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作者：王蒨，鹿燕敏，薛小平，刘洪斌
白头翁为毛茛科植物白头翁Pulsatilla chinensis（Bge.）Regel的干燥根，味苦，性寒，归胃、大肠经。白头翁始载于《本经》，具有清热解毒，凉血止痢之功效，可用于治疗热毒血痢，阴痒带下，瘰疬，痈肿，秃疮等［1］。其主要有效成分为皂苷类成分，白头翁皂苷B4为其主要有效成分之一，其含量也较高。故本实验采用反相高效液相色谱法对其含量进行测定，对白头翁药材或制剂的质量标准研究具有重要意义。实验结果表明，该方法简便可靠，重现性好，为白头翁药材或制剂的质量控制提供了参考依据。
1 仪器与试剂
美国Waters高效液相色谱仪（515泵，2487紫外检测器，ChromStation色谱工作站），KQ3200型超声仪（昆山市超声仪器有限公司）。
白头翁皂苷B4对照品（中国药品生物制品检定所），白头翁药材由三九药业提供，甲醇为色谱纯（天津市康科德科技有限公司），水为自制重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.1%磷酸（28∶72）为流动相，流速为1.0 ml·min-1，检测波长为205 nm，柱温为30℃，进样量：10 μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品储备液的制备精密称取白头翁皂苷B4对照品1.47 mg，加甲醇定容至10 ml，制成每1 ml含白头翁皂苷B4 147μg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备白头翁药材粉碎后，精密称取药材粉末（过3号筛）0.12 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 ml，超声30 min，放冷，过滤，滤液置 50 ml量瓶中，用少量流动相洗涤容器及残渣，洗液并入同一量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，过0.2 μm滤膜即得。
2.3 系统适用性试验取供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，白头翁皂苷B4与相邻色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数不低于3 000（图1～2）。
2.4 线性关系考察取对照品储备液，按照不同比例稀释，使白头翁皂苷B4质量浓度分别为29.4，58.8，88.2，117.6，147 mg·L-1。分别取上述溶液各10 μl进样测定，记录色谱图。以对照品质量浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，回归方程为：Y = 2.8844X - 2.04 (r=0.999 9，n=5)。结果表明，白头翁皂苷B4质量浓度在29.4～147mg·L-1内呈良好线性关系。结果见表1。表1 标准曲线结果（略）
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