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高效液相色谱法测定地黄寡糖中水苏糖含量

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摘要:地黄首载于《神农本草经》,为玄科多年生草本植物(RehmanniaglutinoseLibosch)的根。地黄常被作为益智药物使用。地黄饮子治疗血管性痴呆39例,总有效率可达66。地黄饮子证明对中风患者的神经功能恢复具有良好的治疗效果[2]。...

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    地黄首载于《神农本草经》,为玄科多年生草本植物(Rehmannia glutinose Libosch)的根。地黄常被作为益智药物使用。地黄饮子治疗血管性痴呆39例,总有效率可达66.67%[1]。地黄饮子证明对中风患者的神经功能恢复具有良好的治疗效果[2]。熟地黄水煎剂可以改善AlCl3导致痴呆小鼠和大鼠的学习记忆功能[3]。尽管地黄的药理作用得到人们认可,但地黄发挥作用的具体成分并不清楚。由于以上地黄制剂在使用时均为其水溶性成分,因此,推断其发挥作用的应为水溶性成分。在此推论的基础上制备了地黄寡糖[4](Rehmannia glutinosa oligosaccharides,ROS),研究表明,ROS对缺血再灌导致的大鼠学习记忆损伤具有保护作用[4];对谷氨酸诱导的神经细胞损伤具有保护作用[5]。为进一步探讨ROS发挥药理学作用的物质基础,对ROS中的水苏糖含量进行了测定。

  1 仪器与试剂

    日本岛津液相色谱仪一套,包括LC-20ATVP色谱泵、RID-10A示差检测器、柱温箱、LCsolution 1.03色谱工作站;KQ-250B超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司生产;SYS-550型石英亚沸高纯水蒸馏器,由金坛市丹阳门石英玻璃厂生产;水苏糖对照品,购于北京慧德易科技有限责任公司,纯度99.8%。ROS,自制,批号为20080301,20080302,20080303,20080304,20080401,20080402。

  2 方法与结果

  2.1 溶液的制备

  2.1.1  对照品溶液的制备精密称取水苏糖对照品适量,加水制成每毫升含1.0 mg的溶液,即得。

  2.1.2  供试品溶液的制备即自制ROS,稀释10倍,用0.45 μm的膜滤过,作为供试品溶液。

  2.2  色谱条件

  色谱柱:菲罗门Rezex RPM-Monosaccharide Pb+ +8%(7.8 mm×300 mm);流动相:水;流速:0.8 ml/min;柱温:80℃,示差检测器,进样量:10 μl。结果表明供试品溶液在水苏糖位置上有相应的峰存在,且与其它色谱峰可以基线分离。表明水苏糖在此色谱条件下分离良好。理论塔板数按水苏糖计,应不低于3 000。色谱图见图1。      
  2.3 线性关系实验

  分别精密称取水苏糖对照品,加水配制浓度分别为0.20,0.40,0.80,1.60,3.2 mg/ml的溶液,按色谱条件分别进样10 μl,测得峰面积,以对照品浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,得线性回归方程为:Y=100 409X-3 340.9,r=0.999 5。结果表明水苏糖在0.20~3.20 mg/ml时,浓度与峰面积呈良好线性关系。

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作者: 安阳,杨菁,岳春丽,刘影 2010-10-2
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