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【摘要】目的 建立五味子浸膏中五味子醇甲和五味子乙素含量测定方法。方法高效液相色谱法，采用Lichrosphere C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相为水（A）甲醇（B）梯度洗脱（0～15 min，60～70%B；15～25 min，70%～80 % B；25～35 min，80～75 % B；35～45 min，75 % B）。流速1.0 ml·min-1，柱温30℃，检测波长254 nm。结果五味子醇甲和五味子乙素分别在0.182 4～1.641 6 μg（r=1.000 3）和0.189 6～1.706 4 μg（r=0.999 9）范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为98.02%和98.42%。结论该法简便、准确、专属性强，可用于五味子浸膏的质量控制。
【关键词】 五味子浸膏； 五味子醇甲； 五味子乙素； 高效液相色谱
Abstract:Objective To establish a method for the determination of schisandrin and schisandrin B in extract from fruits of Schisandra chinensis. MethodsAn HPLC method was set up with Lichrosphere C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）column. The Mobile phase was H2O(A) and MeOH(B). Gradient elution was with 60-70% B from 0～15 min, 70%-80% B from 15～25 min, 80%-75% B from 25～35 min, and 75% B from 35～45 min. The flow rate was 1.0 ml·min-1, the column temperature was 30℃ and detection wavelength was 254 nm. ResultsThe linear ranges of schizandrin and schisandrin B were within 0.182 4～1.641 6 μg（r=1.000 3）and 0.189 6～1.706 4 μg（r=0 .999 9）, the average recoveries were 98.02 % % and 98.42 % respectively. ConclusionThis method is easy, sensitive, specific and accurate for the determination of schisandrin and schisandrin B in extract from fruits of Schisandra chinensis.
Key words:Extract from fruits of Schisandra chinensis; Schisandrin; Schisandrin B; HPLC
五味子浸膏为北五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.果实粉碎后的乙醇提取物，五仁醇胶囊、复方益肝灵片、肝喜乐胶囊等多种护肝降酶中成药均以此作为中间体投料。江苏省南通市第三人民医院以五味子浸膏为主要成分研制了复方五仁醇胶囊，用于急慢性肝炎的治疗，取得了良好效果［1］。对于五味子浸膏，除五仁醇胶囊规定了其总木脂素含量（比色法测定）外，其余没有含量测定要求，甚至连相对密度都没有规定。为保证制剂成品质量，有必要制订切实可行的五味子浸膏质量控制标准。文献研究表明［2］，五味子醇甲、五味子乙素为重要的护肝降酶有效成分。本实验建立了反相高效液相色谱法同时测定五味子浸膏中间体中五味子醇甲和五味子乙素含量的方法。
1 仪器与试药
Agilent 1100 Series高效液相色谱仪（美国惠普公司），包括四元梯度泵，自动进样器，VWD检测器，ChemSation工作站；LIBROR AEL-40SM电子分析天平（日本SHIMADZU公司）；KQ-500DE型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；甲醇为色谱纯(江苏汉邦科技有限公司)，水为纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）；五味子醇甲（批号1171-040208）、五味子乙素（批号1173-040110）对照品购自江西南昌中药固体制剂制造技术国家工程研究中心；五味子浸膏本院制剂室提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱Lichrosphere C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。流动相：水（A）甲醇（B）梯度洗脱（0～15 min，60%～70%B；15～25 min，70%～80% B；25～35 min，80～75 % B；35～45 min，75% B）。流速1.0 ml·min-1，柱温30℃，检测波长254 nm。在选定条件下，五味子醇甲、五味子乙素峰和样品中其他组分色谱峰可达基线分离，且与其他相邻色谱峰分离度大于1.5，按五味子醇甲峰计算，理论板数在5 000以上。色谱图见图1。
2.2 供试品溶液的制备
精密称取五味子浸膏0.25 g，置50 ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理30 min，甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。
2.3 线性关系考察
精密称取五味子醇甲、五味子乙素对照品4.56 mg，4.74 mg ，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，分别精密吸取2，6，10，14，18 μl进样，测定其峰面积值，以峰面积对进样量（μg）求得直线回归方程。五味子醇甲：Y=2 093.09X－26.04，r=1.000 3，线性范围为0.182 4～1.641 6 μg；五味子乙素：Y =1 756.91X－30.93，r=0.999 9，线性范围为0.189 6～1.706 4 μg。
2.4 精密度实验
精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样5次，测定五味子醇甲、五味子乙素峰面积积分值，其RSD分别为0.97%，0.81%。
2.5 重复性实验
取同一批号样品，按供试品溶液的制备方法平行制备5份，进样，测定五味子醇甲、五味子乙素峰面积积分值并计算含量，其RSD分别为1.86%，1.60%。
2.6 稳定性实验
精密吸取同一份供试品溶液10 μl，分别于0，2，4，6，8，10，12 h进样，测定五味子醇甲、五味子乙素峰面积积分值，其RSD分别为1.11%，1.08%。结果表明供试品溶液在12 h内基本稳定。
2.7 加样回收率实验 精密称取五味子醇甲、五味子乙素含量分别为14.75 mg·g-1，9.32 mg·g-1的五味子浸膏25 mg 5份，分别精密添加上述对照品溶液4 ml，置10ml量瓶中，按“2.3”方法制成10 ml供试品溶液，进样10 μl进行测定，计算回收率。结果见表1～2。表1 加样回收率实验结果（略）
2.8 样品含量测定
取3个批号的样品，制备供试品溶液，注入液相色谱仪，测定五味子醇甲，五味子乙素峰面积，按外标法计算。结果见表2。表2 样品含量测定结果（略）
3 讨论
上述3批样品的五味子醇甲，五味子乙素平均含量分别为14.74，9.24 mg·g-1，考虑到生产中的损耗及本次测定发现个批次之间的不平衡等问题，为保证产品质量，建议五味子浸膏中间体含五味子醇甲、五味子乙素应分别不得少于14.00，8.50 mg·g-1。
本实验方法简便，准确，专属性强，可用于五味子浸膏的质量控制。
【参考文献】
［1］窦志华，施忠，李伟红，等．复方五仁醇胶囊的研制［J］.时珍国医国药，2005，16（10）：953，956.
［2］王胜春，胡咏武，王俊琴，等．五灵胶囊药效作用的有效成分［J］.第四军医大学学报，2004，25（17）：1587.