高效液相色谱法测定金丹前列片中淫羊藿苷的含量

　　【摘要】 　　目的 建立测定金丹前列片中淫羊藿苷含量的高效液相色谱法。方法采用高效液相色谱法，C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇∶水（55∶45）；检测波长：270 nm；流速：1.0 ml/min。结果淫羊藿苷的平均回收率为99.8%，RSD为1.1%（n=5）。结论该方法简便、灵敏、准确，具实用性。

　　【关键词】  金丹前列片； 淫羊藿苷； 高效液相色谱法

　　Abstract:ObjectiveTo establish high performance liquid chromatography method for measuring the content of epimedium glucoside in Jindan-qianlie Tablet.MethodsHigh porformance liquid chromatography was used with C18 chromatographic column (250 mm×4.6 mm，5μm),the mobile phase was formaldehy:water(55∶45); detection wavelength with 270 nm,and the flow rate was 1.0 ml/min.ResultsThe average recovery rate of epimedium glucoside was 99.8%. The relative standard deviation was 1.1% (n=5).ConclusionThe method is practical with the features of simpleness, sensitiveness and accuracy.

　　Key words:Jindan-qianlie Tablet;  Epimedium glucoside;  High performance liquid chromatography

　　金丹前列片系南昌市男科医院自制的制剂，由淫羊藿、丹参、金银花、生地等中药组方制备而成，具有清热利湿、活血化瘀之功效，主要用于湿热下注型慢性前列腺炎及下焦湿热型、瘀血阻滞型前列腺增生。淫羊藿为方中的主药之一，其主要活性成分为淫羊藿苷。为了控制该制剂的内在质量，现以淫羊藿苷为指标，建立金丹前列片专属性的含量测定方法。

　　1  仪器与试药

　　高效液相色谱仪（LC-10AC，日本岛津）；Mettler AE 163 电子天平；BUG25－06型超声仪；金丹前列片（自制制剂）；淫羊藿苷（购自中国药品生物制品检定所，含量测定用）水为超纯水，乙腈、甲醇等为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

　　C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇∶水（55∶45）；流速：1.0 ml/min；柱温：室温。进样体积：20 μl；检测波长：270 nm。在此条件下淫羊藿苷与其它组分均能达到很好的分离，分离度大于1.5，理论塔板数均大于1 200。

　　2.2  对照品溶液的制备

　　精密称取干燥至恒重的淫羊藿苷对照品9.866 mg，置10 ml容量瓶中，加入50%甲醇稀释至刻度，摇匀，得到浓度为0.986 6 mg/ml的淫羊藿苷储备液；精密吸取淫羊藿苷储备液适量，用50%甲醇制成每毫升含淫羊藿苷10 μg对照品溶液。

　　2.3  供试品溶液的制备

　　取本品10片，精密称定，研细，取2 g，精密称定，精密加入50%甲醇25 ml，称定重量，超声处理45 min（功率250 W，频率25 kHz），放冷，再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.4  阴性对照溶液的制备

　　按处方取缺淫羊藿药材的其它药材，依制备工艺制成的不含淫羊藿的样品，按供试品溶液的制备阴性对照溶液。

　　2.5  线性关系的考察

　　精密吸取浓度为0.986 6 mg/ml的淫羊藿苷储备液5 ml，置25 ml容量瓶中，加入50%甲醇稀释至刻度，摇匀，再从中分别精密吸取1.0，2.0，5.0，8.0，10.0 ml，分置50 ml容量瓶中，加入50%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别取上述溶液各20 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图及峰面积，以峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，进行回归分析，得回归方程为：y=3 832.584+1 635 926.591 x，r=0.999 6。结果表明，淫羊藿苷在0.078 9～0.789 3 μg之间呈良好线性。

　　2.6  稳定性实验

　　精密吸取供试品溶液，按色谱条件，每隔2 h进样一次，测定峰面积，实验表明，淫羊藿苷在8 h内峰面积基本稳定，RSD为0.28%。

　　2.7  精密度实验

　　精密吸取相同浓度的淫羊藿苷对照品溶液20 μl，重复进样5次，测定峰面积，结果RSD为0.85%。

　　2.8  重复性实验

　　分别取同一批样品（批号20050217）5份，按供试品溶液的制备方法进行制备并测定淫羊藿苷的含量，结果RSD为0.6%，表明此法重现性较好。

　　2.9  加样回收率实验

　　精密称取已知含量为0.209 3 mg/g供试品适量，分别精密加入浓度为0.197 3 mg/ml的淫羊藿苷对照品的50%甲醇溶液1 ml，按上述测定方法测定，计算回收率，结果表明本方法回收率良好。结果见表1。表1  回收率实验结果（略）

　　2.10  样品测定按上述方法，测定3批样品。结果见表2。表2  样品含量测定结果表（略）

　　3 结论与讨论

　　方中主药为淫羊藿，研究结果表明［1］，淫羊藿中主要有效成分为淫羊藿黄酮苷，可使阳虚动物模型的M受体数量减少、cGMP系统反应减弱，且有增加冠脉血流量的作用；淫羊藿苷对家兔有降低外周阻力和较缓和的降压作用，还有提高肾上腺皮质功能作用。淫羊藿苷的含量测定方法，文献报道的有紫外分光光度法、HPLC法等［2,3］。本实验经方法学研究，建立了高效液相色谱法测定金丹前列片中淫羊藿苷含量的方法。此方法简便，结果准确，可作为本制剂的质量控制指标。

　　【参考文献】

　　［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草（精选本）［M］.上海：上海科学技术出版社，1998：1530，1650，2019，2487.

　　［2］袁爱萍，韦文荣.命宝口服液中淫羊藿含量的HPLC法测定［J］.中草药，1998，29（2）：99.

　　［3］王玉萍，郭宝林. 仙灵骨胶囊中总黄酮及淫羊藿苷的含量测定［J］.中草药，200，31（10）：741