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反相高效液相色谱法测定茄根中绿原酸含量

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摘要:本文探索建立了采用RP-HPLC测定茄根中酸性成分——绿原酸的定量分析方法。1仪器与试药Varian210分析型高效液相色谱系统(210型二元梯度泵、210型紫外检测器,美国Varian公司)。乙腈为色谱纯(fisher公司),水为二次蒸馏水(自制)。对照品:绿原酸,购自Sigma公司,纯度≥98%。...

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  茄根为土家族常用药物之一,来源于茄科茄Solamum melongena L. 的干燥根,具有祛风利湿、清热止血、散瘀消肿等功效。主治牙痛、风湿热痹、冻疮、脚气、血痢、便血等。茄根含有酚类、有机酸、生物碱、皂苷、鞣质等多种成分。实验表明酸性组分是茄根抗炎的主要有效部位, 对多种炎症具有很好的治疗效果[1]。目前有关茄根酸性成分的研究目前报道甚少。茄是我国主要蔬菜品种之一,全国各地广为种植。茄收获之后产出大量茄根。本文探索建立了采用RP-HPLC测定茄根中酸性成分——绿原酸的定量分析方法。该方法简便快速,待测组分分离度好,精密度及准确度高,稳定性好,可为茄根的深入开发利用以及质量标准的制订提供研究基础。

  1   仪器与试药

    Varian 210分析型高效液相色谱系统(210型二元梯度泵、210型紫外检测器,美国Varian公司);ME215S型十万分之一电子天平(德国Sartorius公司);SZ-93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂) ;KQ-500DB型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司);乙腈为色谱纯(fisher公司),水为二次蒸馏水(自制)。茄根:采自中国湖北长阳;对照品:绿原酸,购自Sigma 公司,纯度≥98%。

  2   方法与结果

  2.1  色谱条件YMC-Pack ODS-AA(150 mm× 4. 6 mm, 5 μm)色谱柱; 柱温30 ℃;流速1 ml· min-1;检测波长323 nm;进样量20 μl;流动相为乙腈(B)- 0. 5%甲酸水(A)梯度流动相,见表1。在优化的色谱条件下,对照品与供试品的保留时间一致(14. 7 min),供试品中绿原酸成分达到有效分离, 分离度大于1. 5。对照品以及供试品的色谱图见图1。表1  流动相(略)

  2.2   对照品溶液制备精密称取绿原酸对照品适量,加重蒸馏水制成每毫升含1 mg的绿原酸溶液,作为对照品溶液贮备液,低温保藏备用。

  2.3   供试品溶液的制备称取茄根粉末(60目筛,50 ℃烘干)约2 g,置10 ml容量瓶中,加入70%甲醇至刻度,室温下浸渍8 h,40 ℃超声2 h , 用70%甲醇补足溶剂至刻度。过滤,制成每毫升含0. 2 g的茄根溶液,作为供试品溶液,低温保藏备用。临用时以0. 22 μm滤膜滤过。

  2.4    线性关系考察分别吸取对照品贮备液适量,配制成0. 005, 0. 01, 0. 02, 0. 03, 0. 04 mg · ml-1的系列对照品溶液,按“2.1”色谱条件分别进样20 μl,记录色谱峰面积。以色谱峰面积(Y, mAU)为纵坐标,以对照品溶液浓度(X, mg · ml-1)为横坐标,进行线性回归,得对照品的回归方程:, Y=71.054X-0.115,r= 0.999 8。 线性范围0. 005~0. 04 mg · m-1。

  2.5   精密度实验精密吸取各对照品溶液20 μl,按“2.1”中色谱条件连续进样,测定平均色谱峰面积为12941685,计算RSD为1. 2%。表明仪器的精密度良好。

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作者: 2010-10-3
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