李永吉,蔡亚平,车欣颖
摘要:目的:用高效液相色谱-紫外(HPLC-UV)法对心肌康注射液中丹参部分
指纹图谱中的酚酸类成分进行了定性和定量分析。方法:液相色谱条件为色谱柱Novapark R C18,3.9×150mm ,4um。所用洗脱剂均为色谱纯: (A)1%磷酸水溶液;(B)甲醇(美国Dikma公司)。以Waters2996检测器检测,检测波长269nm ,洗脱80min ,流速1.0ml/ min ,柱温30℃,灵敏度2AUFS。结果:得到了丹参供试品指纹图谱,并对其酚酸类成分进行了定性和定量分析。结论:方法简便、准确、重现性好。
关键词:指纹图谱;相似度;回收率;精密度
心肌康注射液是一种疗效确切、效果显著的
中药注射剂,由丹参和黄芪两种中药组成。使用传统的紫外法不能对其成分进行快速而准确的定性和定量分析,笔者采用高效液相指纹图谱法,对丹参类成分一一进行了分析,取得了显著成果。
1 实验材料
1.1 仪器与试药
美国Waters公司高效液相2695 色谱仪: 600泵,Waters2996 检测器,Millennium32 色谱工作站; 色谱柱:Novapark R C18,3.9mm×150mm,4um。所用洗脱剂均为色谱纯: 甲醇(美国Dikma 公司) ,水(娃哈哈纯净水) ,磷酸(分析纯,产于天津化学试剂厂) 。
1.2 材料与对照器
丹参来源于唇形科鼠尾草属植物Salciamiltiorrhiza Bge 的干燥根,产于天士力的丹参药材基地。丹参素和原儿茶醛购于中国药品生物制品检定所;迷迭香酸和丹酚酸B均为自制,纯度大于96%。
2 实验部分
2.1 供试品的制备 取5g药材,加入10倍量的水,置索氏提取器中,在100℃水浴中回流提取2h ,趁热过滤药液,将滤液蒸干,用适量甲醇超声溶解,定容置25ml 容量瓶中,过滤即得0.2g生药/ ml 的供试品溶液。
2.2 对照品溶液的制备
将迷迭香酸、原儿茶醛、丹参素、丹酚酸B对照品分别用甲醇定容制成0.98mg/ml,0.041mg/ml ,0.776mg/ ml ,0.3mg/ml对照品溶液。
2.3 测定方法
2.3.1 色谱条件
用甲醇-水梯度洗脱,检测波长280nm,洗脱80min,流速1.0ml/min ,柱温30℃,灵敏度2AUFS。流动相为甲醇-1%磷酸梯度洗脱,波长269nm ,洗脱时间50min。缓冲液和甲醇使用前须以0.45um滤膜过滤,超声脱气。
2.3.2 丹参标准曲线的制备
将2.2 制得的对照品溶液按照一定比例注入色谱仪中,测得峰面积积分值,以对照品质量为横坐标,以峰面积为纵坐标,得到:原儿茶醛标准曲线方程:
Y= 5.1 ×1000000X + 7.3 ×100000 r=0.9997
丹参素标准曲线方程:
Y= 4.7 ×100000X + 4.4 ×10000 r=0.9998
迷迭香酸标准曲线方程:
Y= 1.1 ×1000000X + 1.5 ×1000000 r=0.9994
丹酚酸B 标准曲线方程:
Y= 1.4 ×1000000X + 6.3 ×10000 r=0.9996
2.3.3 精密度实验
取原儿茶醛、丹参素、迷迭香酸和丹酚酸B对照品溶液5μl 在选定色谱条件下重复进样5次,计算相对标准偏差RSD(%)为1.48%～2.96%。
2.3.4 重现性实验
精密吸取注射剂200205号样品5份,按“按样品含量测定”项下方法分别测定原儿茶醛、丹参素、迷迭香酸和丹酚酸B 的含量,计算相对标准偏差RSD(%)为1.5%～2.95%。
2.3.5 回收率实验
精密称取注射剂200206号,已知原儿茶醛(Ⅰ) 、丹参素( Ⅱ) 、迷迭香酸( Ⅲ) 和丹酚酸B ( Ⅳ) 含量的样品0.192、1.082、1.115、10.920mg ,加入适量对照品,用甲醇定溶于10ml容量瓶中,按标准曲线项下方法进行HPLC 测定,计算回收率在96.5%～102%之间。
2.3.6 含量测定
精密吸取丹参供试品液10μl ,注于液相色谱仪中测量,得十批
制剂的原儿茶醛、丹参素、迷迭香酸、丹酚酸B的峰面积积分值,由线性方程求得相应的含量。
3 结论
通过建立丹参注射剂指纹图谱来对丹参提取液中的主要成分进行定性后定量分析,速度快、误差小、精密度高、效果显著。
参考文献:
[1] 中国药典委员会，中国药典(一部) 2000 年版[M]，北京:化学工业出版社,2000.6,7,276
[2] 谢培山，中医药文化与现代质量控制[J]，中国中西医结合杂志,1998,18(11):645.
作者：
2006-3-27