益智药材中圆柚酮含量的高效液相色谱法测定

    中药益智，为姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实，主产于我国的海南和广东，为四大南药之一。其功效为温脾止泻，摄唾涎，暖肾，固精缩尿，主治脾寒泄泻，腹中冷痛，口多涎唾，肾虚遗尿，小便频数，遗精白浊［1］。我们的前期研究发现，益智石油醚提取部位为其缩尿作用的有效部位，并且通过气相色谱质谱联用分析，发现此部位中的主要化学成分为圆柚酮（Nootkatone）［2］。国外已有研究报道，从益智药材中分离得到的圆柚酮，在抗实验性胃溃疡、抑制脂多糖活化巨噬细胞中NO的产生和抑制由抗原引发的RBL2H3细胞的脱落等方面具有显著的活性，为益智药材的有效成分之一［3］。而对于益智药材中圆柚酮的含量情况还未见相关报道。为了更好地控制药材质量，我们采用高效液相色谱法建立了益智药材中圆柚酮的含量测定方法，并测定不同产地药材中圆柚酮的含量。

　　1  仪器与试药

    Agilent 1100高效液相色谱仪，HPChemStation 6.04软件包（美国Agilent公司）；赛多利斯Bp211DAG电子天平（德国Sartorius公司）；超声波清洗器CX100（北京医疗设备二厂）。圆柚酮对照品由美国Sigma公司提供(批号：10112423，纯度>98%)。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。不同产地的药材由成都中医药大学谢秀琼教授从各产地收集，并经成都中医药大学卢先明教授鉴定为姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实。

　　2  方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱为DiamonsilC18柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)；流动相为乙腈水(65∶35)；检测波长为235 nm；流速为1.00 ml·min-1；柱温为40℃。灵敏度为0.005AUFS。在选定条件下，圆柚酮与样品中其他色谱峰达基线分离，其理论塔板数(N)大于4 000。对照品溶液和供试品溶液色谱图见图1～2。

　　2.2  对照品溶液的制备

　　取圆柚酮对照品适量，精密称定，置25 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成含圆柚酮0.480 0 mg·ml-1的对照品溶液。

　　2.3  供试品溶液的制备

　　取益智药材，除去杂质及外壳，粉碎，过40目筛。取粉末约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇25 ml，称定重量，超声提取（360 W，35 kHz）30 min，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

　　2.4  线性关系考察

　　精密吸取圆柚酮对照品溶液(0.480 0 mg·ml-1) 0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 ml，分别置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样10 μl测定峰面积。以对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，则回归方程为：A=3 237.2C +4.33，r=0.999 9。表明圆柚酮在0.115 2～0.268 8 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

　　2.5  精密度实验

　　精密吸取上述对照品溶液10 μl，重复进样5次，峰面积RSD=0.20%，表明仪器的精密度良好。

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