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【摘要】 目的考察山茱萸与五味子配伍前后两药主要组分的含量变化规律。方法利用高效液相色谱（HPLC）方法，比较了配伍前后单煎液、合煎液和单煎合并液中两药主要组分马钱苷、没食子酸和五味子醇甲的含量变化。结果在配伍比例较低（≤4:4）时，五味子促进了山茱萸中马钱苷的溶出。合煎液中的没食子酸、五味子醇甲组分的百分含量随着五味子配伍比例的增大呈线性减小，且均低于单煎液。单煎合并液中这3种组分的含量均高于同比例合煎液。结论山茱萸五味子配伍对两药主要组分溶出有较大影响，该影响主要在煎煮过程中发生。
【关键词】 山茱萸 五味子 配伍 马钱苷 五味子醇甲 没食子酸 高效液相色谱法
Abstract:ObjectiveTo investigate the content variation of main chemical constituents before and after combination of Fructus Corni with Fructus Schisandrae Chinensis. MethodsFructus Corni and Fructus Schisandrae Chinensis were decocted with water separately and the separate aqueous extract were combined partly. Different proportions of Fructus Corni with Fructus Schisandrae Chinensis at different proportions were decocted together. Then the contents of loganin, gallic acid and schisandrin were determined by high performance liquid chromatography (HPLC) .ResultsFructus Schisandrae Chinensis could promote the dissolve of Loganin at low combined proportions. The contents of gallic acid and schisandrin were declined linearly with the increase of Fructus Schisandrae Chinensis in combination, and they were all lower than those in the separate aqueous extract. The contents of the three constituents in incorporated aqueous extract of Fructus Corni and Fructus Schisandrae Chinensis were all overtop the same proportion together-decoction.ConclusionThe great influence of the combination of Fructus Corni with Fructus Schisandrae Chinensis on the contents of main chemical constituents was mainly carried on in the decoction process which provides a certain scientific basis for the reasonable Chinese herbal medicine.
Key words:Fructus Corni; Fructus Schisandrae Chinensis; Combination; Loganin, Schisandrin; Gallic acid; High performance liquid chromatography (HPLC)
中药山茱萸为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Seib et Zucc．除去种子的干燥成熟果肉，最早见于《神农本草经》，具有补益肝肾、涩精固脱等功效［1］。五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.的干燥成熟果实，习称“北五味子”，因其果实五味具有故名。五味子为酸温之品，具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功效［2］。两药有酸涩作用，同时又具补肝肾之功，配合作用较强。临床上用两药配伍治疗老人尿频失禁、汗大出而气阴虚脱者［3］、目暗不明，头晕眼花等症，常获良效［4］。
山茱萸中主要药效成分为有环烯醚萜类和机酸类；五味子中主要药效成分为木脂素类和有机酸类。目前还没有对这组药配伍的研究报道。我们从化学角度，选用主要的药效代表物质－马钱苷、没食子酸和五味子醇甲来探讨山茱萸五味子配伍的机理。
本实验以不同比例的山茱萸五味子配伍，应用高效液相色谱分析手段研究了药材单煎、共煎和单煎混合过程中的溶出行为，阐明了山茱萸五味子配伍时主要组分的变化规律和两药材间的明显相互作用。从物质变化的角度揭示了山茱萸五味子配伍的科学内涵,为我国中医药配伍理论的进一步研究提供了物质基础。
1 器材与方法
1.1 仪器与试药
美国Waters(Milford, MA, USA) 2695 HPLC系统;二极管阵列(DAD)检测器；Waters自动进样器。乙腈、甲醇、醋酸为色谱纯(美国Fisher公司) ；其余试剂均为分析纯(北京化工厂) ，水为超纯水( 18.2 MΩ·cm) , 0. 45 μm滤膜(美国安捷伦公司) 。山茱萸、五味子由吉林省药材有限公司提供，由长春中医药大学王淑敏教授鉴定。马钱苷、没食子酸、五味子醇甲标准品购于中国药品生物制品检定所，含量测定用。
