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作者：刘东洋， 史国兵， 赵庆春
蜂房（Nidus Vespae）为胡蜂科昆虫果马蜂 Polistes olivaceous (De Geer)、日本长脚胡蜂 Polistes japonicus Saussure 或异腹胡蜂 Parapolybia varia Fabricius 的巢。2005年版《中国药典》中记载蜂房具有“祛风，攻毒，杀虫，止痛”的作用［1］。《中药大辞典》中记载蜂房药液具有“去腐、生肌、消炎、止痛等作用，并能促进创口早期愈合”［2］。近年来国内多篇文献报道蜂房临床疗效显著，大多数集中于抗肿瘤与抗炎两个方面，已有文献明确指出抗肿瘤物质基础在于它所含有的极性低的脂肪酸类［3］，而关于抗炎作用的物质基础研究报道甚少。
本科室研究发现，蜂房的水煎液具有抗炎活性，而正丁醇提取物抗炎活性明显，主要有效成分为酚酸类和少量的含氮类化合物，但没有进行关于蜂房抗炎成分的质量控制方法的研究。为了进一步对蜂房药材进行科学评价，本研究对16批蜂房药材进行了HPLC比较分析，首次建立了同时测定蜂房药材中主要成分没食子酸、对羟基苯甲酸和原儿茶酸含量的方法［4］，为蜂房药材质量控制提供了借鉴。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：Waters600E泵，WatersPAD996二极管阵列检测器；旋转蒸发仪（SB–1000,N–1000,日本东京理化株式会社）；紫外分光光度仪（UV–2501PC，日本Shimadzu公司）；电子分析天平（UV120D，日本Shimadzu公司）。高效液相色谱用试剂：甲醇(色谱纯)，水(三蒸水)，三氟乙酸(分析纯)；没食子酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号：110836-200302、110648-200318、110754-200307)。实验室用药材，由沈阳药科大学中药教研室孙启时教授鉴定为蜂房（Nidus Vespae）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为Kromasil ODS-C18(250 mm×4．6 mm，5 μm)；流动相为甲醇(A)水(三氟乙酸调pH至5)(B)；梯度洗脱程序：0 min (0% A)，15 min (8% A)，18 min (12% A)，30 min (15% A)，45 min (18% A)；体积流量：1.0 ml／min；检测波长254 nm；柱温25℃。色谱图见图1。
2.2 供试品溶液的制备称取剪碎的蜂房药材(辽宁沈阳)2 g，用20倍水煎煮3次，水煎液用滤纸过滤，所得滤液浓缩至约10 ml；将浓缩液醇沉12 h，之后过滤得醇沉液；醇沉液减压浓缩至无醇味，用水25 ml分次定量转移至分液漏斗中，正丁醇等体积萃取3次，萃取液合并，旋转蒸发至干，用甲醇溶解并定容至10 ml容量瓶中，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液的制备精密称没食子酸对照品8.0 mg、对羟基苯甲酸对照品7.6 mg和原儿茶酸对照品11.1 mg,分别置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶液并稀释到刻度，摇匀即得，作为对照品储备液。分别精密吸取上述贮备液1.0 ml，置同一10 ml量瓶中，用甲醇溶液并稀释到刻度，摇匀即得，作为对照品溶液。
2.4 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液0.04，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.5，1.8 ml，分别置于2 ml量瓶中，用甲醇溶液并稀释到刻度，摇匀，分别进样5 μl。以各成分峰面积为纵坐标（Y），质量浓度为横坐标（X）,绘制标准曲线，计算回归方程：Y没食子酸=8.97×106X+7 317.1, r=0.999 6,线性范围1.6～72.0 μg/ml；Y对羟基苯甲酸=1.95×107X-73 247,r=0.999 5,线性范围1.52～68.4 μg/ml；Y原儿茶酸=5.01×107X-169 012，r=0.999 8，线性范围2.22～99.9 μg/ml。
2.5 精密度实验取同一供试品溶液，分别连续进样6次，测定没食子酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸峰面积，结果RSD分别为0.41％，0.56%和0.72％，均小于2％，表明仪器精密度良好。
2.6 重复性实验取同一批蜂房样品6份（辽宁沈阳），按供试品溶液的制备方法制备成6份，分别进样5 μl，结果，没食子酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸峰面积的RSD分别为0.83％，0.74%和0.95％，均小于2％，表明方法重复性良好。
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