大蒜等12种中草药的体外抑菌实验

      大蒜是人们日常饮食中的重要调味品，具有健胃开食、增进消化的功能，其辛辣成分大蒜素对多种病原菌及深部感染真菌有抑制作用[1，2]，在禽类及水产养殖方面对养殖动物能起到防病保健和促进生长的作用[3，4];此外，大蒜还有良好的抗氧化作用，可加入食用油延长其保质期[5];在疾病预防方面，经常进食大蒜可以提高血浆及红细胞抗氧化性能[6]，并能有效降低血压，预防动脉粥样硬化和心脑血管疾病[7，8];大蒜还可以抑制结肠癌细胞的生长[9]，也可通过抑制硝酸盐还原细菌繁殖和亚硝酸盐合成预防胃癌的发生[10];除大蒜素外，大蒜还含有大蒜多糖等多种保健成分，可以和银杏叶制成天然保健饮料[11，12]。辣椒也是一种重要的日常调味品，有增进食欲和维持消化道正常菌群平衡的功能;辣椒碱对大肠杆菌、酵母等多种病原菌有抑制作用[13，14]。大蒜中大蒜素和辣椒中辣椒碱有抑菌作用，这并不排除大蒜、辣椒中其它抑菌成分的存在，也不能完全代表它们的抑菌性能。本实验对辣椒水煎剂和大蒜乙醇制剂的抑菌性能加以研究，以期完善这两种保健调味品的抑菌性能研究。黄柏、蒲公英等常见中草药常用于微生物性传染病的治疗，也可用作防病饲料添加剂，但它们对常见病原菌的抗菌谱及抗菌浓度尚不明确，限制了它们在中医药和饲料添加剂方面的应用。在此，我们探讨了大蒜、辣椒、黄柏等12种药用植物提取物对大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌等常见病原菌的抗菌谱及最小抑菌浓度(MIC)，希望能为它们的医药用途及生产应用提供科学依据。

    1材料与仪器

    1.1菌株和培养基大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌为本实验室存留;大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌和枯草杆菌培养基为营养琼脂No.3，金黄色葡萄球菌培养基为葡萄球菌琼脂110和营养琼脂No.3。

    1.2仪器垂直流超净工作台，DH3600A型电热恒温培养箱，手提式高压灭菌锅，2D-85型恒温振荡器，TU-1800型紫外可见分光光度仪，ZD-85型恒温摇床，AB204-S基础型电子分析天平等。

    1.3中草药大蒜和辣椒购自农贸市场，其它中草药购自中药店。

    2方法

    2.1大蒜素提取物的制备将去皮大蒜100g捣碎研细，乙醇浸提，浸提液挥发浓缩至200ml，获得50%的大蒜浸提物，并用乙醇作二倍系列稀释。

    2.2辣椒、黄柏等煎剂类中草药提取物制备中草药粉碎过筛，进行干物质含量(DMC)测定;各中草药粉50g(以干物质量计)水煎制剂并浓缩至100ml，提取物浓度为50%，用水做二倍系列稀释。

    2.3药敏纸片抑菌实验[15]以6mm直径滤纸片在各中草药各稀释梯度浸提液中浸泡并晾干，置于涂有特定菌量的平板分区内，37℃过夜培养后记录各中草药提取物各稀释梯度对几种病原菌的抑菌情况，记录抑菌圈直径及最小抑菌浓度(MIC)，各定性及定量抑菌实验均重复3次。

    2.4培养基对中草药抑菌效果的影响金黄色葡萄球菌分别涂布于营养琼脂No.3和葡萄球菌琼脂110，以药敏纸片法观察各中草药制剂对两种培养基上金黄色葡萄球菌的抑菌效果。

    2.5涂布菌含量的确定涂布菌原液制作10倍稀释梯度系列，以平板涂布法计算涂布菌液浓度。

     3结果

    3.1涂布菌含量测定以上述方法测定了各病原菌涂布菌液浓度。大肠杆菌2.8×108/ml;副伤寒沙门氏菌1.1×108/ml;金黄色葡萄球菌4.1×108个/ml;枯草杆菌1.3×106个/ml。