1.2 方法
1.2.1 样品液制备水提取法。
单煎：称取山茱萸和五味子各一定量，分别放入烧杯中，加入200 ml蒸馏水热浸30 min，急火烧开后保持微沸并记时，煎煮两次，60 min/次，合并滤液减压浓缩并定容得山茱萸与五味子的单煎液。
合煎：精密称取山茱萸4 g，分别加入1，2，4，6，8，12 g的五味子，按单煎的条件同样煎得合煎液。
单煎合：分别取山茱萸单煎液和五味子单煎液，按生药量浓度相等换算，配得山茱萸五味子4:2单煎合并液。
1.2.2 色谱条件色谱柱为Capcell Pak C18柱(4. 6 mm ×250 mm, 5 μm)。理论塔板数按马钱苷计算大于3 000。马钱苷、五味子醇甲测定：流动相为乙腈－水（15∶85），检测波长245 nm；没食子酸测定：流动相为甲醇－乙腈－0.3%醋酸水溶液(5∶6∶89)， 检测波长270 nm。流速都为0.7 ml/min，柱温35℃。样品色谱图见图1。
1.3 方法学考察
1.3.1 线性关系考察分别取3种标准品溶液2，4，6，8，10 μl进样，以标准品含量（X）对相应峰面积积分值（Y）进行回归，得回归方程和线性范围为：
马钱苷：Y=2.50e+006X－1.19e+005，r=0.999 8，线性范围0.52～ 2.60 μg。
没食子酸：Y=5.84e+006X+2.36e+004，r=0.999 9,线性范围0.112～ 0.56 μg。
五味子醇甲：Y=1.30e+007X+2.11e+005,r=0.999 7，线性范围0.12～ 0.6 μg。
1.3.2 精密度实验
取同一份样品液，连续进样5次，3个色谱峰保留时间RSD分别为0.15%，0.23%，0.18%，峰面积RSD分别为0.35%，0.33%，0.38%。
1.3.3 稳定性实验
取同一份样品液，每隔4 h进样1次，共测定5次，3个色谱峰保留时间RSD分别为1.12%，1.36%，1.28%，峰面积RSD分别为1.54%，1.13%，1.27%。
1.3.4 重复性实验
将山茱萸和五味子单煎液按4:2合并，得到5份单煎合并液。分别按上法进样分析，3个色谱峰保留时间RSD分别为1.09%，1.15%，0.97%,峰面积RSD分别为2.58%，2.80%，2.61%。
1.3.5 加样回收率实验
精密称定样品适量，5份，分别加入一定量的马钱苷、没食子酸和五味子醇甲标准品，按样品分析方法进行处理，并各平行测定2次。本方法3种成分的平均加样回收率分别为100.58%，99.97%，100.14%，RSD分别为2.48%，2.63%，2.37%。
2 结果
按照“1.2”项下方法操作，进样10 μl，测定山茱萸与五味子不同配伍比例各样品中的马钱苷、没食子酸和五味子醇甲的含量，结果见表1。从表1中可知，五味子中不含有马钱苷和没食子酸组分，该两种组分的测定结果数据均来源于山茱萸中成分；山茱萸中不含有五味子醇甲组分，测定结果数据均来源于五味子中成分。山茱萸五味子配伍时这3种组分的百分含量和配伍比例之间的关系见柱状图2。表1 各样品中马钱苷、没食子酸和五味子醇甲的含量（略）
从表1和图2可以看出，比较马钱苷含量数据，随着五味子配伍比例的增大，马钱苷的溶出呈下降趋势。在配伍比例较低（≤4:4）时，合煎液中马钱苷的溶出较山茱萸单煎液要多，且变化不大，在配伍比例较高时，马钱苷的含量迅速下降了23%。合煎液中没食子酸组分的百分含量随着五味子配伍比例的增大呈线性减小，且均低于山茱萸单煎液。数据波动范围较其它两组分小。五味子醇甲的含量变化趋势与没食子酸相似，但下降率更大。按配伍比例 4∶2 配制的山茱萸五味子单煎合并液中这3种组分的含量均高于同比例合煎液。
上述结果分析均表明山茱萸五味子配伍对各有效组分的溶出均有较大影响。在配伍比例（≤4∶4）时，五味子对山茱萸中马钱苷的含量有促进作用。各配伍比例时五味子抑制了山茱萸中没食子酸组分的溶出，山茱萸同样在各配伍比例下抑制了五味子中五味子醇甲组分的溶出。采用先对单味药材进行煎煮，然后对单煎液进行配伍的思路可以消除药材共煎过程中山茱萸组分和五味子组分之间的相互作用，这说明山茱萸五味子配伍对组分的影响主要在煎煮过程中进行。在实验过程中，未发现合煎液或者单煎合并液出现沉淀，那么组分含量变化的原因可能是，山茱萸五味子同属酸味药，有机酸和木脂素部分组分存在溶出竞争，溶出被抑制，或者部分形成新的化合物而减少了组分的含量。
3 讨论
在分析方法上对流动相的组成及洗脱方式分别进行了考察优化。可以采用梯度洗脱同时得到3种组分的色谱峰，但样品液分离效果较差，峰形也较差。并且从含量测定精度角度考虑，最终选择了两次等度洗脱，得到3种组分的良好分离和快速测定。
对山茱萸水煎液和五味子水煎液配伍时主要组分含量变化规律进行了研究。结果表明，在配伍比例较低（≤4∶4）时，合煎液中马钱苷的溶出较山茱萸单煎液要多，且变化不大，在配伍比例较高时，马钱苷的含量迅速下降。合煎液中没食子酸、五味子醇甲组分的百分含量随着五味子配伍比例的增大呈线性减小，且均低于山茱萸单煎液。按配伍比例 4∶2 配制的山茱萸五味子单煎合并液中这3种组分的含量均高于同比例合煎液。
采用先对单味药材进行煎煮，然后对单煎液进行配伍，所得数据与同比例合煎液比较，可知山茱萸五味子配伍对组分含量的影响主要在煎煮过程中进行。
【参考文献】
［1］赵友仁.山茱萸的本草考证［J］.中药材,1987,10(5)：51..
［2］李晓光，罗焕敏. 南五味子属植物化学成分及其活性研究进展［J］.中国中药杂志, 2003,28(12)：1120.
［3］邵凤凤，王秀玲.从四气五味谈酸味药的临床配伍运用［J］.河北中医,2004,26(12)：919.
［4］张会芳，李志文. 五味子的临床效用［J］.时珍国药研究，1996,7(4)：198.