高效液相色谱法测定十三味马钱子丸士的宁的含量

　　【摘要】 目的］用高效液相色谱法测定十三味马钱子丸士的宁的含量。［方法］采用HyperClone BDS C18柱（250×4.6mm，5um）；流动相为乙腈0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值为2.8）（21:79）；流速1.0ml/min；检测波长260nm；柱温30℃。［结果］士的宁浓度的线性范围为7.382～366.4μg/ml，r=0.9996，回收率为98.74%（RSD=0.6%）。［结论］本法方便、快速、准确，可用于十三味马钱子丸的质量控制。

　　【关键词】  十三味马钱子丸；士的宁；高效液相色谱法； 含量测定

　　Abstract：［Objective］To measure the strychnin content in 13 vomicnuts with HPLC.［Method］Take the mixed solution of HyperClone BDS C18 column（250×4.6mm，5um）,flow phase：acetonitrile-0.01mol/L   heptane sodium sulfonate and equal 0.02mol/L patossium dihydrogen phosphate（with 10% phosphoric acid for adjustment,pH being 2.8）（21:79）；the flow speed:1.0ml/min；measured wavelength：260nm；column temperature：30℃.［Result］The strychnin concentration is in the linear range of 7.382～366.4μg/ml，r=0.9996，the reclaim rate is 98.74%（RSD=0.6%）.［Conclusion］The method is easy,quick and correct,can be used for quality control of 13 vomicnuts strychnin.

　　Key words：13 vomicnuts;strychnine;HPLC;content measurement

　　十三味马钱子丸具有行气，降血压，化瘀止痛的功效，用于治疗气血上壅的高血压，胸背疼痛，呼吸困难，头晕，耳鸣，牙龈红肿，“冈巴”病亢盛等。士的宁为马钱子中的主要毒性成分，应对其含量进行控制，原标准［1］无控制指标。为了更好的控制该药的质量，本文用HPLC法测定样品中士的宁的含量。

　　1  仪器与试药

　　Agilent1200型高效液相色谱仪；乙腈为色谱纯；其它试剂均为分析纯。士的宁对照品购自中国药品生物制品检定所，批号705-9004，供含量测定用。十三味马钱子丸为市售，产地西藏（批号080814，081101，081212）。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件［2］  色谱柱：HyperClone BDS C18（250×4.6mm，5um）；流动相：乙腈0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值为2.8）（21:79）［2］；流速1.0ml/min；检测波长260nm；柱温30℃。此条件下士的宁与其它组分能达到基线分离，且阴性对照试验无干扰，见图1。

　　A对照品B十三味马钱子丸C阴性对照

　　图1  十三味马钱子丸高效液相色谱图（略）

　　2.2  对照品溶液制备  精密称取士的宁对照品18.32mg，置于50ml量瓶中，加三氯甲烷使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

　　2.3  供试品溶液的制备  取供试品（平均丸重为0.4103g）剪碎，取约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氢氧化钠试液2ml，混匀，放置30min，精密加入三氯甲烷20ml，密塞，称定重量，置水浴中加热加流2h，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，通过铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，精密量取续滤液10ml，置分液漏斗中，用1%硫酸溶液振摇提取5次，合并酸液，用30%氢氧化钠试液调节pH值为10～11，用三氯甲烷振摇提取5次（10、10、5、5、5ml），合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇溶解并稀释至10.0ml，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.4  阴性样品液的制备  取处方中除马钱子粉外的其他药味，按十三味马钱子丸制备方法制成阴性样品，取约0.4g，按2.3制备方法同法制备。

　　2.5  线性关系的考察  分别精密量取对照品贮备液0.2、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件，进样5ul，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，士的宁的浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=2.68X+11.029，r=0.9996，表明士的宁的浓度在7.328～366.4μg/ml范围内具有良好线性关系。

　　2.6  重复性试验  精密称取同一批号（080814）的十三味马钱子丸样品6份，分别按供试溶液制备方法制成供试品溶液，测定其士的宁的含量，其RSD为1.97%，说明此方法重复性良好。

　　2.7  稳定性试验  精密吸取供试品溶液，按上述色谱条件分别于0、2、4、8、16、32、48h分别进样5ul，测得其平均峰面积值的RSD为1.56%，表明供试品溶液中的士的宁在48h小时内是稳定的。

　　2.8  回收率试验  精密称取已知含量（含士的宁0.9166mg/丸）的十三味马钱子丸，精密添加不同量的士的宁对照品，按供试溶液制备方法及上述色谱条件分别进5ul,记录色谱图，计算回收率为98.74%，RSD=0.6%，结果表明本法回收率好，方法可行。

　　2.9  样品测定  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,按上述色谱条件测定，记录色谱图，按外标法计算3批样品中士的宁的含量，结果见表1。

　　表1  样品测定表（略）

　　3  讨论

　　本文用HPLC法测定样品中士的宁的含量，线性关系的测定、回收试验、溶液稳定性试验和重复性试验等实验结果显示，方法的重现性好，测定结果准确。

　　【参考文献】

　　［1］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部颁藏药品标准［S］.北京：工业出版社，1995:191.

　　［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京:化学工业出版社,2005:641.