本法用甲醇-水为流动相，在C18反相柱上建立了陆英中具有乌索酸含量测定的高效液相色谱法，以95%乙醇为溶剂处理样品具有提取率高、色谱干扰小、物质分离效果好的优点，本法简便易行、快速准确，其最小检出限为0.2ug。不同浓度水平检测结果日间、日内相对误差小于4.0%。
关键词：陆英草 乌索酸 高效液相色谱 含量测定
陆英（Herba Sambuci Chinensis ）系为忍冬科接骨木属植物，生于山坡、路旁、溪边、荒野灌丛中。产于长江以南地区。 据报道[1]陆英草含氯原酸、α-香树脂素棕榈酸酯（α-amyin palmitate）、乌索酸、β-谷甾醇、豆甾醇、油菜甾醇、硝酸钾、黄酮、鞣质等。目前其它
中药材乌索酸含量的测定多采用比色法及薄层扫描[2]以及衍生化法气相色谱检测[3]，其操作繁琐，显色及前处理误差大，费事费力。
本文采用高效液相色谱法用甲醇-水为流动相，检测波长210nm，在C18反相色谱柱上建立了其含量的测定方法，具有简便可行、准确、快速、物质分离效果好的优点，重现性好，适应范围广，利于对陆英草的准确、深入研究。
实验部分
一、 仪器设备及试剂
Waters 600E Hplc系统，UV-2487 可变波长检测器 ，20ul定量环，M32数据处理工作站。
乌索酸对照品：中国医学科学院药物研究所 95%乙醇（AR） 甲醇（AR） 水
二、实验方法
1、色谱条件 色谱柱:Waters -ODS 150×4.6 mm (5um)；
流动相：甲醇-水 （90：10）； 流速：0.8 ml/min
UV波长：210nm ；量程：0.005 AUFS ；温度：25℃
数据处理：峰面积外标定量。
2、样品处理
（1）将原料（樟树医药公司）的叶粉碎过筛并恒重。
（2）称取样品10克，置索氏提取器中，加95%乙醇回流提取8小时，提取液浓缩定容于100毫升的容量瓶中，取上清液约5毫升过针式过滤器过滤，取滤液待测。
3、标准曲线的确定
分别吸取配好的5.0mg/ml乌索酸标准液0.4、0.8、1.6、2.8、3.6ml置于10ml容量瓶中，用甲醇稀释成 0.2、0.4、0.8、1.4、1.8mg/ml系列标准溶液，在选定的色谱条件下，重复进3次每次20ul,以标准品峰面积与浓度关系得出回归方程：
Y=3.35 E+005X+8.74E+003 R=0.9999
4、样品测定
将预处理好的待测样品液进样20 ul 检测，通过软件操作的得出浓度值。
三、结果
1、乌索酸对照品与陆英样品的色谱图1
2、方法重现性 用两个浓度水平进行连续和间隔时间及连续3天测定，考察方法重现性。结果：其最大相对标准偏差小于4.0%。
2、加标回收率 吸取5.0mg/ml乌索酸标准液 0.8、1.6、3.6各三份，分别加入原料样品10克，按前法操作，测定结果，计算回收率结果为99.9%-100.8%，平均100.4%，RSD为1.0%。
讨论
1、迷迭香中的乌索酸是非极性五环三萜类酸，在C18反相柱上有较大的保留值，以甲醇和水二元体系作为流动相，甲醇浓度与极性相近共存物质的分离及峰形有显著影响，本法选定比例是考虑实际样品组分分离确定的，对于其它品种样品可作适当的调整。
2、检测波长 我们进行了波长扫描，乌索酸在205nm处有最大吸收峰，本法采用210nm，恒流比流动相洗脱对检测无影响。
3、本法检测出陆英草中平均含0.28%的乌索酸。
4、本法简便、易行，准确快速。
参考文献
1 陈武，张建慧等，陆英抗肝炎活性研究，南昌大学学报（理科版），2001，25（2）：165-167
2 李培毅，牛艳艳，贾力莉，冯玛莉，武玉鹏。薄层扫描检测夏枯草中熊果酸含量 山西中医学 院学报 2001，1（2）：54-55
3 闫花丽，赵陆华，朱丹妮，丁黎，衍生化气相色谱法测定夏枯草中齐墩果酸和熊果酸含量。中国中草杂志 1999，24（12）744-746
作者：
2006-4-1