马俊凤 ，李红兵 ，王友兰 :高效液相色谱法测定保肾合剂中大黄素含量

(1．山东省青岛市肿瘤医院，山东青岛  266043；  2．山东省青岛市药品检验所，山东青岛  266071)
    保肾合剂由黄芪、党参、大黄、白术、甘草、丹参等16味中药组成，具有补肾益气、活血化瘀、祛毒保肾等作用，主要用于化疗期间保护肾脏功能，提高机体免疫力。该合剂为青岛肿瘤医院自制制剂，为有效控制其质量，笔者用高效液相色谱法(HPLC法)对主要成分大黄的活性成分大黄素进行了含量测定，报道如下。
l  仪器与试药
    Asilcnt 1100型高效液相色谱仪。大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110756—200110)；保肾合剂(青岛市肿瘤医院)；甲醇、磷酸为色谱纯，其他试剂为分析纯。
2  方法与结果
2．1  色谱条件
    色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(250 mm x4．6 mm，5μm)；流动相：甲醇一0．1％磷酸溶液(85：15)；测定波长：254 llm；柱温：40℃；流量：1．0mL／min；进样量：5μL。理论塔板数按大黄素计算应不低于3000。
2．2  溶液制备
    精密量取本品10 mL，置25 mL量瓶中，加乙醇定容至刻度，摇匀，离心，精密量取上清液10 mL，加盐酸1．5 mL，摇匀，置水浴中加热回流l h，立即冷却，用氯仿强力振摇提取4次，每次15 mL，合并氯仿提取液，置水浴蒸干，残渣用无水乙醇一乙酸乙酯(2：1)溶解，并转移至10 mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0．45μm)滤过，取续滤液即得供试品溶液。精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每lmL中含大黄素4．lμg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。
2．3  方法学考察
    空白干扰试验：按处方比例及工艺配制缺大黄的保肾合剂，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液，依法测定。结果阴性对照品溶液对测定无干扰(图1)。
  线性关系考察：精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进样测定。以峰面积积分值为纵坐标、大黄素进样量力横坐标绘制标准曲线，回归方程为r：0．173+10．141x，r=1．000 O(n=5)。结果表明大黄素进样量在O．008 2一O．041 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。
    精密度试验：精密吸取对照品溶液5 p,L，重复进样5次，测定。结果大黄素峰面积积分值的RSD：0．17％。
    重现性试验：取供试品(批号为20030116)5份，依法测定。结果大黄素含量的RSD：0．51％。
    稳定性试验：精密吸取对照品溶液，每隔一定时间进样1次，测定。结果大黄素峰面积积分值的RSD：0．32％，表明大黄素对照品溶液在48h内稳定。
    加样回收试验：精密量取已知含量的保肾合剂(批号为20030116)适量，分别精密加入不同体积的大黄素对照品溶液，按上述色谱条件测定，结果见表l。
2 4  样品含量测定
    分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪测定。结果批号为200301l6，20030301，20030302的样品中大黄素的含量分别为O．011，0．013，0．012 μg／mL。
3  讨论
3．1  提取分离条件的选择：保肾合剂中大黄素的提取、测定主要根据其理化性质，考虑合剂的特性，参照文献[1—2]进行，提取方法则根据试验结果确定。
3．2  溶剂的选择：参照2000年版《中国药典(一部)》，用乙醇、甲醇作为溶剂。根据所得色谱峰及回收率测定结果，确认乙醇可达到很好的提取、分离效果。
3．3  用HPLC法测定保肾合剂中大黄素的含量，分离效果良好，无杂质干扰，可有效控制本制剂的质量。根据试验结果，规定每1 mL保肾合剂中大黄素含量不得少于0．010 μg比较合理。