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中药指纹图谱
色谱指纹图谱分析技术用于鉴别中药川芎产地
来源:药分网
摘要:[摘要]目的:研究用于鉴别川芎产地的色谱指纹图谱分析技术。方法:用HPLC获得川芎药材的色谱图,从中提取15个色谱峰,再用主成分分析、聚类分析、相似度计算以及Fisher因子分析等方法进行考察。结果:不同产地川芎的色谱指纹图谱存在明显的差异,所提取的15个色谱峰可用作指纹特征。结论:色谱指纹图谱分析技术可用于......
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[摘要] 目的:研究用于鉴别川芎产地的色谱
指纹图谱
分析技术。方法:用HPLC获得川芎药材的色谱图,从中提取15个色谱峰,再用主成分分析、聚类分析、相似度计算以及Fisher因子分析等方法进行考察。结果:不同产地川芎的色谱指纹图谱存在明显的差异,所提取的15个色谱峰可用作指纹特征。结论:色谱指纹图谱分析技术可用于川芎药材的产地鉴别。
[关键词]
中药
;川芎;色谱指纹图谱;中药质量控制
川芎为伞形科植物的干燥根茎,始载于《神农本草经》,列为上品。《图经本草》指出:“以蜀川为胜”,故名川芎。川芎主产于四川灌县、重庆和都江堰市等地,以灌县产为最佳,在江西、湖北及云南等地亦有栽培,其中江西所产也称抚芎,云南所产也称云芎。不同产地川芎的药效并不完全相同,清宫医案中就已将川芎和抚芎区别使用,御医临证处方颇有不同[4]。目前,市场上不同产地的川芎很容易混淆,使用者多据性状鉴别,这对经验依赖性强。本文用高效液相色谱对川芎的水溶性化学组分进行检测,提取谱图中15个色谱峰作为指纹峰,用聚类分析、主成分分析及相关主成分分析进行考察,并用相似性度量方法定量鉴别。研究结果表明,这-Q个色谱指纹峰组成的指纹特征可用于鉴别川芎的一些产地。
1 实验部分
1.1 生药样品来源
由全国各代表性产地采集21个川芎药材,经浙江中医学院周大兴采集、鉴定为川芎的根茎,其中1-4号为云南玉溪产,5-8号四川灌县产,9-12号湖北咸宁产,13-16号江西九江产,17-20!&*号市场统货,21号市场购进的劣质货。
1.2 仪器及色谱操作条件
高效液相色谱仪:Agilent型,美国Agilent公司;色谱柱:Shimadzu VP-ODS,150mm×4.6mm,日本Shimadzu公司;流速0.5mL/min;进样量:20uL;紫外检测器:254nm;室温操作。线性梯度洗脱,流动相A为水,B为甲醇,梯度程序如下:0-20min,B的体积百分比由0%增至6%;20-45min,B的体积百分比由6%增至60%;45-60min,B的体积百分比由60%增至90%;60-70min,B的体积百分比由90%增至100%。双蒸水,甲醇为色谱纯;其余试剂均为分析纯。
1.3样品测定及其方法学考察
样品粉碎后,过200目筛,精密称取1g,分别用水30ml和20ml煮沸回流提取2次,每次30min,合并提取液,定容至50ml,过0.45um的滤膜后,进样20ul,得色谱图。
连续5次进样,以图1(a)中.号峰为例,测定其峰面积值,得RSD为0.56%,其他峰的峰面积RSD均为<1%,保留时间RSD<5%,表明测定方法的精密度较好。
取同一样品5份,按前述方法分别提取后进样,以图1(a)中7号峰为例,测定其峰面积值,得RSD为2.3%,其他峰的峰面积RSD均为<2.8%,保留时间<0.5%,表明测定方法的重复性较好。
1.4 数据处理
获取不同产地川芎药材样品的色谱图,采集图1所示15个共有色谱峰,计算峰面积百分比数据,结果存入计算机。数据处理采用matlab5.3软件,程序自编。
2结果与讨论
2.1 主成分分析
图2是前两个主成分的得分图,图中每个点对应1个样品。由图知,云南玉溪产1-4号、四川灌县产5-8号以及湖北咸宁与江西九江产9-16号药材样品分别聚集成类,表明这15个色谱指纹峰能较好地表征各产地川芎药材的差异。另外,1-4号样品分布较聚集,提示云南玉溪产不同样品间化学组成差异可能相对较小;9-12号样品较为分散,提示湖北咸宁产不同样品间化学组成差异相对较大。由图还知,17-20号样品与湖北和江西产川芎药材样品较为相近,21号样品则与云南玉溪产川芎药材样品更接近。
2.2 聚类分析
图3是21个样品的系统聚类谱系图。由图可知,云南玉溪产和四川灌县产药材各自聚为一类,而湖北咸宁产与江西九江产药材同聚为一类。市场统货17-20号样品与湖北和江西产药材聚为一类,21号样品与云南玉溪产药材聚为一类,这与前述主成分分析结果一致。
2.3相似度计算
将1-4号样品色谱图中15个指纹峰的面积值分别计算平均值,组成云南玉溪产药材标准指纹图谱的数据矢量,并计算所有样品指纹图谱与该标准指纹图谱的相似度。同理,建立其它产地的标准指纹图谱,计算其与各样品指纹图谱间的相似度,结果见表1。
由表1知,同产地药材指纹图谱之间的相似度都在0.95以上,这表明相同产地川芎样品间相似程度较高。除湖北和江西产川芎指纹图谱之间相似度较高外,其余不同产地间药材指纹图谱相似度都在0.7以下。另外,由表1知,21号市场劣货与云南玉溪产药材标准指纹图谱相似度最大,接近0.9,推测可能产自云南。市场统货17-20号的指纹图谱与湖北和江西产药材指纹图谱相似度均在0.95以上,需进一步鉴别。
2.4 Fisher因子分析
采用Fisher因子分析法进一步分辨湖北咸宁产和江西九江产川芎药材。Fisher因子分析法是主成分分析的一种改进方法,它在提取药材产地的Fisher 因子(Fisher factor,FF)时不仅考虑谱图中谱峰的变化因素,还考虑谱峰变化与药材产地的相关性,故特征提取能力更强。图4为前两个Fisher因子的得分图。由,在Fisher因子得分图中很容易区分两者,江西九江产川芎样本均在图左方,湖北咸宁产川芎样本则落在图右方。市场统货与湖北咸宁产药材聚在一起,推测它们可能产自湖北,这与市场统货的标示一致。
3 结论
本文将高效液相色谱法与模式分类技术相结合,形成一种鉴别川芎药材产地的色谱指纹图谱分析方法。研究结果表明,所得色谱图中的15个色谱峰可作为指纹特征,用于鉴别川芎药材的多个产地。
作者: 2006-3-27
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相关主题关键词
色谱
指纹
图谱
川芎
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