白癜风( vitiligo)是一种常见的后天性脱色素疾病,表现为皮肤黑色素减少,呈不规则或对称性白斑,其直接发病原因是患部黑色素细胞减少或消失[ 1 ]。白斑膏是由补骨脂、乌梅、白蒺藜等
中药经乙醇提取制成的外用膏剂,具有活血祛风、调和气血、增色染肤的功效,主要用于治疗白癜风。为了提高药品的质量,我们对其提取工艺进行了研究,现报告如下。
1 仪器与材料
CS930薄层扫描仪(日本岛津) ;硅胶G预制板(青岛海洋化工厂) ;补骨脂素(中国药口生物制品检定所) ;实验中所用试剂均为AR级;中药材均购自于广州市药材公司。
2 方法与结果
2.1 提取工艺条件考察 以乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数为考察因素,每个因素设置3个水平,以提取液中补骨脂素的含量为评价指标,筛选最佳工艺条件,因素水平见表1。
表1 醇提工艺试验因素水平设定
水平 A B C D
乙醇浓度(% ) 乙醇用量(倍) 提取时间( h) 提取次数
1 65 8 1 1
2 75 10 1.5 2
3 85 12 2 3
2.2 方法 按处方比例,称取药材,均分为9份,按正交实验表L9 (34 )安排试验和拟定工艺路线进行提取工艺研究。分别收集提取液,回收乙醇,定容,测定补骨脂素含量。实验结果见表2、3。
2.3 标准曲线的绘制 精密称取补骨脂素对照品2.10 mg,加甲醇溶解,定容于2 ml容量瓶中,即得浓度为1.05 mg/mL的补骨脂素对照品溶液。
用微量进样器精密吸取补骨脂素对照液1、3、5、7、9μl,点于硅胶G薄层预制板上,以苯-乙酸乙酯(9 ∶1)为展开剂上行展开,展距15 cm,取出,挥干溶剂,于紫外分析仪365nm下
观察荧光,定位后进行薄层扫描(扫描条件:λmax = 300 nm,单波长反射式锯齿扫描,狭缝1.2 mm ×1.2 mm, SX = 7,灵敏度中) 。以点样量为横坐标,以峰面积的积分值为纵坐标作
图,得标准曲线图。回归方程: Y = 27 568.7X215 312.6,相关系数r = 0.998 6。结果表明补骨脂素在1.05～9.45μg线性关系良好。
2.4 供试品溶液的制备 将9种工艺制备的提取液,分别精密吸取50 ml,加氯仿100 ml,分4次萃取, 25 ml /次,合并,萃取液浓缩至适量,定容于2 ml的容量瓶中,作为样品供试液。
2.5 测定法 分别精密吸取上述对照品溶液5μl与供试品溶液5～10 μl,取样点于硅胶G薄层板上,以苯2乙酸乙酯(9 ∶1)为展开剂上行展开,展距15 cm,取出,挥干溶剂,于紫外分析仪365 nm 下观察荧光。定位后进行薄层扫描(扫描条件同上) ,结果见表2。
2.6 最佳工艺验证 按正交试验结果的最佳工艺方案重复试验3次,结果见表3。
表2 醇提正交试验设计及结果
试验 因素
编号 A B C D 结果( ‰)
1 1 1 1 1 0.332
2 1 2 2 2 0.755
3 1 3 3 3 0.936
4 2 1 2 3 1.023
5 2 2 3 1 0.807
6 2 3 1 2 1.082
7 3 1 3 2 1.536
8 3 2 1 3 1.328
9 3 3 2 1 0.954
K1 2.023 2.891 2.742 2.093 ΣY =81753 /9 =01972 6
K2 2.912 2.890 2.732 3.373
K3 3.818 2.972 3.279 3.287 GT = 81512 8
R 0.599 0.028 0.182 0.426
SS 0.537 0 0.001 5 0.065 3 0.341 3
表3 方差分析
方差来源 偏差平方和 自由度 均方 F值 P值
A 0.537 0 2 0.2685 358 < 0101
B 0.001 5 2 0.000 75 1 > 0105
C 0.065 3 2 0.032 7 43.53 < 0105
D 0.341 3 2 0.170 7 227.5 < 0101
误差 0.001 5 2 0.000 75
注: F0105 (2, 2) = 19.00; F0.01 (2, 2) = 99.00
表4 最佳工艺重复试验结果
样品 补骨脂素(%) X RSD%
1 1.822
2 1.786 1.804 0.997 8
3 1.804
3 讨论
3.1 白斑膏主要是利用补骨脂经紫外光过度照射以引起光感性皮炎的原理对白癜风进行治疗,故在提取工艺设计时,以补骨脂素的含量为考察指标,采用L9 (34 )正交试验优选提取工艺。
3.2 从表2可见,影响提取效果的主要因素依次为A >D >C>B,即为乙醇浓度、提取次数、回流提取时间、乙醇用量;从表3可见,每个因素选择3个水平进行最佳工艺考察,得到最佳方案为A3B1C3D2 ,即选择85%乙醇作为提取溶剂,加入中药量8倍的乙醇,回流提取2次,每次2 h。
3.3 本提取工艺易于重复,所得药液真空浓缩至相对密度为1.3～1.4的清膏符合
制剂要求,该提取工艺合理,可行。
作者：
2008-4-22