毛细管气相色谱法测定止咳枇杷颗粒中薄荷脑的含量

　止咳枇杷颗粒由枇杷叶、桑白皮、白前、百部、桔梗、薄荷脑、蔗糖等制成，具有清肺、止咳、化痰的功效，用于咳嗽多痰、支气管炎等。现行的部颁标准中药成方剂第二册WS3—B—0212—90质量标准中收载了该制剂，只作了定性鉴别，无定量检测方法。本文应用毛细管气相色谱法测定止咳枇杷颗粒中薄荷脑的含量，为止咳枇杷颗粒的质量控制提供依据。

　　1  仪器与材料
    　　
　　GC2010气相色谱仪（日本岛津）；GCsolution 气相色谱工作站；SPL毛细管柱进样口；Wax10毛细管柱（Supel co公司）（0.32 mm×30 m×0.25 μm）。
    　　
　　止咳枇杷颗粒（广州奇星药业有限公司），薄荷脑对照品（072800005，中国药品生物制品检定所）；水杨酸甲酯（110707200609，内标用，中国药品生物制品检定所），其余试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件
    
　　色谱柱： Wax10毛细管柱（0.32 mm×30 m×0.25 μm），柱温为110 ℃，进样口温度为250 ℃，检测器温度为250 ℃；FID检测器。载气为高纯度氮气，流速：1.0 ml/min，进样量为1 μL。薄荷脑、水杨酸甲酯（内标）的理论塔板数不低于5000。色谱图见图1。

　　A.薄荷脑对照品; B.样品; C.阴性样品

　　图1  气相色谱图（略）

　　Figure 1  Gas chromatograms

　　2.2  样品测定方法

　　2.2.1  内标溶液的制备  精密称取水杨酸甲酯适量，置500 mL量瓶中，用无水乙醇配制成0.223 9 mg/mL的溶液，摇匀，即得。

　　2.2.2  对照品溶液的制备  精密称取薄荷脑66.83 mg，置50 mL量瓶中，加内标溶液溶解并定容，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液5 mL，置20 mL量瓶中，加内标溶液溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液。

　　2.2.3  供试品溶液的制备  取本品适量，研细，精密称取本品5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液20 mL，超声20 min，取上清液用滤膜过滤，取续滤液，即得。

　　2.2.4  测定方法  分别精密吸取对照品和供试液各1 μL，注入气相色谱仪，测定薄荷脑对照品和水杨酸甲酯峰面积，计算校正因子，按内标法计算即得。

　　2.3  方法学考察

　　2.3.1  线性关系考察  精密吸取上述薄荷脑对照品储备液适量，用内标溶液制成薄荷脑质量浓度分别为0.668 3、0.528 3、0.325 1、0.261 2、0.103 9、0.051 7 mg/mL的系列溶液（内标溶液质量浓度为0.223 9 mg/mL），分别吸取上述溶液1 μL注入气相色谱仪，记录色谱图，以薄荷脑质量浓度为横坐标，以薄荷脑峰面积与内标峰面积之比为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=0.7134X+0.00005，r=1.000 0（n=6），结果表明薄荷脑在0.051 7～0.668 3 mg/mL范围内线性关系良好。

　　2.3.2  稳定性试验  取同一份供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、24 h进样测定，结果薄荷脑平均质量分数为0.1010%，RSD为0.30%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定。

　　2.3.3  精密度试验  取同一份供试品溶液，重复进样6次，结果供试品中薄荷脑平均质量分数为0.1009%，RSD为0.30%（n=6）。

　　2.3.4  加样回收率试验  取已知含量的样品6份，每份约2.5 g，精密称定，分别精密加入上述对照品储备液适量，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，依次测定，测得平均回收率为101.1%，RSD为2.0%，见表1。

　　2.3.5  重复性试验  取同一批号的止咳枇杷颗粒6份，按“2.2”测定方法测定含量，6份样品的薄荷脑含量的RSD为1.8%，表明本方法重复性较好。

　　2.4  样品测定
   
　　取3批样品，按照“2.2.3”项的方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件下进行测定，3批样品的质量分数分别为0.1089%、0.1125%、0.1250%。

　　表1  止咳枇杷颗粒加样回收率试验（略）

　　Table 1  Recovery of Zhike Pipa granule

　　3  讨论

　　3.1  色谱条件的选择
   
　　参考文献［1］，采用柱温：150 ℃、FID检测器温度：190 ℃、进样口温度：190 ℃的条件，薄荷脑峰与杂质峰分不开。参照部颁标准［４］改为柱温：110 ℃、FID检测器温度：250 ℃、进样口温度：250 ℃，薄荷脑峰和杂质峰分离良好。

　　3.2  提取溶剂的选择
    　　
　　参考文献［1～3］选用无水乙醇为提取溶剂，水杨酸甲酯为内标物。

　　3.3  提取方法的选择
    
　　比较了无水乙醇加热回流提取和超声提取2种方法对薄荷脑的提取效果，结果表明加入20 mL内标溶液回流0.5 h与加入20 mL内标溶液超声提取效果基本一致，薄荷脑质量分数分别为0.1002%和0.0972%，RSD为2.0%。考虑到超声20 min提取方法方便、快捷，为节约时间和成本，采用超声20 min的方法作为提取方法。

　　3.4  色谱柱的选择
    
　　比较Wax10毛细管柱和AT1毛细管柱的分离效果，结果Wax10毛细管柱气相色谱的峰形和出峰时间比较适中，而AT1不理想。

【参考文献】
  　　［1］ 张雪，邵燕虹，张慧敏.气相色谱法测定苍耳子鼻炎胶囊中薄荷脑和龙脑的报告［J］.医学综述，2008，14（20）：7913-7914.

　　［2］ 杨敏，刘吉金.气相色谱法测定蜜炼川贝枇杷膏中薄荷脑和苯甲醛的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2008，14（8）：32-42.

　　［3］ 陈月英，莫云燕，林子夏，等.毛细管气相色谱法测定止痒灵中的苯酚和薄荷脑［J］.广东药学院学报，2007，23（2）：245-246.

　　［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部部颁标准中药成方剂第二册［M］.北京：化学工业出版社，2002：216.