高效液相色谱法测定决明子中蒽醌类成分的含量

　　【摘要】 　　目的测定决明子中5种蒽醌类成分的含量。方法采用高效液相色谱法。色谱柱：Shim-pack CLC-ODS C18柱；流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱；流速：1 ml/min；λ：440 nm。结果该方法准确可靠，重现性好。结论 该方法可以测定决明子中5种蒽醌类成分的含量。

　　【关键词】  高效液相色谱法 决明子 蒽醌

　　Abstract：ObjectiveTo determine the content of anthraquinones in Semen Cassiae. MethodsHPLC method was developed .The separation was performed on an ODS column with the mobile phase of CH3OH-0.1% phosphoric acid. The flow rate was 1ml/min and the detection wavelength was 440 nm. ResultsThis method was convenient and reliable. ConclusionThis method can be used to determine the content of anthraquinones in Semen Cassiae.

　　Key words：HPLC;  Semen Cassiae;  Anthraquinones

　　决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子。性味甘、苦、咸、微寒，归肝、大肠经。具有清肝明目、润肠通便之功效，为临床常用中药［1］。其主要化学成分为蒽醌类化合物。本实验采用HPLC法同时测定了决明子中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量，为决明子中有效物质研究奠定了基础。

　　1  仪器与材料

　　LC-l0ATvp高效液相色谱仪（日本岛津公司），AEG-45SM电子天平（十万分之一），大黄素（批号0756200009）,大黄酚（批号110796200513）,大黄素甲醚（批号07589803）(均购自中国药品生物制品检定所)，决明子（重庆合川GAP种植基地，由重庆市中药研究院生药室提供并鉴定），水为重蒸水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  对照品溶液的制备分别精密称取芦荟大黄素0.53 mg,大黄酸0.58 mg,大黄素0.55 mg,大黄酚0.53 mg,大黄素甲醚0.58 mg，加甲醇超声溶解,分别定容至5 ml,作为对照品溶液。

　　精密吸取上述5种对照品溶液各2.0 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，即得混合对照品溶液，其浓度分别为芦荟大黄素0.021 2 mg/ml，大黄酸0.023 2 mg/ml，大黄素0.022 mg/ml，大黄酚0.021 2 mg/ml，大黄素甲醚0.023 2 mg/ml。

　　2.2  供试品溶液的制备取决明子药材粉末（过4号筛）约1g，精密称定，置索氏提取器中，加80%乙醇100 ml回流提取至无色，合并提取液，定容至100 ml，精密吸取25 ml提取液，经减压回收后，残渣加浓度为1 mol/L盐酸溶液40 ml回流水解3 h，然后用120 ml氯仿分4次回流萃取，30 ml/次，合并氯仿萃取液并加适量蒸馏水洗至中性，回收氯仿。残渣甲醇仿溶解并转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得［2，3］。

　　2.3  色谱条件色谱柱为Shim-pack CLC-ODS C18（6.0 mm ×150 mm,5 um）；流动相为甲醇－0.1%磷酸水溶液梯度洗脱；流速1 ml/min；柱温25℃；检测波长440 nm.

　　2.4  标准曲线的绘制分别精密吸取混合对照品溶液8 ，10，12 ，14 ，16 μl进样，测定峰面积 ，绘制标准曲线，计算混合对照品中各对照品的回归方程及线性范围，结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的回归方程分别为：Y = 814521X -20 442，Y = 1 110 506X - 7 296，Y=1431 202X + 4 274，Y =1 739 861X - 24 381，Y = 707 106X - 26 453，其线性范围分别为：0.170～0.339，0.186～0.371，0.176～0.352，0.170～0.339，0.186～0.371  μg。

　　2.5   精密度实验精密吸取混合对照品溶液10 μl，进样，测定各峰峰面积，连续测定5次，求得各峰面积值的相对标准偏差（RSD）分别为：芦荟大黄素0.7%，大黄酸1.8%，大黄素0.6%，大黄酚1.1%，大黄素甲醚1.4%。结果表明仪器精密度良好。

　　2.6  稳定性实验

　　2.6.1  对照品溶液稳定性实验精密吸取混合对照品溶液10 μl，进样，分别于0，2，4，8，12，24 h后重复进样 ，计算各成分峰面积值的相对标准偏差（RSD）分别为：芦荟大黄素0.9%，大黄酸0.8%，大黄素0.7%，大黄酚1.2%，大黄素甲醚1.3%。结果表明混合对照品溶液在24 h 内基本上是稳定的。

　　2.6.2  供试品溶液稳定性实验精密吸取供试品溶液10 μl，进样，分别于0，2，4，8，12，24 h后重复上述操作 ，计算各成分峰面积值的相对标准偏差（RSD）分别为：芦荟大黄素0.6%，大黄酸0.7%，大黄素1.3%，大黄酚0.6%，大黄素甲醚1.7%。结果表明供试品溶液在24 h内基本上是稳定的。

　　2.7  重现性实验  精密称取决明子药材5份，照“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试液，精密吸取供试品溶液10 μl，进样，测定各成分峰面积值，计算各成分平均含量及RSD值分别为：芦荟大黄素为0.0084%，RSD为0.8%；大黄酸为0.0079%，RSD为1.1%；大黄素为0.0313％，RSD为1.2%；大黄酚为0.1732%，RSD为0.7%；大黄素甲醚为0.0883%，RSD为1.3%。结果表明，该方法具有较好的重现性。

　　2.8  加样回收率实验  精密称取决明子药材6份，每份约0.5 g，精密称定，分别精密加入大黄酚对照品（50 μg/ml）15  ml。照“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试液，精密吸取供试品溶液10 μl，进样，测定大黄酚的峰面积。结果见表1。

　　表1  大黄酚回收率测定结果（略）

　　表1表明，大黄酚的平均回收率为100.94%，RSD值为2.12% 。表明该测定方法是合理可行的。

　　2.9  样品的含量测定取不同批次决明子药材粉末（过4号筛）各约1 g，精密称定。照“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试液，精密吸取各供试品溶液10 μl，按“2.3”项下色谱条件进样，混合对照品及样品色谱图见图1～2。测定对照成分峰面积，计算含量，即得。测定结果见表2。

　　图1  决明子混合对照品色谱图（略）

　　图2  决明子药材色谱图（略）

　　表2  样品含量测定结果（略）

　　3  结论

　　结果测得，决明子药材中含芦荟大黄素平均为0.0081%，大黄酸平均为0.007 9%，大黄素平均为0.030 6%，大黄酚平均为0.176 0%，大黄素甲醚平均为0.088 3%。

　　本文采用高效液相色谱法同时测定决明子药材中5种蒽醌类成分的含量，方法简便，分离度好，结果可靠，可用于控制决明子药材的质量。

　　【参考文献】

　　［1］ 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社,2005:98.

　　［2］ 杨黎燕.杨秉勤,郎惠云.决明子蒽醌提取方法的研究［J］.西部粮油科技,2003,28(2)：59.

　　［3］ 蒋午峻，王 巧，袁志芳,等. 高效液相色谱法同时测定决明子中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚［J］.河北医科大学学报,2006,27(4)：271.