【摘要】目的: 寻找分离纯化半边旗抗
肿瘤有效成分5F 的新方法。方法: 提取分离出5F 精提物后, 以H60型硅胶为填料,采用不同的溶剂系统石油醚和丙酮的混合液, 氯仿和甲醇的混合液洗脱, 分离纯化5F。结果: 经
薄层色谱鉴定, 可以得到纯的5F。结论: 分别采用两种不同的溶剂系统洗脱硅胶柱, 可以有效地纯化半边旗抗肿瘤有效成分5F。
【关键词】半边旗; 纯化; 抽提
【中图分类号】R 062332 【文献标识码】A
半边旗(P teris sem ip inna ta) 是凤尾蕨科凤尾蕨属植物, 广泛分布于我国南方各省, 民间用于治疗菌痢、肝炎、肠炎、毒蛇咬伤等。其抗肿瘤有效成分之一5F,常与其他物质混在一起, 难于分开。本文介绍一种采用不同溶剂系统分离纯化5F 的新方法。
方法
半边旗全草洗净晒干经乙醇冷浸提取、过滤, 该祛掉浓缩滤液至原体积的一半, 浓缩液经活性炭脱色, 得粗提物。粗提物用硅胶柱层析, 氯仿和甲醇混合液梯度洗脱(体积比为99∶1～ 95∶5) , 分段收集、点板, 该祛掉相同的组分合并, 经浓缩, 重结晶后得到5F 的精提物(多含4F)。5F、4F 的结构式详见图1。
5F 的分离与纯化
5F 的精提物用丙酮溶解、拌硅胶、晾干与硅胶柱层析(4 cm ×80 cm ) , 石油醚和丙酮混合液梯度洗脱(体积比为4∶1～ 3∶1) , 分段收集, 点板、合并与浓缩得到6 个部分; 其中第6 部分再用硅胶柱层析, 氯仿-甲醇梯度洗脱(体积比为99∶1～98∶2) , 分段收集、点板、合并与浓缩得到5F 的纯品。
薄层色谱鉴别5F
取上述含有5F 的精提物1 m g, 分离得到的5F1 m g, 分别用1 mL 丙酮溶解, 制成1 g/L 的溶液,作为供试品溶液。另取标准品5F 加丙酮制成每1 mL含1m g 的溶液, 作为标准液。依照《中国药典》2000 年版一部附录(ÎB) 试验薄层层析法, 吸取上述三种溶液各2μL , 分别点于同一薄层层析板HF254 上, 以氯仿: 甲醇= 95∶5 展开, 取出, 晾干, 喷10% H2SO4-乙醇溶液, 加热至120℃。按照同样的方法用石油醚: 丙酮= 7∶3 展开, 取出, 晾干, 喷10%硫酸-乙醇溶液, 加热至120 ℃,。
讨论
利用以往常规提取工艺, 由于5F多和4F混在一起, 难于分开。本文的依据是色谱理论原理, 当分离度R > 1. 5 时, 相邻两斑点可达到基线分离的目的。由于石油醚ö丙酮对5F 和4F 的分离度R , 比氯仿-甲醇对5F 和4F 的分离度大, 而且能使5F 和4F 达到基线分离的目的, 因此选用石油醚ö丙酮系统来纯化5F 和4F 的混合物。但用此系统洗脱收集到的以5F 为主的混合物中, 含有少量的6F, 而氯仿ö甲醇系统对该混合物的分离度大, 优于石油醚ö丙酮系统, 因此需用氯仿-甲醇洗脱系统进行进一步的分离纯化。这样, 结合两种洗脱系统可达到纯化5F 的目的。由于4F 和5F 结构的相似性, 要大量制备5F 纯品还比较困难。本文只是从分离纯化的角度进行探索和尝试, 并为提取半边旗有效成分的工艺改进提供参考, 也从药物分析的角度提供标准品。
作者：龚先玲, 陈志红, 梁统, 梁念慈
来源：广东医学院学报
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