高效液相色谱法测定通脉强肾酒中淫羊藿苷的含量

　　【摘要】目的制定通脉强肾酒中淫羊藿苷的含量控制标准。方法采用高效液相色谱法对方中的淫羊藿苷进行含量测定，色谱条件采用Discovery C18（4.6 mm×150 mm），流动相为乙腈－0.025 mol/L 磷酸溶液（25∶75），检测波长270 nm。结果淫羊藿苷在0.1344～0.896 μg(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系。平均回收率为98.3%（n=9），RSD为0.95%。结论该方法简便，准确。

　　【关键词】 高效液相色谱 通脉强肾酒 淫羊藿苷

　　Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of Icariin in Tongmai Qiangshen Wine.MethodsWith Discovery column C18,the mobile phase was acetonirile-0.025 mol/L phosphoric acid (25∶75). The detection wavelength was 270nm.  ResultsThe icariin samples showed a good relationship within the range of 0.1344～0.896, r=0.999 9, the average recovery of add samples was 97.4, RSD was 1.60%.ConclusionThe method is simple and accurate.

　　Key words:HPLC；   Tongmai Qiangshen Wine；  Icariin；

　　通脉强肾酒由雄蚕蛾、淫羊藿、枸杞子、黄芪等10味药组成，具补肾填精、活血通脉等功效［1］。淫羊藿为方中主药之一，其有效成分主要为淫羊藿苷［2］。为控制产品质量，保证疗效，本实验建立了分离度良好，重现性较好，阴性液无干扰的淫羊藿苷高效液相分析方法。现将研究结果报告如下。

　　1  材料与仪器

　　岛津2010高效液相色谱仪；UV-265 紫外分光光度仪，乙腈（天津四友生物医学技术有限公司 色谱纯），淫羊藿苷（中国药品生物制品检定所 100737-200312 含量测定用），通脉强肾酒（辽宁新世纪制药有限公司），其它试剂为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1   供试品溶液的配置

　　2.1.1  对照品溶液的配置精密称取淫羊藿苷对照品11.20    mg，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

　　2.1.2   样品供试液的制备取内容物适量，滤过，取续滤液，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。

　　2.1.3   阴性样品的制备按处方比例，以样品生产方法制备缺淫羊藿的通脉强肾酒，照样品供试液制备方法制备阴性供试液。

　　2.2   检测波长的选定将对照品淫羊藿苷适量溶于甲醇中，进行光谱扫描，在270 nm波长处有最大吸收，故选定270 nm 为淫羊藿苷的检测波长。

　　2.3   色谱条件色谱柱为 Discovery C18  4.6 mm×150 mm，流动相为乙腈-0.025 mol/L 磷酸溶液（1.7 ml 磷酸加水至1 000 ml ,用三乙胺调pH值至3.0±0.1）（25 ∶75），检测波长为270 nm ,在此色谱条件下，淫羊藿苷可与其它成分基线分离，阴性组分无干扰。结果见图1～3。

　　图1  对照品色谱图（略）

　　图2  样品色谱图（略）

　　图3  阴性样品色谱图（略）

　　2.4   线性范围的考察精密吸取对照品溶液5 ml 置25 ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取3，5，10，15，20 μl注入液相色谱仪中，按前述色谱条件在270 nm波长处测定，结果以进样量为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经回归处理，方程为Y=-1 428.4+124 769.7X，r=0.999 9, 可见，淫羊藿苷进样量在0.134 4～0.896 μg范围内，线性关系良好。

　　2.5   仪器精密度实验精密吸取同一供试品溶液10 μl ，按上述色谱条件，连续进样6次，测定色谱峰面积，计算RSD值为0.7%，表明仪器精密度良好。

　　2.6   稳定性实验考察精密吸取同一供试品溶液10 μl ，按0，2，4，6，8 h时间间隔进行分析，测定色谱峰面积，计算RSD值为1.2%，显示，供试品溶液制备后8 h内测定，淫羊藿苷色谱峰面积无明显变化，说明在此时间内，供试品溶液化学性质稳定。

　　2.7   重复性实验取同一批号的6份样品供试液，测定含量进行分析，结果平均含量为0.052 mg/ml，RSD为1.6%，表明本测定方法重复性良好。

　　2.8   加样回收率实验考察取已知准确含量（0.52 mg/ml）的样品，加入淫羊藿苷对照品溶液（C=0.052 1 mg/ml）4 ，5，6    ml按样品含量测定方法操作。结果见表1。结果表明，本方法回收率良好。

　　3  讨论

　　通脉强肾酒含药味较多，其质量控制存在一定的难度，淫羊藿为方中主药，测定其主要有效成分淫羊藿苷含量对于控制本品质量，更好地保证临床疗效具有重要意义。

　　表1  回收率实验考察结果（略）

　　文献报道淫羊藿苷的含量测定方法有薄层扫描法、高效液相色谱法。本研究建立的方法样品处理简单，本品含量测定理论板数按淫羊藿苷峰计算不低于3 000时，样品分离良好。

　　【参考文献】

　　［1］ 江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科学技术出版社，2005：1.

　　［2］ 国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分分析［M］.北京：人民卫生出版社，1986：1.

　　［3］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：1