    3.2大蒜提取物的抑菌结果从表1可以看出，大蒜乙醇提取物对副伤寒沙门氏菌和生长于葡萄球菌琼脂110上的金黄色葡萄球菌有抑制作用，MIC分别为6.25%和12.5%;在本研究浓度范围内对大肠杆菌和枯草杆菌无抑菌作用。表1大蒜提取物对病原菌的抑菌效果

    3.3辣椒提取物的抑菌结果表2显示，辣椒浸提物对副伤寒沙门氏菌和生长于葡萄球菌琼脂110上的金黄色葡萄球菌有抑菌作用，MIC均为12.5%;对大肠杆菌和枯草杆菌未发现抑菌作用。表2辣椒提取物对病原菌的抑菌效果。

     3.4黄柏等中草药制剂抑菌结果黄柏、连翘等常见中草药的抗菌谱及最小抑菌浓度(MIC)(见表3)，其中黄芪、蒲公英、秦皮、乌梅、黄芩等中草药为对4种病原菌几乎都有抑菌作用，且抑菌作用较强，尤其是乌梅和秦皮对各种病原菌都有很强的抑菌作用。所选中草药中，只有青黛对4种病原菌均不抑制。表3黄柏等中草药对病原菌的最小抑菌浓度(MIC)%

    3.5培养基对中草药制剂抑制金黄色葡萄球菌效果的影响培养基对中草药抑菌效果有影响。从表4可以看出，各类中草药制剂对葡萄球菌琼脂110上的金黄色葡萄球菌抑菌效果明显好于生长于营养琼脂No.3上的抑菌效果，其中大蒜、辣椒、秦皮、远志制剂对前者抑菌作用明显，而对后者没有抑菌作用;大黄、乌梅、黄芩等制剂对前者的抑菌效果也显著好于后者。这种抑菌效果的差异可以从金黄色葡萄球菌在两种培养基上的生长情况来说明，用两种培养基以平板计数法分别测定涂布菌液浓度，接种量完全相同，通过营养琼脂No.3测得菌液浓度为4.1×108个/ml，而用葡萄球菌琼脂110所得结果为3.1×108个/ml，说明营养琼脂No.3更适合金黄色葡萄球菌的生长，因而各类中草药对其上金黄色葡萄球菌抑菌效果略差一些，这与李仲兴等(2000)的结论一致[16]。从另一角度也表明，培养基和涂布菌量对药敏纸片法中草药抑菌效果有较大影响。表4培养基对中草药抑制金黄色葡萄球菌效果的影响%

    4讨论

    4.1大蒜和辣椒的抑菌成分大蒜和辣椒均有特定的抑菌作用，但其抑菌成分尚未完全确定。郭丽等[13]曾对辣椒的抑菌性能加以研究，认为水溶性辣椒碱为其抑菌成分，本实验中辣椒的水煎剂有良好的抑菌作用，进一步印证了前人的研究，但也不排除辣椒中其它辣椒红素等水溶性抑菌成分的存在。陈晓月等[1]对大蒜素抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌效果加以研究，证明大蒜中醇溶性大蒜素参与大蒜抑菌作用，本研究中大蒜乙醇浸提剂对金黄色葡萄球菌和副伤寒沙门氏菌均有较强抑菌作用，但未见对大肠杆菌的抑制效果，可能与大蒜乙醇浸提物中大蒜素的含量较低有关。

    4.2培养基对中草药抑菌作用的影响培养基为微生物的生长繁殖提供营养成分和合适的环境条件，微生物在不同的培养基上生长性能差别较大，在最适培养基上或天然培养基上生长繁殖旺盛。中草药等抗菌因子对微生物的抑制效果受到其生长环境的影响，培养基越适合，微生物生长越好，抑菌作用就越弱。在进行各种抑菌实验时，应尽可能确定培养基类型及涂布菌量，以便于不同研究结果的比较;培养基对抑菌效果的影响从另一方面也说明了体内和体外抑菌效果的差异，各类抗菌制剂通过体外实验获得的抗菌谱及剂量结果必须在临床上进一步验证确定，方可在体内有效抑制病原菌。

    辣椒、大蒜在体外可抑制副伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌，黄柏、连翘等常见中草药对多种病原菌有较强抑制作用，培养基显著影响中草药体外抑菌效果。