溶液10 μl，进样，测定大黄酚的峰面积。结果见表2。表2 大黄酚回收率测定结果（略）
表2表明，大黄酚的平均回收率为100.94%，RSD值为2.12%。表明该测定方法是合理可行的。
2.10 样品的含量测定精密吸取各供试品溶液10 μl，按“2.4”项下色谱条件进样，测定各对照成分峰面积，计算含量，即得。样品的含量测定结果见表3。表3 样品含量测定结果（略）
由表3可知，决明子5种蒽醌类成分中大黄酚、大黄素甲醚、大黄素含量较高，经过清炒后，5种成分的游离态含量会降低，另外，炒制温度对决明子5种蒽醌含量也有影响，温度越高，游离态含量越高，结合态越低。
3 讨论
决明子种皮异常坚硬，整粒不容易提取蒽醌类成分，需粉碎后提取；而蒽醌类成分在乙醇中的溶解度大于在水中，故采用乙醇提取。
实验中的炒制时间是以决明子炒制后的性状为依据的，即炒至决明子冒香气并有多数发出爆裂的声音。
清炒后决明子中的游离蒽醌含量升高，总蒽醌基本一致，结合蒽醌含量降低，判断可能是在炒制时因受热等因素影响，蒽醌的苷键断裂，使结合蒽醌含量降低，而游离蒽醌含量升高。
【参考文献】
［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：98.
［2］张启伟，阴 健.决明子炮制历史沿革研究［J］.中成药，1996，18（2）：23.
［3］马云里，徐杰远.决明子蒽醌提取方法的研究［J］.齐鲁药事，2004，23（7）：41.
［4］蒋午峻，王 巧，袁志芳，等.高效液相色谱法同时测定决明子中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚［J］.河北医科大学学报，2006，27（4）：271.