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【摘要】 目的 建立酸枣仁颗粒中酸枣仁皂苷A与酸枣仁皂苷B的含量测定方法。方法反相高效液相色谱法 ，采用Hypersil C18柱为分析柱 ，使用以乙腈和水为流动相的二元梯度洗脱方法，检测波长为201 nm ，流速为1 ml·min-1。结果酸枣仁皂苷A在50.01～198.2 μg·ml-1与峰面积呈良好的线性关系 (r=0 .999 8,n =5) , 平均回收率为99.41%；酸枣仁皂苷B在66.25～209.0μg·ml-1与峰面积呈良好的线性关系 (r =0.999 8,n =5 )，平均回收率为 99.34 %。结论 该法简便、快速、重现性好 ，适用于酸枣仁颗粒中酸枣仁皂苷A与酸枣仁皂苷B的定量分析。
【关键词】 反相高效液相色谱法； 酸枣仁皂苷A； 酸枣仁皂苷B； 酸枣仁颗粒
Abstract:ObjectiveTo develop a method for the determination of Jujubaside A and Jujubaside B in Ziziphus jujuba Mill(ZJM) Granules. MethodsAn RP-HPLC method was set up with Hypersil 18 column.The mobile phase consisted of acetonitrile and water, and a gradient elution program was applied. The DAD detector was set at 201 nm. ResultsThe calibration curve of Jujubaside A was linear in the range of 50.01～198.2 μg·ml-1,the average recovery was 99.41%;the calibration curve of Jujubaside B was linear in the range of 66.25～209.0μg·ml-1,the average recovery was 99.34%.ConclusionThe method is appropriate for the determination of Jujubaside A and Jujubaside B.
Key words:RP-HPLC; Jujubaside A； Jujubaside B; Ziziphus jujuba Mill(ZJM) Granules
酸枣仁颗粒是由酸枣仁、茯苓、知母等药材组成，具有养心安神、镇静催眠之功效。其中酸枣仁为方中君药，酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B为酸枣仁镇静催眠的主要成分［1，2］。本品采用RP-HPLC法对酸枣仁颗粒中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B进行含量测定，获得满意效果，为该制剂的质量控制提供了快速准确的方法。
1 仪器与试药
美国安捷伦1100高效液相色谱仪；梅特勒-托利多AG-285电子分析天平；江苏金坛宏凯仪器厂79-1电磁搅拌仪。
酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B对照品（成都思科华生物技术有限公司，纯度>98%，供含量测定用）；酸枣仁颗粒：扬子江药业集团上海海尼药业有限公司，批号为04051401，04051501，04051601。乙腈为色谱纯，购自Sigma；甲醇、乙醚等均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；纯净水自制。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为Hypersil ODS C18型色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相：最初7 min为乙腈-水(28∶72)，7～13 min内乙腈浓度梯度上升为35%，维持至22 min，22～25 min内乙腈浓度上升为45%，35 min结束，20 min平衡。流速：1.0 ml·min-1；检测波长201 nm；柱温25℃。数据处理方法：外标峰面积法。理论塔板数按酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B计不得低于2 500。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液
分别精密称取酸枣仁皂苷A对照品和酸枣仁皂苷B对照品适量，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含0.15 mg酸枣仁皂苷A和0.15 mg酸枣仁皂苷B的溶液，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，弃去初滤液，续滤液作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液精密称取本品7.5 g，置烧杯中，加5%的氢氧化钠溶液50 ml使之完全溶解，并全部转移至分液漏斗中，乙醚脱脂3次，30 ml/次，弃去乙醚层，下层液挥尽乙醚后，用水饱和的正丁醇萃取3次，30 ml/次，合并正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，10 ml/次，正丁醇液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至10 ml量瓶中，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，弃去初滤液，续滤液作为供试品溶液。
2.3 线性关系考察分别精密称取酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B对照品适量，加甲醇溶解并定容至50 ml，分别精密量取3.0，5.0，10.0，15.0，20 ml置于25 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，备用。分别精密取上述滤液10 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，分别以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线，得回归方程分别为：
酸枣仁皂苷A ：Y＝2.7435x+31.769，r＝0.999 8
酸枣仁皂苷B：Y＝3.313 7x-15.154,r＝0.999 8
结果表明，酸枣仁皂苷A在浓度为50.01～198.2 μg·ml-1 的范围内线性良好，酸枣仁皂苷B在浓度为66.25～209.0 μg·ml-1范围内和峰面积呈良好的线性关系。
2.4 专属性实验按样品工艺制备缺酸枣仁的阴性样品，照“2.2.2”项下操作，制备阴性对照品溶液。进样10 μl进行测定，结果阴性对照样品在与对照品溶液及样品溶液中酸枣仁皂苷A与酸枣仁皂苷B相应的保留时间处无吸收峰出现。见图1。
2.5 精密度实验
精密吸取对照品溶液10 μl ，连续进样6次，记录色谱图，测定峰面积，计算，结果酸枣仁皂苷A峰面积的RSD为0.43%，酸枣仁皂苷B峰面积的RSD为0.39%，表明精密度良好。
2.6 重复性实验精密称取本品6份（批号04051401），7.5 g/份，按供试样品溶液的制备方法制备供试液。各进样10 μl，记录色谱图，测定峰面积，计算，结果酸枣仁皂苷A峰面积的RSD为0.69%，酸枣仁皂苷B峰面积的RSD为0.71%，表明重复性良好。
2.7 稳定性实验取重复性实验中6号样品，分别于0，2，4，6，8 h测定，取10 μl注入液相色谱仪，结果酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B 在8 h内峰面积积分值基本不变，其RSD值分别为0.79%和0.94%，说明室温放置8 h稳定。
2.8 加样回收率实验精密称取一批已知含量的中试产品9份（批号04051401）；按80%，100%，120%的比例加入酸枣仁皂苷对照品溶液，按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，进样10 μl，记录色谱图，测定峰面积，按外标法计算酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂 B的含量，计算加样回收率。酸枣仁皂苷A的平均回收率为99.41%，RSD为0.50%；酸枣仁皂苷B的平均回收率为99.34%，RSD为0.13%。
2.9 样品测定按“2.2”项下操作，分别制备对照品溶液和供试品溶液。精密吸取此两种溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪中，记录色谱图 ，测定峰面积，按外标峰面积计算酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B的总含量。 结果见表1。表1 样品的测定结果（略）
3 讨论
3.1 提取方法的选择
本实验中考察了甲醇、50%乙醇、5%的氢氧化钠溶液对提取效率的影响，结果表明5%的氢氧化钠溶液的提取效率较高，所以在供试品溶液制备中采用5%的氢氧化钠溶液对酸枣仁颗粒进行提取。
3.2 流动相的选择
酸枣仁颗粒中的化学成分较复杂，检测易受干扰， 我们采用了梯度洗脱的方法，可以同时对酸枣仁皂苷A、B的含量进行测定，且分离度良好。
上述测定酸枣仁皂苷A、枣仁皂苷B总量的RP-HPLC法简便可靠，可以用于酸枣仁颗粒的质量控制。
【参考文献】
［1］黄胜英,谢世荣,黄彩云,等. 酸枣仁皂甙的镇静作用研究［J］.大连大学学报, 2002,23(4):90.
［2］郑晔,钱苏瑜,游自立. 酸枣仁药理作用研究进展［J］.四川生理科学杂志 , 2006,28(1)：35.